Effet du lait fermenté contenant la souche Shirota de Lactobacillus Casei sur la sarcopénie chez les personnes âgées

1. Inscription des sujets La définition de la sarcopénie est basée sur l'algorithme de l'Asian Working Group for Sarcopenia (AWGS).

1. Masse musculaire : mesurée à l'aide d'Inbody S10 et normalisée en fonction de la taille, indiquée par l'indice musculaire squelettique [SMI = masse musculaire appendiculaire (kg)/taille (m2)]. Une faible masse musculaire a été définie comme :

   • Hommes : IMS <7,0 kg/m2
   • Femmes : IMS < 5,4 kg/m2

2. Force de préhension : mesurée par un dynamomètre à poignée électronique. Une faible force de préhension a été définie comme :

   • Hommes : <28 kg
   • Femmes : <18 kg

3. Force des membres : mesurée par le temps pendant 5 fois pour la méthode du support de chaise. La faible force des membres a été définie comme suit :

   • Temps pour 5 fois pour le fauteuil debout : ≧12s La sarcopénie a été définie par (1) et l'un de (2), ou (3)

     2. Intervention de l'étude Boissons testées incluses Fermentation Lait fermenté avec la souche L. casei Shirota YIT9029 (LCS) fournie par Yakult Company (Taipei, Taiwan). Les boissons ont été distribuées et stockées à des températures allant de 0 à 10°C. Le lait de fermentation contenait du LCS à plus de 3x10^8 UFC par bouteille de 100 ml.

Les participants prenaient 2 bouteilles par jour (104 Kcal/jour). L'intervention de l'étude doit être prise deux fois par jour à peu près à la même heure. Tous les laits seraient envoyés aux participants chaque semaine (14 bouteilles/semaine).

3. Évaluation de l'étude 3-1 Mesure anthropométrique et évaluation de la composition corporelle Les données de mesure anthropométrique ont été détectées sur la taille, le poids, le tour de taille, le tour de muscle du bras, le tour de hanche et le tour de mollet à l'aide d'un ruban à mesurer et d'une balance.

La composition corporelle a été détectée à l'aide d'une analyse d'impédance bioélectrique (BIA) comme instrument de test non invasif.

3-2 BIA Les sujets se tiennent debout sans chaussures ni chaussettes. Les bras ne touchent pas la partie du tronc du corps et sont naturellement écartés à un angle de 15 degrés du tronc. Les électrodes manuelles sont marquées THUMB pour le pouce et MIDDLE pour le majeur. Les électrodes plantaires doivent être placées entre la cheville et le talon du patient. Le courant électrique a été fourni par les électrodes sur les pointes des talons des deux pieds et le bout des doigts des deux mains.

3-3 Force musculaire La force de préhension mesurée dans des conditions standard avec un modèle bien étudié de dynamomètre portatif avec des populations de référence peut être un substitut fiable pour des mesures plus complexes de la force musculaire des avant-bras ou des jambes. La mesure utilise un dynamomètre à poignée électronique. Une faible force de préhension est définie chez les hommes : <28 kg ; Femmes : <18 kg. Force des membres mesurée par le temps pendant 5 fois pour le support de chaise. Les sujets se sont assis et debout cinq fois et ont calculé le temps par minuterie. La force des membres faibles est définie dans le temps pour Temps pendant 5 fois pour le support de chaise : ≧12s.

3-4 Performances physiques Les performances physiques ont été évaluées en utilisant la vitesse de marche habituelle de 6 mètres, le TUG et le SPPB.

3-5 Vitesse de marche Les participants devaient marcher debout à un rythme normal et confortable pour eux ou marcher aussi vite que possible jusqu'à ce que les participants aient atteint la fin du chemin balisé. Un examinateur formé a marché derrière le participant et a arrêté de chronométrer lorsque le pied du participant a touché le sol à la fin du parcours de marche. Les participants ont bénéficié de pauses au besoin tout au long de la session de test. Les performances physiques faibles sont définies < 1 m/s.

3-6 TUG Les participants devaient se lever de la chaise, marcher 3 mètres en avant et revenir s'asseoir sur la chaise. Les performances physiques faibles sont définies ≧ 20s.

3-7 SPPB Les participants ont été suivis au SPPB pour faire le test. Les performances physiques faibles sont définies ≦ 9 scores.

3-8 Nombre total de bactéries, composition du microbiote intestinal et analyse des métabolites dérivés du microbiote

3-8-1 Séquençage 16S V1-V2 L'ADN génomique total des échantillons a été extrait des échantillons de selles en utilisant la méthode CTAB/SDS. Les régions V1-V2 du gène de l'ARNr 16S ont été sélectionnées pour l'analyse de pyroséquençage.

3-8-2 Analyse de la séquence du gène de l'ARNr 16S Les données de séquence du gène de l'ARNr 16S ont été traitées avec QIIME v 1.8.0 en utilisant les paramètres par défaut. Les séquences ont été regroupées en unités taxonomiques opérationnelles (OTU) à 97% de similarité, puis ont été assignées à la taxonomie Greengenes à l'aide du classificateur de taxonomie consensuelle uclust.

3-8-3 Acides gras fécaux à chaîne courte Les échantillons fécaux ont été dilués dans de l'eau déminéralisée et homogénéisés. Pour l'analyse des acides gras à chaîne courte (SCFA), un surnageant a été utilisé. L'extraction à l'éther diéthylique a été réalisée selon la méthode d'Adorno et al.

3-8-4 Détermination de l'IPA et du TMAO Les enquêteurs ont analysé les taux sériques et fécaux d'IPA par LC-MS/MS (4000 QTRAP, City, State, USA).

Les concentrations plasmatiques de TMAO ont été détectées par spectrométrie de masse en tandem par chromatographie liquide à dilution d'isotopes stables (DLM4779-1, Andover, MA, États-Unis) (Ke et al., 2018).

3-8-5 Dénombrement bactérien total par qPCR Le dénombrement bactérien total a été déterminé par analyse qPCR selon la méthode décrite par Shima et al. (Beneficial Microbes, 2019) à l'aide d'une amorce directe (UniF : GTGSTGCAYGGYYGTCGTCA) et d'une amorce inverse (UniR : ACGTCRTCCMCNCCTTCCTC). Faecalibacterium prausnitzii ATCC27768T a été utilisé comme souche standard.

3-9 Analyses biochimiques du sang

3-9-1 Prélèvement de sang Des échantillons de sang ont été prélevés sur les sujets avant le test et après le test. Les échantillons de sang ont été placés dans des tubes de prélèvement contenant l'anticoagulant EDTA et l'héparine.

3-9-2 Paramètres métaboliques Toutes les mesures métaboliques ont été réalisées un jour avant le début de l'intervention et en fin d'intervention. CBC, TSH, T4 libre, Vit-D, Cholestérol total, HDL-cholestérol, LDL-cholestérol, triglycérides, glucose à jeun, insuline à jeun, urée sanguine, azote, préalbumine plasmatique, albumine, ALT, AST, HbA1c, HS-CRP, l'ostéocalcine, l'adiponectine, la leptine, la sérotonine et la créatinine ont été mesurées après un jeûne d'au moins 8 heures.

3-9-3 Analyse des acides aminés plasmatiques Les enquêteurs ont utilisé un analyseur d'acides aminés Hitachi L-8900 (emplacement) pour détecter et quantifier l'alanine, la phénylalanine, la cystéine, l'acide aspartique, l'asparagine, l'acide glutamique, la glutamine, la glycine, l'histidine, la leucine, l'isoleucine , lysine, proline, arginine, sérine, thréonine, valine, tryptophane, tyrosine et méthionine dans les échantillons de plasma.

3-9-4 Analyse des cytokines inflammatoires Les cytokines sériques associées à l'inflammation TNF-α, TGF-β, IL-6, IL-17 et IL-10 ont été analysées à l'aide de kits colorimétriques (Elabscience, Chine). Les procédures ont suivi les instructions du kit et ont été mesurées à l'aide d'un lecteur ELISA (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-5 Analyse des marqueurs antioxydants De nombreuses enzymes anti-oxydantes présentes dans le corps humain, comme la superoxyde dismutase (SOD) (Elabscience, Chine), la glutathion peroxydase (GPx) (biovision, City, State, USA) et la catalase (CAT ) (biovision, Ville, État, États-Unis). Les enzymes dans le sérum ont été évaluées pour l'activité par le kit ELISA. Les procédures ont suivi les instructions du kit et ont été mesurées par le lecteur ELISA (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-6 Oligo-éléments Environ 1 ml de chaque échantillon de sang total a été digéré par micro-ondes avec 3 ml d'acide nitrique à 65 % (Ultrapure Reagent, J.T. Baker). Par la suite, les chercheurs ont lavé les résidus dans des tubes à micro-ondes avec de l'acide nitrique à 2 %, puis ont filtré les fluides digérés avec un filtre de 0,22 μm. Les solutions filtrées totales ont été stockées dans des tubes à centrifuger de 15 ml. Les niveaux de Pb, Cd, As, Hg, Mn, Al, Tl, V, Na, K, Mg, Ca, Fe, Zn, Se ont été déterminés à l'aide de la spectrométrie de masse à plasma à couplage inductif (ICP-MS ; Agilent 7800).

3-9-7 Analyse de la fonction immunitaire Dans les lymphocytes T infiltrant le muscle squelettique, les lymphocytes T régulateurs (Tregs) constituent un sous-ensemble majeur. Les Tregs peuvent réguler l'inflammation dans les muscles et favoriser la régénération des muscles ; cependant, l'effet catabolique de l'inflammation a été favorisé par les Treg dysfonctionnels dans le muscle âgé. [EbioMedicine. 2019 novembre;49:381-388.] Les cellules sanguines ont été colorées avec des anticorps monoclonaux (anti-CD4, -CD25 et -FoxP3) et analysées par cytométrie en flux.