A Lactobacillus Casei Shirota törzset tartalmazó fermentált tej hatása a Sarcopenia idősekre

1. Tantárgyfelvétel A szarkopénia definíciója az Asian Working Group for Sarcopenia (AWGS) algoritmusán alapul.

1. Izomtömeg: Inbody S10 segítségével mérve, magassággal standardizált, vázizom-index alapján [SMI=appendikuláris izomtömeg (kg)/magasság (m2)]. Az alacsony izomtömeget a következőképpen határozták meg:

   • Férfiak: SMI <7,0 kg/m2
   • Nők: SMI <5,4 kg/m2

2. Fogantyúszilárdság: elektronikus kézi markolat-dinamométerrel mérve. Az alacsony markolatszilárdságot a következőképpen határozták meg:

   • Férfiak: <28 kg
   • Nők: <18 kg

3. A végtagok erőssége: Time for 5-ször mérve székállvány módszernél. Az alacsony végtag erejét a következőképpen határozták meg:

   • Ötszöri idő a székállványhoz: ≧12s A szarkopéniát az (1) és a (2) vagy (3) egyike határozta meg.

     2. Vizsgálati beavatkozás A tesztitalok tartalmaztak L. casei Shirota YIT9029 (LCS) törzzsel fermentált fermentációs tejet, amelyet a Yakult Company (Tajpej, Tajvan) biztosított. Az italokat 0-10°C közötti hőmérsékleten osztották szét és tárolták. A fermentációs tej több mint 3x10^8 CFU-t tartalmazott 100 ml-es palackonként.

A résztvevők napi 2 palackot (104 Kcal/nap) vettek be. A vizsgálati beavatkozást naponta kétszer, megközelítőleg ugyanabban az időben kell elvégezni. Minden tejet hetente küldünk a résztvevőnek (14 palack/hét).

3. A vizsgálat értékelése 3-1 Antropometrikus mérés és testösszetétel értékelés Az antropometrikus mérési adatokat mérőszalag és súlyskála segítségével detektáltuk a magasságot, a súlyt, a derékkörfogatot, a kar izomkörfogatát, a csípőkörfogatot és a vádli kerületét.

A testösszetételt bioelektromos impedanciaanalízissel (BIA) nem invazív vizsgálóeszközként határoztuk meg.

3-2 BIA Az alanyok cipő és zokni nélkül állnak metten. A karok nem érintik a test törzsét, és természetesen 15 fokos szögben terülnek el a törzstől. A kézi elektródák a hüvelykujjnál HUMBU, a középső ujjnál pedig a MIDDLE felirattal vannak ellátva. A lábelektródákat a vizsgázó bokacsontja és a sarok közé kell helyezni. Az elektromos áramot az elektródák szolgáltatták mindkét láb sarkának hegyén és mindkét kéz ujjbegyén.

3-3 Izomerő A standard körülmények között mért markolaterő egy kézi dinamométer jól tanulmányozott modelljével referenciapopulációkkal megbízható helyettesítője lehet az alsó karok vagy lábak izomerőjének bonyolultabb méréseinek. A mérés elektronikus kézi markolat-dinamométert használ. Alacsony markolatszilárdság a férfiaknál: <28 kg ; Nők: <18 kg. A végtagok ereje Time for 5-ször mérve székállványhoz. Az alanyok ötször ültek és álltak, és időzítővel számolták az időt. Alacsony végtag-erő van meghatározva az Időben 5 alkalommal székállvány esetén: ≧12s.

3-4 Fizikai teljesítmény A fizikai teljesítményt 6 méteres szokásos járási sebesség, TUG és SPPB segítségével értékeltük.

3-5 járási sebesség A résztvevőket arra utasították, hogy álló rajttól olyan tempóban járjanak, ami normális és kényelmes volt számukra, vagy olyan gyorsan, amennyire csak tudnak, amíg a résztvevők el nem érik a kijelölt út végét. Egy képzett vizsgáztató a résztvevő mögé sétált, és leállította az időmérést, amikor a résztvevő lába érintkezett a padlóval a sétapálya végén. A résztvevők szükség szerint pihenőidőt kaptak a tesztelés során. Alacsony Fizikai teljesítmény < 1 m/s.

3-6 TUG A résztvevőket arra utasították, hogy álljanak fel a székről, menjenek 3 métert előre, és menjenek vissza, hogy leüljenek a székre. Alacsony fizikai teljesítmény ≧ 20 s.

3-7 SPPB résztvevőt követtek az SPPB-hez a teszt elvégzéséhez. Alacsony fizikai teljesítmény ≦ 9 pont.

3-8 Teljes baktériumszám, a bél mikrobiota összetétele és a mikrobiotából származó metabolit elemzés

3-8-1 16S V1-V2 szekvenálás A mintákból származó teljes genom DNS-t a székletmintákból CTAB/SDS módszerrel extraháltuk. A 16S rRNS gén V1-V2 régióit szelektáltuk piroszekvencia analízishez.

3-8-2 16S rRNS génszekvencia analízis A 16S rRNS génszekvencia adatait QIIME v 1.8.0 programmal dolgoztuk fel az alapértelmezett paraméterek használatával. A szekvenciákat operatív taxonómiai egységekbe (OTU-k) csoportosították 97%-os hasonlóság mellett, majd Greengenes taxonómiát rendeltek hozzá az uclust consensus taxonómia osztályozó segítségével.

3-8-3 Széklet rövid szénláncú zsírsavak A székletmintákat ionmentesített vízben hígítottuk és homogenizáltuk. A rövid szénláncú zsírsav (SCFA) elemzéséhez felülúszót használtunk. A dietil-éteres extrakciót Adorno és munkatársai módszerével végeztük.

3-8-4 IPA és TMAO meghatározás A kutatók LC-MS/MS (4000 QTRAP, City, State, USA) segítségével elemezték az IPA szérum- és székletszintjét.

A plazma TMAO-koncentrációit stabil izotópos (DLM4779-1, Andover, MA, USA) hígítású folyadékkromatográfiás tandem tömegspektrometriával határoztuk meg (Ke et al., 2018).

3-8-5 Teljes baktériumszám qPCR-rel Az összbaktériumszámot qPCR analízissel határoztuk meg a Shima és munkatársai által leírt módszer szerint. (Beneficial Microbes, 2019) egy előremenő primer (UniF: GTGSTGCAYGGYYGTCGTCA) és egy fordított primer (UniR: ACGTCRTCCMCNCCTTCCTC) segítségével. Standard törzsként a Faecalibacterium prausnitzii ATCC27768T törzset használtuk.

3-9 Vérbiokémiai elemzések

3-9-1 Vérvétel Vérmintát vettünk az alanyoktól a vizsgálat előtti és utáni vizsgálat során. A vérmintákat antikoaguláns EDTA-t és heparint tartalmazó gyűjtőcsövekbe helyeztük.

3-9-2 Metabolikus paraméterek Az összes anyagcsere mérést egy nappal a beavatkozás megkezdése előtt és a beavatkozás végén végeztük. CBC, TSH, szabad T4, D-vitamin, összkoleszterin, HDL-koleszterin, LDL-koleszterin, trigliceridek, éhomi glükóz, éhomi inzulin, vér karbamid, nitrogén, plazma prealbumin, albumin, ALT, AST, HbA1c, HS-CRP, Az oszteokalcin, adiponektin, leptin, szerotonin és kreatinin szintjét legalább 8 órás éhezés után mérték.

3-9-3 Plazma aminosav-elemző A kutatók Hitachi L-8900 aminosav-analizátort (helyszín) használtak az alanin, fenilalanin, cisztein, aszparaginsav, aszparagin, glutaminsav, glutamin, glicin, hisztidin, leucin és izoleucin kimutatására és mennyiségi meghatározására. , lizin, prolin, arginin, szerin, treonin, valin, triptofán, tirozin és metionin a plazmamintákban.

3-9-4 Gyulladásos citokinek analízise A gyulladással összefüggő TNF-α, TGF-β, IL-6, IL-17 és IL-10 szérum citokineket kolorimetriás kitekkel (Elabscience, Kína) elemeztük. Az eljárások követték a kit utasításait, és ELISA olvasóval (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA) mértük.

3-9-5 Antioxidáns markerelemzés Számos antioxidáns enzim az emberi testben, mint például a szuperoxid-diszmutáz (SOD) (Elabscience, Kína), a glutation-peroxidáz (GPx) (biovision, City, State, USA) és a kataláz (CAT) ) (biovízió, város, állam, USA). A szérumban lévő enzimek aktivitását ELISA kittel értékeltük ki. Az eljárások követték a kit utasításait, és ELISA olvasóval (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA) mértük.

3-9-6 nyomelemek Körülbelül 1 ml teljes vérmintát mikrohullámú sütőben emésztettünk 3 ml 65%-os salétromsavval (Ultrapure Reagent, J.T. Baker). Ezt követően a kutatók a maradékokat mikrohullámú csövekben 2%-os salétromsavval mosták, majd az emésztett folyadékokat 0,22 μm-es szűrőn szűrték. Az összes szűrt oldatot 15 ml-es centrifugacsövekben tároltuk. A Pb, Cd, As, Hg, Mn, Al, Tl, V, Na, K, Mg, Ca, Fe, Zn, Se szintjét induktív csatolású plazma tömegspektrometriával (ICP-MS; Agilent 7800) határoztuk meg.

3-9-7 Immunfunkció elemzés A vázizomzatba beszivárgó T-sejtekben a szabályozó T-sejtek (Tregek) a fő alcsoportot alkotják. A Treg szabályozhatja az izomgyulladást, és elősegítheti az izmok regenerálódását; a gyulladás katabolikus hatását azonban elősegítették az elöregedett izomzat diszfunkcionális Treg-jei.[EbioMedicine. 2019. nov.;49:381-388.] A vérsejteket monoklonális antitestekkel (anti-CD4, -CD25 és -FoxP3) festettük, és áramlási citometriával analizáltuk.