Lactobacillus Casei -kannan Shirota sisältävän hapatetun maidon vaikutus Sarcopenia Vanhuksissa

1. Aiheiden ilmoittautuminen Sarkopenian määritelmä perustuu Asian Working Group for Sarcopenia (AWGS) -algoritmiin.

1. Lihasmassa: mitattu Inbody S10:llä ja standardoitu pituuden mukaan, esitetty luurankolihasindeksillä [SMI = appendikulaarinen lihasmassa (kg)/pituus (m2)]. Matala lihasmassa määriteltiin seuraavasti:

   • Miehet: SMI <7,0 kg/m2
   • Naiset: SMI <5,4 kg/m2

2. Kädensijan vahvuus: mitattu elektronisella kädensijadynamometrillä. Matala kädensijan vahvuus määriteltiin seuraavasti:

   • Miehet: <28 kg
   • Naiset: <18 kg

3. Raajojen vahvuus: mitattuna Time for 5 kertaa tuolijalustamenetelmällä. Matala raajan vahvuus määriteltiin seuraavasti:

   • Aika 5 kertaa tuolien jalustalle: ≧12s Sarkopenia määritettiin (1) ja yksi (2) tai (3)

     2. Tutkimusinterventio Testijuomat sisälsivät Yakult Companyn (Taipei, Taiwan) L. casei -kannan Shirota YIT9029 (LCS) kanssa fermentoitua käymismaitoa. Juomat jaettiin ja varastoitiin 0-10°C:n lämpötiloissa. Fermentaatiomaito sisälsi LCS:ää yli 3 x 10^8 CFU 100 ml:n pulloa kohti.

Osallistujat ottivat 2 pulloa päivässä (104 Kcal/päivä). Tutkimusinterventio tulee ottaa kahdesti päivässä suunnilleen samaan aikaan. Kaikki maidot lähetettäisiin osallistujalle viikoittain (14 pulloa/viikko).

3. Tutkimuksen arviointi 3-1 Antropometrinen mittaus ja kehon koostumuksen arviointi Antropometriset mittaustiedot mitattiin pituus, paino, vyötärön ympärysmitta, käsivarren lihaksen ympärysmitta, lantion ympärysmitta ja pohkeen ympärysmitta mittanauhan ja painovaa'an avulla.

Kehon koostumus havaittiin käyttämällä biosähköistä impedanssianalyysiä (BIA) ei-invasiivisena testivälineenä.

3-2 BIA Koehenkilöt seisovat selässä ilman kenkiä ja sukkia. Kädet eivät kosketa vartalon runko-osaa, ja ne leviävät luonnollisesti 15 asteen kulmaan poispäin vartalosta. Käsielektrodeissa on merkintä THUMB peukalon kohdalla ja KESKIMINEN keskisormelle. Jalkaelektrodit tulee sijoittaa tutkittavan nilkkaluun ja kantapään väliin. Sähkövirtaa syötettiin molempien jalkojen kantapään ja molempien käsien sormenpäiden elektrodeista.

3-3 Lihasvoima Standardiolosuhteissa mitattu pitovoima hyvin tutkitulla käsidynamometrillä ja vertailupopulaatioilla voi olla luotettava korvike monimutkaisemmille käsivarsien tai jalkojen lihasvoiman mittauksille. Mittauksessa käytetään elektronista kädensijadynamometriä. Matala kädensijan vahvuus määritellään miehille: <28 kg ; Naiset: <18kg. Raajan vahvuus mitattuna Time for 5 kertaa tuolitelineen. Koehenkilöt istuivat ja seisoivat viisi kertaa ja laskivat aikaa ajastimella. Alhainen raajan vahvuus on määritetty aika-ajalla Aika 5 kertaa tuolitelineen: ≧12s.

3-4 Fyysinen suorituskyky Fyysinen suorituskyky arvioitiin käyttämällä 6 metrin tavanomaista kävelynopeutta, TUG:tä ja SPPB:tä.

3-5 Kävelynopeus Osallistujia ohjeistettiin kävelemään seisontalähtöisestä tahdista, joka oli heille normaalia ja mukavaa, tai kävelemään niin nopeasti kuin osallistujat pystyivät, kunnes osallistujat saavuttivat merkityn polun loppuun. Koulutettu tutkija käveli osallistujan takana ja pysäytti ajanoton, kun osallistujan jalka kosketti lattiaa kävelykurssin lopussa. Osallistujille pidettiin taukoja tarpeen mukaan koko kokeen ajan. Matala Fyysinen suorituskyky on määritelty < 1 m/s.

3-6 TUG Osallistujia ohjeistettiin nousemaan ylös tuolista, kävelemään 3 metriä eteenpäin ja palaamaan istumaan tuolille. Matala Fyysinen suorituskyky määritellään ≧ 20 s.

3-7 SPPB:n osallistujaa seurattiin SPPB:hen testin tekemiseksi. Matala fyysinen suorituskyky on määritetty ≦ 9 pistettä.

3-8 bakteerien kokonaismäärä, suolen mikrobiston koostumus ja mikrobiotosta peräisin oleva aineenvaihduntaanalyysi

3-8-1 16S V1-V2 -sekvensointi Näytteiden genomin kokonais-DNA uutettiin ulostenäytteistä käyttämällä CTAB/SDS-menetelmää. 16S-rRNA-geenin V1-V2-alueet valittiin pyrosekvensointianalyysiä varten.

3-8-2 16S rRNA -geenisekvenssianalyysi 16S rRNA -geenisekvenssitiedot käsiteltiin QIIME v 1.8.0:lla käyttäen oletusparametreja. Sekvenssit ryhmiteltiin operatiivisiin taksonomisiin yksiköihin (OTU) 97 %:n samankaltaisuudella, ja sitten niille määritettiin Greengenes-taksonomia käyttämällä uclust consensus -taksonomialakitinta.

3-8-3 Ulosteen lyhytketjuiset rasvahapot Ulostenäytteet laimennettiin deionisoituun veteen ja homogenoitiin. Lyhytketjuisten rasvahappojen (SCFA) analyysiin käytettiin supernatanttia. Dietyylieetteriuutto suoritettiin Adornon et ai.

3-8-4 IPA- ja TMAO-määritystutkijat analysoivat IPA:n seerumin ja ulosteen tasoja LC-MS/MS:n avulla (4000 QTRAP, kaupunki, osavaltio, USA).

Plasman TMAO-pitoisuudet havaittiin stabiilin isotoopin (DLM4779-1, Andover, MA, USA) laimennusnestekromatografialla tandem-massaspektrometrialla (Ke et al., 2018).

3-8-5 Bakteerien kokonaismäärä qPCR:llä Bakteerien kokonaismäärä määritettiin qPCR-analyysillä Shiman et ai. kuvaaman menetelmän mukaisesti. (Beneficial Microbes, 2019) käyttäen eteenpäin suunnattua aluketta (UniF: GTGSTGCAYGGYYGTCGTCA) ja käänteistä aluketta (UniR: ACGTCRTCCMCNCCTTCCTC) sarjoja. Vakiokantana käytettiin Faecalibacterium prausnitzii ATCC27768T:tä.

3-9 Veren biokemialliset analyysit

3-9-1 Verinäytteet Verinäytteet kerättiin koehenkilöiltä ennen testiä ja testin jälkeen. Verinäytteet laitettiin keräysputkiin, jotka sisälsivät antikoagulanttia EDTA:ta ja hepariinia.

3-9-2 Aineenvaihduntaparametrit Kaikki aineenvaihduntamittaukset suoritettiin päivää ennen interventiota ja sen lopussa. CBC, TSH, vapaa T4, D-vitamiini, kokonaiskolesteroli, HDL-kolesteroli, LDL-kolesteroli, triglyseridit, paastoglukoosi, paastoinsuliini, veren urea, typpi, plasman prealbumiini, albumiini, ALT, AST, HbA1c, HS-CRP, osteokalsiini, adiponektiini, leptiini, serotoniini ja kreatiniini mitattiin vähintään 8 tunnin paaston jälkeen.

3-9-3 Plasman aminohappoanalyysin tutkijat käyttivät Hitachi L-8900 -aminohappoanalysaattoria (sijainti) alaniinin, fenyylialaniinin, kysteiinin, asparagiinihapon, asparagiinin, glutamiinihapon, glutamiinin, glysiinin, histidiinin, leusiinin ja isoleukiinin havaitsemiseen ja määrittämiseen. lysiini, proliini, arginiini, seriini, treoniini, valiini, tryptofaani, tyrosiini ja metioniini plasmanäytteissä.

3-9-4 Tulehduksellisten sytokiinien analyysi Tulehdukseen liittyvät seerumin sytokiinit TNF-a, TGF-p, IL-6, IL-17 ja IL-10 analysoitiin käyttämällä kolorimetrisiä kittejä (Elabscience, Kiina). Menettelyt seurasivat pakkauksen ohjeita ja mitattiin käyttämällä ELISA-lukijaa (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-5 Antioksidanttimarkkerianalyysi Monet antioksidanttientsyymit ihmiskehoissa, kuten superoksididismutaasi (SOD) (Elabscience, Kiina), glutationiperoksidaasi (GPx) (biovision, kaupunki, osavaltio, USA) ja katalaasi (CAT) ) (biovision, kaupunki, osavaltio, USA). Seerumin entsyymien aktiivisuus arvioitiin ELISA-pakkauksella. Menettelyt seurasivat pakkauksen ohjeita ja mitattiin ELISA-lukijalla (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-6 hivenaineita Noin 1 ml jokaisesta kokoverinäytteestä digestoitiin mikroaaltouunissa 3 ml:lla 65 % typpihappoa (Ultrapure Reagent, J.T. Baker). Tämän jälkeen tutkijat pestiin jäännökset mikroaaltoputkissa 2 % typpihapolla ja suodattivat sitten sulatetut nesteet 0,22 μm:n suodattimella. Suodatetut kokonaisliuokset säilytettiin 15 ml:n sentrifugiputkissa. Pb:n, Cd:n, As:n, Hg:n, Mn:n, Al:n, Tl:n, V:n, Na:n, K:n, Mg:n, Ca:n, Fe:n, Zn:n, Se:n tasot määritettiin käyttämällä induktiivisesti kytkettyä plasmamassaspektrometriaa (ICP-MS; Agilent 7800).

3-9-7 Immuunitoiminnan analyysi T-soluissa, jotka tunkeutuvat luurankolihakseen, säätelevät T-solut (Tregs) ovat pääosa. Tregit voivat säädellä lihaksen tulehdusta ja edistää lihasten uusiutumista; kuitenkin, että ikääntyneessä lihaksessa toimivat Tregit edistivät tulehduksen katabolista vaikutusta [EbioMedicine. 2019 marraskuu;49:381-388.] Verisolut värjättiin monoklonaalisilla vasta-aineilla (anti-CD4, -CD25 ja -FoxP3) ja analysoitiin virtaussytometrialla.