Lactobacillus Casei 균주 Shirota를 함유한 발효유의 근감소증 노인에 대한 효과

1. 피험자 등록 근육감소증의 정의는 근육감소증에 대한 아시아 워킹 그룹(AWGS)의 알고리즘을 기반으로 합니다.

1. 근육량 : 인바디 S10으로 측정하여 신장으로 표준화하여 골격근지수[SMI=충돌근량(kg)/신장(m2)]으로 표시함. 낮은 근육량은 다음과 같이 정의되었습니다.

   • 남성: SMI <7.0kg/m2
   • 여성: SMI <5.4kg/m2

2. 손잡이 강도: 전자 손잡이 동력계로 측정. 낮은 악력은 다음과 같이 정의됩니다.

   • 남성: <28kg
   • 여성: <18kg

3. 사지 근력: 체어 스탠드 방식의 경우 5회 시간 측정. 낮은 사지 강도는 다음과 같이 정의되었습니다.

   • 체어 스탠드 5회: ≥12초 근육감소증은 (1) 및 (2) 또는 (3) 중 하나로 정의됨

     2. 연구 개입 테스트 음료에는 Yakult Company(대만 타이페이)에서 제공한 L. 카세이 균주 Shirota YIT9029(LCS)로 발효된 발효유가 포함되었습니다. 음료는 0-10°C 범위의 온도에서 분배 및 저장되었습니다. 발효유는 100ml 병당 3x10^8 CFU 이상의 LCS를 함유하고 있습니다.

참가자는 하루에 2병(104Kcal/일)을 섭취합니다. 연구 개입은 거의 같은 시간에 하루에 두 번 수행되어야 합니다. 모든 우유는 참가자에게 매주 보내집니다(14병/주).

3. 연구 평가 3-1 인체 측정 및 체성분 평가 인체 측정 데이터는 줄자와 체중계를 이용하여 신장, 체중, 허리둘레, 팔근육둘레, 엉덩이둘레, 종아리둘레를 측정하였다.

체성분은 비침습적 검사 도구로 생체 전기 임피던스 분석(BIA)을 사용하여 감지되었습니다.

3-2 BIA 피험자들은 신발과 양말을 신지 않은 채 만났다. 팔은 몸의 몸통 부분에 닿지 않고 몸통에서 15도 각도로 자연스럽게 벌립니다. 손 전극에는 엄지손가락의 경우 THUMB, 중지의 경우 MIDDLE로 표시되어 있습니다. 발 전극은 수검자의 발목뼈와 발뒤꿈치 사이에 위치해야 합니다. 양발 뒤꿈치 끝과 양손 손가락 끝에 있는 전극에서 전류를 공급했다.

3-3 근력 참조 모집단과 함께 잘 연구된 휴대용 동력계 모델을 사용하여 표준 조건에서 측정된 악력은 팔 아래 또는 다리의 더 복잡한 근력 측정을 위한 신뢰할 수 있는 대용물이 될 수 있습니다. 측정은 전자 핸드 그립 동력계를 사용합니다. 낮은 악력은 남성에서 정의됩니다: <28 kg ; 여성: <18kg. 체어 스탠드에 대해 시간으로 5회 측정한 사지 강도. 피실험자들은 5회 앉았다 일어섰다를 타이머로 계산했다. 하지 근력은 체어 스탠드의 경우 5회 시간: ≥12초로 정의됩니다.

3-4 신체능력 신체능력은 6미터 보통보행속도, TUG, SPPB를 이용하여 평가하였다.

3-5 보행 속도 참가자들은 정상적이고 편안한 속도로 서서 출발하여 걷거나 참가자들이 표시된 경로의 끝에 도달할 때까지 참가자들이 할 수 있는 한 빨리 걷도록 지시받았습니다. 훈련된 검사관이 참가자의 뒤를 걸으며 참가자의 발이 걷기 코스가 끝날 때 바닥에 닿았을 때 타이밍을 멈췄습니다. 참가자들은 테스트 세션 동안 필요에 따라 휴식을 취했습니다. 낮음 물리적 성능은 < 1m/s로 정의됩니다.

3-6 TUG 참가자들은 의자에서 일어나 3m 앞으로 걸어가 의자에 다시 앉도록 지시받았다. 낮음 물리적 성능은 ≥ 20초로 정의됩니다.

3-7 SPPB 참가자는 테스트를 수행하기 위해 SPPB를 따라갔습니다. 낮은 신체 능력은 ≤ 9 점수로 정의됩니다.

3-8 총세균수, 장내 미생물 구성 및 미생물 유래 대사산물 분석

3-8-1 16S V1-V2 Sequencing 검체의 total genome DNA는 CTAB/SDS 방법을 이용하여 대변검체에서 추출하였다. 파이로시퀀싱 분석을 위해 16S rRNA 유전자의 V1-V2 영역을 선택하였다.

3-8-2 16S rRNA Gene Sequence 분석 16S rRNA 유전자 염기서열 데이터는 기본 매개변수를 사용하여 QIIME v 1.8.0으로 처리되었습니다. 시퀀스는 97% 유사성에서 운영 분류 단위(OTU)로 클러스터링된 다음 uclust 합의 분류 분류기를 사용하여 Greengenes 분류를 할당했습니다.

3-8-3 대변 단쇄 지방산 대변 샘플을 탈이온수에 희석하고 균질화했습니다. 단쇄 지방산(SCFA) 분석을 위해 상등액을 사용했습니다. 디에틸 에테르 추출은 Adorno et al.

3-8-4 IPA 및 TMAO 결정 조사관은 LC-MS/MS(4000 QTRAP, City, State, USA)를 사용하여 IPA의 혈청 및 분변 수준을 분석했습니다.

혈장 TMAO 농도는 안정 동위원소(DLM4779-1, Andover, MA, USA) 희석 액체 크로마토그래피 탠덤 질량 분석법(Ke et al., 2018)으로 검출했습니다.

3-8-5 qPCR에 의한 총세균수 총세균수는 Shima et al. (Beneficial Microbes, 2019) 정방향 프라이머(UniF: GTGSTGCAYGGYYGTCGTCA) 및 역방향 프라이머(UniR: ACGTCRTCCMCNCCTTCCTC) 세트를 사용합니다. Faecalibacterium prausnitzii ATCC27768T를 표준균주로 사용하였다.

3-9 혈액 생화학적 분석

3-9-1 채혈 피험자로부터 검사 전과 검사 후 혈액을 채취하였다. 혈액 샘플을 항응고제 EDTA와 헤파린이 들어 있는 수집 튜브에 넣었습니다.

3-9-2 대사 매개변수 모든 대사 측정은 개입 시작 하루 전과 개입 종료 시에 수행되었습니다. CBC, TSH, Free T4, Vit-D, 총 콜레스테롤, HDL-콜레스테롤, LDL-콜레스테롤, 트리글리세리드, 공복 혈당, 공복 인슐린, 혈액 요소, 질소, 혈장 프리알부민, 알부민, ALT, AST, HbA1c, HS-CRP, 오스테오칼신, 아디포넥틴, 렙틴, 세로토닌 및 크레아티닌은 최소 8시간 금식 후 측정되었습니다.

3-9-3 혈장 아미노산 분석 조사관은 Hitachi L-8900 아미노산 분석기(위치)를 사용하여 알라닌, 페닐알라닌, 시스테인, 아스파르트산, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 류신, 이소류신을 검출하고 정량화했습니다. , 혈장 샘플의 라이신, 프롤린, 아르기닌, 세린, 트레오닌, 발린, 트립토판, 티로신 및 메티오닌.

3-9-4 염증성 사이토카인 분석 염증 관련 혈청 사이토카인인 TNF-α, TGF-β, IL-6, IL-17 및 IL-10을 colorimetric kit(Elabscience, China)를 사용하여 분석하였다. 절차는 키트 지침을 따르고 ELISA 판독기(Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA)를 사용하여 측정되었습니다.

3-9-5 항산화 마커 분석 Superoxide dismutase (SOD) (Elabscience, China), Glutathione peroxidase (GPx) (biovision, City, State, USA), Catalase (CAT ) (바이오비전, 시, 주, 미국). ELISA 키트를 사용하여 혈청 내 효소의 활성을 평가했습니다. 절차는 키트 지침을 따랐고 ELISA 판독기(Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA)로 측정했습니다.

3-9-6 미량 원소 각 전혈 샘플 약 1mL를 65% 질산(Ultrapure Reagent, J.T. Baker) 3mL로 마이크로웨이브 분해했습니다. 그 후 조사관은 2% 질산으로 마이크로파 튜브의 잔류물을 세척한 다음 소화된 유체를 0.22μm 필터로 여과했습니다. 여과된 총 용액은 15mL 원심분리 튜브에 보관되었습니다. Pb, Cd, As, Hg, Mn, Al, Tl, V, Na, K, Mg, Ca, Fe, Zn, Se의 수준은 유도 결합 플라즈마 질량 분석기(ICP-MS; Agilent 7800)를 사용하여 결정되었습니다.

3-9-7 면역 기능 분석 골격근에 침투하는 T 세포에서 조절 T 세포(Treg)는 주요 하위 집합입니다. Treg는 근육의 염증을 조절하고 근육의 재생을 촉진할 수 있습니다. 그러나, 염증의 이화 작용은 노화된 근육에서 기능 장애가 있는 Treg에 의해 촉진되었습니다.[EbioMedicine. 2019년 11월 49:381-388.] 혈액 세포를 단일클론 항체(항-CD4, -CD25 및 -FoxP3)로 염색하고 유세포 분석기로 분석했습니다.