Effekt av fermenterad mjölk som innehåller Lactobacillus Casei-stam Shirota hos äldre sarcopenia

1. Ämnesregistrering Definitionen av sarkopeni är baserad på algoritmen från Asian Working Group for Sarcopenia (AWGS).

1. Muskelmassa: mätt med Inbody S10 och standardiserad efter längd, visad med skelettmuskelindex [SMI=appendikulär muskelmassa (kg)/höjd (m2)]. Låg muskelmassa definierades som:

   • Män: SMI <7,0 kg/m2
   • Kvinnor: SMI <5,4 kg/m2

2. Handtagsstyrka: mätt med elektronisk handtagsdynamometer. Låg handtagsstyrka definierades som:

   • Män: <28 kg
   • Kvinnor: <18 kg

3. Extremitetsstyrka: mätt med Time för 5 gånger för stolstativmetoden. Låg lemstyrka definierades som:

   • Tid för 5 gånger för stolsställning: ≧12s Sarkopeni definierades av (1) och en av (2), eller (3)

     2. Studieintervention Testdrycker inkluderade Fermenteringsmjölk fermenterad med L. casei-stam Shirota YIT9029 (LCS) från Yakult Company (Taipei, Taiwan). Dryckerna distribuerades och förvarades vid temperaturer från 0-10°C. Fermentationsmjölken innehöll LCS med mer än 3x10^8 CFU per 100 ml flaska.

Deltagarna skulle ta 2 flaskor per dag (104 Kcal/dag). Studieintervention bör tas två gånger dagligen vid ungefär samma tidpunkt. All mjölk skulle skickas till deltagarna varje vecka (14 flaskor/vecka).

3. Studiebedömning 3-1 Antropometrisk mätning och bedömning av kroppssammansättning Antropometriska mätdata detekterades höjd, vikt, midjeomkrets, armmuskelomkrets, höftomkrets och vadomkrets med hjälp av måttband och viktskala.

Kroppssammansättning detekterades med hjälp av bioelektrisk impedansanalys (BIA) som ett icke-invasivt testinstrument.

3-2 BIA Ämnen står på möttes utan skor och strumpor. Armarna vidrör inte båldelen av kroppen och sprids naturligt till en 15 graders vinkel bort från bålen. Handelektroderna är märkta med TUMME för tummen och MITT för långfingret. Fotelektroderna ska placeras mellan undersöktes ankelben och häl. Elektrisk ström tillfördes från elektroderna på toppen av hälarna på båda fötterna och fingertopparna på båda händerna.

3-3 Muskelstyrka Greppstyrka mätt under standardförhållanden med en välstuderad modell av en handhållen dynamometer med referenspopulationer kan vara ett tillförlitligt surrogat för mer komplicerade mätningar av muskelstyrka i underarmar eller ben. Mätningen använder elektronisk handtagsdynamometer. Låg handtagsstyrka definieras för män: <28 kg; Damer: <18 kg. Extremitetsstyrka mätt med Time för 5 gånger för stolsställning. Försökspersonerna satt och stod fem gånger och beräknade tiden för timer. Låg lemstyrka definieras i tid för Tid för 5 gånger för stolsställning: ≧12s.

3-4 Fysisk prestation Fysisk prestation bedömdes genom att använda 6-meters vanlig gånghastighet, TUG och SPPB.

3-5 Gånghastighet Deltagarna instruerades att gå från stående start i en takt som var normal och bekväm för dem eller att gå så fort deltagarna kunde tills deltagarna nådde slutet av den markerade stigen. En utbildad examinator gick bakom deltagaren och stoppade tajmingen när deltagarens fot kom i kontakt med golvet i slutet av gångkursen. Deltagarna fick vilopauser efter behov under hela testsessionen. Låg Fysisk prestation definieras < 1 m/s.

3-6 TUG Deltagarna instruerades att resa sig upp från stolen, gå 3 meter framåt och gå tillbaka för att sitta på stolen. Låg Fysisk prestation definieras ≧ 20s.

3-7 SPPB-deltagare följdes till SPPB för att göra testet. Låg fysisk prestation definieras ≦ 9 poäng.

3-8 totalt antal bakterier, tarmmikrobiotasammansättning och mikrobiota-härledd metabolitanalys

3-8-1 16S V1-V2-sekvensering Totalt genom-DNA från prover extraherades från avföringsprover med användning av CTAB/SDS-metoden. V1-V2-regionerna av 16S rRNA-genen selekterades för pyrosekvensanalys.

3-8-2 16S rRNA-gensekvensanalys 16S rRNA-gensekvensdata bearbetades med QIIME v 1.8.0 med standardparametrar. Sekvenserna klustrades till operationella taxonomiska enheter (OTUs) med 97% likhet och tilldelades sedan Greengenes taxonomy med användning av uclust consensus taxonomy classifier.

3-8-3 Fekala kortkedjiga fettsyror De fekala proverna späddes i avjoniserat vatten och homogeniserades. För analys av kortkedjiga fettsyror (SCFA) användes en supernatant. Dietyleterextraktion utfördes med användning av metoden enligt Adorno et al.

3-8-4 IPA- och TMAO-bestämning Utredarna analyserade serum- och fekala nivåer av IPA med LC-MS/MS (4000 QTRAP, City, State, USA).

Plasma-TMAO-koncentrationerna detekterades med stabil isotop (DLM4779-1, Andover, MA, USA) utspädningsvätskekromatografi tandemmasspektrometri (Ke et al., 2018).

3-8-5 Totalt bakterieantal med qPCR Totalt bakterieantal bestämdes genom qPCR-analys enligt metoden som beskrivs av Shima et al. (Beneficial Microbes, 2019) med en framåtriktad primer (UniF: GTGSTGCAYGGYYGTCGTCA) och en omvänd primer (UniR: ACGTCRTCCMCNCCTTCCTC). Faecalibacterium prausnitzii ATCC27768T användes som en standardstam.

3-9 Biokemiska analyser av blod

3-9-1 Blodprovtagning Blodprover togs från försökspersonerna vid före- och eftertest. Blodproverna placerades i uppsamlingsrör innehållande antikoagulant EDTA och heparin.

3-9-2 Metaboliska parametrar Alla metaboliska mätningar utfördes en dag före starten av interventionen och i slutet av interventionen. CBC, TSH, Fritt T4, Vit-D, Totalkolesterol, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, triglycerider, fasteglukos, fasteinsulin, blodurea, kväve, plasmaprealbumin, albumin, ALT, AST, HbA1c, HS-CRP, osteokalcin, adiponektin, leptin, serotonin och kreatinin mättes efter att ha fastat minst 8 timmar.

3-9-3 Plasma Amino Acid Analysis Utredare använde en Hitachi L-8900 Amino Acid Analyzer (plats) för att detektera och kvantifiera alanin, fenylalanin, cystein, asparaginsyra, asparagin, glutaminsyra, glutamin, glycin, histidin, leucin, isoleucin. lysin, prolin, arginin, serin, treonin, valin, tryptofan, tyrosin och metionin i plasmaproverna.

3-9-4 Analys av inflammatoriska cytokiner De inflammationsassocierade serumcytokinerna TNF-α, TGF-β, IL-6, IL-17 och IL-10 analyserades med användning av kolorimetriska kit (Elabscience, Kina). Procedurerna följde kitinstruktionerna och mättes med en ELISA-läsare (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-5 Antioxidantmarköranalys Många antioxidantenzymer i människokroppar, som Superoxide dismutase (SOD) (Elabscience, Kina), Glutationperoxidase (GPx) (biovision, City, State, USA) och Catalase (CAT) ) (biovision, stad, delstat, USA). Enzymer i serumet utvärderades med avseende på aktivitet med ELISA-kit. Procedurerna följde kitinstruktionerna och mättes av ELISA-läsaren (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-6 Spårelement Ungefär 1 mL av varje helblodsprov mikrovågssmälts med 3 mL 65 % salpetersyra (Ultrapure Reagent, J.T. Baker). Därefter tvättade utredarna resterna i mikrovågsrör med 2 % salpetersyra och filtrerade sedan de rötade vätskorna med 0,22 μm filter. De totala filtrerade lösningarna lagrades i 15 ml centrifugrör. Nivåerna av Pb, Cd, As, Hg, Mn, Al, Tl, V, Na, K, Mg, Ca, Fe, Zn, Se bestämdes med användning av induktivt kopplad plasmamasspektrometri (ICP-MS; Agilent 7800).

3-9-7 Immunfunktionsanalys I T-celler som infiltrerar skelettmuskulaturen är Regulatory T-celler (Tregs) en viktig delmängd. Tregs kan reglera inflammation i muskler och främja regenerering av muskler; den kataboliska effekten av inflammation främjades dock av de dysfunktionella tregs i åldrade muskler.[EbioMedicine. 2019 Nov;49:381-388.] Blodkropparna färgades med monoklonala antikroppar (anti-CD4, -CD25 och -FoxP3) och analyserades med flödescytometri.