Effekt av fermentert melk som inneholder Lactobacillus Casei-stamme Shirota hos eldre sarcopenia

1. Emneregistrering Definisjonen av sarkopeni er basert på algoritmen til Asian Working Group for Sarcopenia (AWGS).

1. Muskelmasse: målt ved bruk av Inbody S10 og standardisert etter høyde, vist ved skjelettmuskelindeks [SMI=appendikulær muskelmasse (kg)/høyde (m2)]. Lav muskelmasse ble definert som:

   • Menn: SMI <7,0 kg/m2
   • Kvinner: SMI <5,4 kg/m2

2. Håndgrepsstyrke: målt med elektronisk håndgrepsdynamometer. Lav håndgrepsstyrke ble definert som:

   • Menn: <28 kg
   • Kvinner: <18 kg

3. Lemstyrke: målt med Time for 5 ganger for stol stativ metode. Lav lemstyrke ble definert som:

   • Tid for 5 ganger for stolstativ: ≧12s Sarkopeni ble definert av (1) og en av (2), eller (3)

     2. Studieintervensjon Testdrikker inkludert Fermentering Melk fermentert med L. casei-stammen Shirota YIT9029 (LCS) levert av Yakult Company (Taipei, Taiwan). Drikkene ble distribuert og lagret ved temperaturer fra 0-10°C. Fermenteringsmelken inneholdt LCS med mer enn 3x10^8 CFU per 100 ml flaske.

Deltakerne ville ta 2 flasker per dag (104 Kcal/dag). Studieintervensjon bør tas to ganger daglig til omtrent samme tid. All melk vil bli sendt til deltaker ukentlig (14 flasker/uke).

3. Studievurdering 3-1 Antropometrisk måling og vurdering av kroppssammensetning Antropometriske måledata ble påvist høyde, vekt, midjeomkrets, armmuskelomkrets, hofteomkrets og leggomkrets ved bruk av målebånd og vektskala.

Kroppssammensetning ble oppdaget ved bruk av bioelektrisk impedansanalyse (BIA) som et ikke-invasivt testinstrument.

3-2 BIA Emner står på møtt uten sko og sokker. Armene berører ikke kroppsdelen av kroppen, og spres naturlig til en 15 graders vinkel bort fra bagasjerommet. Håndelektrodene er merket TOMMEL for tommelen og MIDT for langfingeren. Fotelektrodene skal plasseres mellom eksaminandens ankelben og hæl. Elektrisk strøm ble tilført fra elektrodene på tuppen av hælene på begge føtter og fingertuppene på begge hender.

3-3 Muskelstyrke Grepstyrke målt under standardforhold med en godt studert modell av et håndholdt dynamometer med referansepopulasjoner kan være et pålitelig surrogat for mer kompliserte mål på muskelstyrke i underarmene eller bena. Målingen bruker elektronisk håndgrepsdynamometer. Lav håndgrepsstyrke er definert for menn: <28 kg ; Kvinner: <18 kg. Lemstyrke målt med Time for 5 ganger for stolstativ. Forsøkspersonene satt og sto i fem ganger, og beregnet tid etter tidtaker. Lav lemstyrke er definert i tid for Tid for 5 ganger for stolstand: ≧12s.

3-4 Fysisk ytelse Fysisk ytelse ble vurdert ved å bruke 6 meter vanlig ganghastighet, TUG og SPPB.

3-5 Ganghastighet Deltakerne ble instruert om å gå fra stående start i et tempo som var normalt og behagelig for dem eller å gå så fort deltakerne kunne til deltakerne nådde enden av den merkede stien. En utdannet sensor gikk bak deltakeren og stoppet tidtakingen da deltakerens fot kontaktet gulvet på slutten av gangkurset. Deltakerne fikk hvilepauser etter behov gjennom hele testøkten. Lav Fysisk ytelse er definert < 1 m/s.

3-6 TUG Deltakerne ble bedt om å reise seg fra stolen, gå 3 meter fremover og gå tilbake for å sitte på stolen. Lav fysisk ytelse er definert ≧ 20s.

3-7 SPPB-deltakere ble fulgt til SPPB for å gjøre testen. Lav fysisk ytelse er definert ≦ 9 poeng.

3-8 Totalt antall bakterier, tarmmikrobiotasammensetning og mikrobiota-avledet metabolittanalyse

3-8-1 16S V1-V2-sekvensering Totalt genom-DNA fra prøver ble ekstrahert fra avføringsprøver ved bruk av CTAB/SDS-metoden. V1-V2-regionene til 16S rRNA-genet ble valgt for pyrosekvenseringsanalyse.

3-8-2 16S rRNA-gensekvensanalyse 16S rRNA-gensekvensdata ble behandlet med QIIME v 1.8.0 ved bruk av standardparametere. Sekvensene ble gruppert i operasjonelle taksonomiske enheter (OTU-er) med 97% likhet og deretter tildelt Greengenes-taksonomi ved å bruke uclust-konsensus-taksonomiklassifikatoren.

3-8-3 Fekale kortkjedede fettsyrer Avføringsprøvene ble fortynnet i avionisert vann og homogenisert. For kortkjedet fettsyre (SCFA) analyse ble en supernatant brukt. Dietyleterekstraksjon ble utført ved å bruke metoden til Adorno et al.

3-8-4 IPA- og TMAO-bestemmelse Undersøkere analyserte serum- og fekale nivåer av IPA ved å bruke LC-MS/MS (4000 QTRAP, City, State, USA).

Plasma-TMAO-konsentrasjonene ble påvist ved hjelp av stabil isotop (DLM4779-1, Andover, MA, USA) fortynningsvæskekromatografi tandem massespektrometri (Ke et al., 2018).

3-8-5 Totalt bakterietall ved qPCR Totalt bakterietall ble bestemt ved qPCR-analyse i henhold til metoden beskrevet av Shima et al. (Beneficial Microbes, 2019) ved bruk av et foroverprimersett (UniF: GTGSTGCAYGGYYGTCGTCA) og et reversert primersett (UniR: ACGTCRTCCMCNCCTTCCTC). Faecalibacterium prausnitzii ATCC27768T ble brukt som standardstamme.

3-9 Biokjemiske blodanalyser

3-9-1 Blodprøvetaking Blodprøver ble tatt fra forsøkspersonene ved før- og ettertest. Blodprøvene ble plassert i oppsamlingsrør som inneholdt antikoagulant EDTA og heparin.

3-9-2 Metabolske parametere Alle metabolske målinger ble utført én dag før starten av intervensjonen og ved slutten av intervensjonen. CBC, TSH, Free T4, Vit-D, Total kolesterol, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol, triglyserider, fastende glukose, fastende insulin, blodurea, nitrogen, plasma prealbumin, albumin, ALT, AST, HbA1c, HS-CRP, osteokalsin, adiponektin, leptin, serotonin og kreatinin ble målt etter faste i minst 8 timer.

3-9-3 Plasma Amino Acid Analysis Investigators brukte en Hitachi L-8900 Amino Acid Analyzer (Location) for å oppdage og kvantifisere alanin, fenylalanin, cystein, asparaginsyre, asparagin, glutaminsyre, glutamin, glycin, histidin, leucin, isoleucin. , lysin, prolin, arginin, serin, treonin, valin, tryptofan, tyrosin og metionin i plasmaprøvene.

3-9-4 Analyse av inflammatoriske cytokiner De inflammasjonsassosierte serumcytokinene TNF-α, TGF-β, IL-6, IL-17 og IL-10 ble analysert ved bruk av kolorimetriske sett (Elabscience, Kina). Prosedyrene fulgte settinstruksjonene og ble målt ved bruk av en ELISA-leser (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-5 Antioksidantmarkøranalyse Mange antioksidantenzymer i menneskekropper, som Superoxide dismutase (SOD) (Elabscience, Kina), Glutathione peroxidase (GPx) (biovision, City, State, USA) og Catalase (CAT) ) (biovisjon, by, delstat, USA). Enzymer i serumet ble evaluert for aktivitet ved hjelp av ELISA-sett. Prosedyrene fulgte settinstruksjonene og ble målt av ELISA-leseren (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-6 Sporelementer Omtrent 1 mL av hver fullblodprøve ble fordøyd i mikrobølgeovn med 3 mL 65 % salpetersyre (Ultrapure Reagent, J.T. Baker). Deretter vasket etterforskerne restene i mikrobølgerør med 2 % salpetersyre og filtrerte deretter de fordøyde væskene med 0,22 μm filter. De totale filtrerte løsningene ble lagret i 15 ml sentrifugerør. Nivåene av Pb, Cd, As, Hg, Mn, Al, Tl, V, Na, K, Mg, Ca, Fe, Zn, Se ble bestemt ved bruk av induktivt koblet plasmamassespektrometri (ICP-MS; Agilent 7800).

3-9-7 Immunfunksjonsanalyse I T-celler som infiltrerer skjelettmuskulaturen, er Regulatoriske T-celler (Tregs) en viktig undergruppe. Tregs kan regulere betennelse i muskler og fremme regenerering av muskler; den katabolske effekten av betennelse ble imidlertid fremmet av de dysfunksjonelle tregene i eldre muskler.[EbioMedicine. 2019 Nov;49:381-388.] Blodcellene ble farget med monoklonale antistoffer (anti-CD4, -CD25 og -FoxP3) og analysert ved flowcytometri.