Virkning af fermenteret mælk indeholdende Lactobacillus Casei stamme Shirota hos ældre sarcopenia

1. Emnetilmelding Definitionen af ​​sarkopeni er baseret på algoritmen fra Asian Working Group for Sarcopenia (AWGS).

1. Muskelmasse: målt ved hjælp af Inbody S10 og standardiseret efter højde, vist ved skeletmuskelindeks [SMI=appendikulær muskelmasse (kg)/højde (m2)]. Lav muskelmasse blev defineret som:

   • Mænd: SMI <7,0 kg/m2
   • Kvinder: SMI <5,4 kg/m2

2. Håndgrebsstyrke: målt med elektronisk håndgrebsdynamometer. Lav håndgrebsstyrke blev defineret som:

   • Mænd: <28 kg
   • Kvinder: <18 kg

3. Lemstyrke: målt ved Time for 5 gange for stolestand metode. Lav lemmerstyrke blev defineret som:

   • Tid til 5 gange for stolestand: ≧12s Sarkopeni blev defineret af (1) og en af ​​(2), eller (3)

     2. Undersøgelsesintervention Testdrikke inkluderet Fermenteringsmælk fermenteret med L. casei-stammen Shirota YIT9029 (LCS) leveret af Yakult Company (Taipei, Taiwan). Drikkevarerne blev fordelt og opbevaret ved temperaturer i området fra 0-10°C. Fermenteringsmælken indeholdt LCS ved mere end 3x10^8 CFU pr. 100 ml flaske.

Deltagerne ville tage 2 flasker om dagen (104 Kcal/dag). Undersøgelsesintervention bør tages to gange dagligt på omtrent samme tidspunkt. Al mælk vil blive sendt til deltageren ugentligt (14 flasker/uge).

3. Undersøgelsesvurdering 3-1 Antropometrisk måling og vurdering af kropssammensætning Antropometriske måledata blev påvist højde, vægt, taljeomkreds, armmuskelomkreds, hofteomkreds og lægomkreds ved hjælp af målebånd og vægtskala.

Kropssammensætning blev detekteret ved hjælp af bioelektrisk impedansanalyse (BIA) som et ikke-invasivt testinstrument.

3-2 BIA Emner står på mødt uden sko og sokker. Arme rører ikke kropsdelen og spredes naturligt i en 15 graders vinkel væk fra stammen. Håndelektroderne er mærket TOMMEL for tommelfingeren og MIDT for langfingeren. Fodelektroderne skal placeres mellem eksaminandens ankelben og hæl. Elektrisk strøm blev tilført fra elektroderne på spidserne af hælene på begge fødder og fingerspidserne på begge hænder.

3-3 Muskelstyrke Gribstyrke målt under standardforhold med en velundersøgt model af et håndholdt dynamometer med referencepopulationer kan være et pålideligt surrogat til mere komplicerede mål for muskelstyrke i underarme eller ben. Målingen bruger elektronisk håndgrebsdynamometer. Lav håndgrebsstyrke er defineret hos mænd: <28 kg ; Kvinder: <18 kg. Lemstyrke målt ved Time for 5 gange for stolestand. Forsøgspersonerne sad og stod i fem gange og beregnede tid efter timer. Lav lemstyrke er defineret i tid for Tid til 5 gange for stolestand: ≧12s.

3-4 Fysisk præstation Fysisk præstation blev vurderet ved at bruge 6-meters sædvanlig ganghastighed, TUG og SPPB.

3-5 Ganghastighed Deltagerne blev instrueret i at gå fra stående start i et tempo, der var normalt og behageligt for dem, eller at gå så hurtigt, som deltagerne kunne, indtil deltagerne nåede enden af ​​den afmærkede sti. En uddannet eksaminator gik bag deltageren og stoppede med at måle, da deltagerens fod kontaktede gulvet i slutningen af ​​gangkurset. Deltagerne fik hvilepauser efter behov under hele testsessionen. Lav Fysisk ydeevne er defineret < 1 m/s.

3-6 TUG Deltagerne blev instrueret i at rejse sig fra stolen, gå 3 meter frem og gå tilbage for at sidde på stolen. Lav Fysisk ydeevne er defineret ≧ 20s.

3-7 SPPB-deltagere blev fulgt til SPPB for at udføre testen. Lav fysisk ydeevne er defineret ≦ 9 point.

3-8 Totalt bakterietal, tarmmikrobiotasammensætning og mikrobiotaafledt metabolitanalyse

3-8-1 16S V1-V2-sekventering Totalt genom-DNA fra prøver blev ekstraheret fra afføringsprøver ved hjælp af CTAB/SDS-metoden. V1-V2-regionerne af 16S rRNA-genet blev udvalgt til pyrosekventeringsanalyse.

3-8-2 16S rRNA-gensekvensanalyse 16S rRNA-gensekvensdata blev behandlet med QIIME v 1.8.0 ved brug af standardparametre. Sekvenserne blev grupperet i operationelle taksonomiske enheder (OTU'er) ved 97% lighed og derefter tildelt Greengenes taksonomi ved hjælp af uclust konsensus taksonomiklassifikatoren.

3-8-3 fækale kortkædede fedtsyrer De fækale prøver blev fortyndet i deioniseret vand og homogeniseret. Til analyse af kortkædet fedtsyre (SCFA) blev der anvendt en supernatant. Diethyletherekstraktion blev udført under anvendelse af metoden ifølge Adorno et al.

3-8-4 IPA- og TMAO-bestemmelse Efterforskere analyserede serum- og fækale niveauer af IPA ved hjælp af LC-MS/MS (4000 QTRAP, City, State, USA).

Plasma-TMAO-koncentrationerne blev påvist ved hjælp af stabil isotop (DLM4779-1, Andover, MA, USA) fortyndingsvæskekromatografi tandem massespektrometri (Ke et al., 2018).

3-8-5 Totalt bakterietal ved qPCR Totalt bakterieantal blev bestemt ved qPCR-analyse ifølge metoden beskrevet af Shima et al. (Beneficial Microbes, 2019) ved hjælp af et fremadgående primersæt (UniF: GTGSTGCAYGGYYGTCGTCA) og et omvendt primersæt (UniR: ACGTCRTCCMCNCCTTCCTC). Faecalibacterium prausnitzii ATCC27768T blev anvendt som en standardstamme.

3-9 Biokemiske blodanalyser

3-9-1 Blodprøvetagning Blodprøver blev indsamlet fra forsøgspersonerne ved før- og efter-test. Blodprøverne blev anbragt i opsamlingsrør indeholdende antikoagulant EDTA og heparin.

3-9-2 Metaboliske parametre Alle metaboliske målinger blev udført en dag før starten af ​​interventionen og ved slutningen af ​​interventionen. CBC, TSH, Fri T4, Vit-D, Total kolesterol, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, triglycerider, fastende glukose, fastende insulin, blodurinstof, nitrogen, plasma præalbumin, albumin, ALT, AST, HbA1c, HS-CRP, osteocalcin, adiponectin, leptin, serotonin og kreatinin blev målt efter faste i mindst 8 timer.

3-9-3 Plasma Amino Acid Analysis Investigators brugte en Hitachi L-8900 Amino Acid Analyzer (placering) til at detektere og kvantificere alanin, phenylalanin, cystein, asparaginsyre, asparagin, glutaminsyre, glutamin, glycin, histidin, leucin, isoleucin. lysin, prolin, arginin, serin, threonin, valin, tryptophan, tyrosin og methionin i plasmaprøverne.

3-9-4 Inflammatorisk cytokinanalyse De inflammationsassocierede serumcytokiner TNF-α, TGF-β, IL-6, IL-17 og IL-10 blev analyseret ved hjælp af kolorimetriske kits (Elabscience, Kina). Procedurerne fulgte kitinstruktionerne og blev målt ved hjælp af en ELISA-læser (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-5 Antioxidantmarkøranalyse Mange antioxidantenzymer i menneskekroppe, såsom Superoxide dismutase (SOD) (Elabscience, Kina), Glutathione peroxidase (GPx) (biovision, City, State, USA) og Catalase (CAT) ) (biovision, by, stat, USA). Enzymer i serumet blev evalueret for aktiviteten ved hjælp af ELISA-kit. Procedurerne fulgte kitinstruktionerne og blev målt af ELISA-læseren (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-6 Sporelementer Ca. 1 mL af hver fuldblodsprøve blev mikrobølgefordøjet med 3 mL 65 % salpetersyre (Ultrapure Reagent, J.T. Baker). Efterfølgende vaskede efterforskerne resterne i mikrobølgerør med 2 % salpetersyre og filtrerede derefter de fordøjede væsker med 0,22 μm filter. De samlede filtrerede opløsninger blev opbevaret i 15 ml centrifugerør. Niveauerne af Pb, Cd, As, Hg, Mn, Al, Tl, V, Na, K, Mg, Ca, Fe, Zn, Se blev bestemt ved anvendelse af induktivt koblet plasmamassespektrometri (ICP-MS; Agilent 7800).

3-9-7 Immunfunktionsanalyse I T-celler, der infiltrerer skeletmuskulaturen, er Regulatoriske T-celler (Tregs) en stor undergruppe. Tregs kan regulere inflammation i muskler og fremme regenerering af muskler; dog blev den katabolske effekt af inflammation fremmet af de dysfunktionelle Tregs i ældet muskel.[EbioMedicine. 2019 Nov;49:381-388.] Blodcellerne blev farvet med monoklonale antistoffer (anti-CD4, -CD25 og -FoxP3) og analyseret ved flowcytometri.