Effect van gefermenteerde melk die Lactobacillus Casei-stam Shirota bevat bij sarcopenie Ouderen

1. Onderwerpinschrijving De definitie van sarcopenie is gebaseerd op het algoritme van de Asian Working Group for Sarcopenia (AWGS).

1. Spiermassa: gemeten met behulp van Inbody S10 en gestandaardiseerd op lengte, weergegeven door skeletspierindex [SMI=appendiculaire spiermassa (kg)/lengte (m2)]. Lage spiermassa werd gedefinieerd als:

   • Mannen: SMI <7,0 kg/m2
   • Vrouwen: SMI <5,4 kg/m2

2. Handgreepkracht: gemeten met elektronische handgreepdynamometer. Lage handgreepkracht werd gedefinieerd als:

   • Mannen: <28 kg
   • Vrouwen: <18 kg

3. Ledematensterkte: gemeten door Tijd gedurende 5 keer voor stoelstandaardmethode. Lage ledemaatsterkte werd gedefinieerd als:

   • Tijd voor 5 keer staan ​​voor stoel: ≧12s Sarcopenie werd gedefinieerd door (1) en een van (2), of (3)

     2. Studie-interventie Testdranken inbegrepen Fermentatie Melk gefermenteerd met L. casei-stam Shirota YIT9029 (LCS) geleverd door de Yakult Company (Taipei, Taiwan). De dranken werden uitgedeeld en bewaard bij temperaturen variërend van 0-10°C. De fermentatiemelk bevatte LCS met meer dan 3x10^8 CFU per fles van 100 ml.

De deelnemers namen 2 flesjes per dag (104 Kcal/dag). Studie-interventie moet tweemaal daags op ongeveer hetzelfde tijdstip worden ingenomen. Alle melk wordt wekelijks naar de deelnemer gestuurd (14 flessen/week).

3. Onderzoeksbeoordeling 3-1 Antropometrische meting en beoordeling van de lichaamssamenstelling Antropometrische meetgegevens werden gedetecteerd met behulp van een meetlint en een weegschaal.

De lichaamssamenstelling werd gedetecteerd met behulp van bio-elektrische impedantieanalyse (BIA) als een niet-invasief testinstrument.

3-2 BIA Proefpersonen staan ​​op de meet zonder schoenen en sokken. Armen raken het rompgedeelte van het lichaam niet en worden op natuurlijke wijze gespreid tot een hoek van 15 graden weg van de romp. De handelektroden zijn gemarkeerd met DUIM voor de duim en MIDDEN voor de middelvinger. De voetelektroden moeten tussen het enkelbeen en de hiel van de proefpersoon worden geplaatst. Elektrische stroom werd geleverd door de elektroden op de toppen van de hielen van beide voeten en de vingertoppen van beide handen.

3-3 Spierkracht Grijpkracht gemeten onder standaardomstandigheden met een goed bestudeerd model van een handdynamometer met referentiepopulaties kan een betrouwbaar surrogaat zijn voor meer gecompliceerde metingen van spierkracht in de onderarmen of benen. De meting maakt gebruik van een elektronische handdynamometer. Lage handgreepkracht wordt gedefinieerd bij mannen: <28 kg; Vrouwen: <18kg. Ledematensterkte gemeten door Tijd gedurende 5 keer voor stoelstandaard. De proefpersonen zaten en stonden vijf keer en berekenden de tijd per timer. Lage kracht van ledematen wordt gedefinieerd in tijd voor Tijd voor 5 keer voor stoelstand: ≧12s.

3-4 Fysieke prestaties Fysieke prestaties werden beoordeeld door gebruik te maken van de gebruikelijke loopsnelheid van 6 meter, TUG en SPPB.

3-5 Loopsnelheid De deelnemers kregen de instructie om vanuit stilstand te lopen in een tempo dat normaal en comfortabel voor hen was, of om zo snel mogelijk te lopen totdat de deelnemers het einde van het gemarkeerde pad bereikten. Een getrainde examinator liep achter de deelnemer en stopte met timen toen de voet van de deelnemer de grond raakte aan het einde van het loopparcours. Tijdens de testsessie kregen de deelnemers indien nodig rustpauzes. Laag Fysieke prestatie is gedefinieerd < 1 m/s.

3-6 TUG De deelnemers kregen de instructie om op te staan ​​uit de stoel, 3 meter naar voren te lopen en weer terug te gaan om op de stoel te gaan zitten. Laag Fysieke prestaties zijn gedefinieerd als ≧ 20s.

3-7 SPPB-deelnemers werden naar SPPB gevolgd om de test te doen. Laag Fysieke prestatie is gedefinieerd ≦ 9 scores.

3-8 Totaal aantal bacteriën, samenstelling van de darmmicrobiota en analyse van van microbiota afgeleide metabolieten

3-8-1 16S V1-V2 Sequencing Totaal genoom-DNA uit monsters werd geëxtraheerd uit ontlastingsmonsters met behulp van de CTAB/SDS-methode. De V1-V2-regio's van het 16S-rRNA-gen werden geselecteerd voor pyrosequencing-analyse.

3-8-2 16S rRNA-gensequentieanalyse 16S rRNA-gensequentiegegevens werden verwerkt met QIIME v 1.8.0 met behulp van standaardparameters. De sequenties werden geclusterd in operationele taxonomische eenheden (OTU's) met een overeenkomst van 97% en vervolgens werd de Greengenes-taxonomie toegewezen met behulp van de uclust consensus-taxonomieclassificatie.

3-8-3 Fecale vetzuren met korte keten De fecale monsters werden verdund in gedeïoniseerd water en gehomogeniseerd. Voor analyse van vetzuren met een korte keten (SCFA) werd een supernatant gebruikt. Diethyletherextractie werd uitgevoerd met behulp van de methode van Adorno et al.

3-8-4 IPA- en TMAO-bepaling Onderzoekers analyseerden serum- en fecale niveaus van IPA met behulp van LC-MS/MS (4000 QTRAP, City, State, VS).

De plasma-TMAO-concentraties werden gedetecteerd door stabiele isotoop (DLM4779-1, Andover, MA, VS) verdunning vloeistofchromatografie tandem massaspectrometrie (Ke et al., 2018).

3-8-5 Totaal aantal bacteriën door qPCR Het totaal aantal bacteriën werd bepaald door middel van qPCR-analyse volgens de methode beschreven door Shima et al. (Beneficial Microbes, 2019) met behulp van een voorwaartse primer (UniF: GTGSTGCAYGGYYGTCGTCA) en een omgekeerde primer (UniR: ACGTCRTCCMCNCCTTCCTC) sets. Faecalibacterium prausnitzii ATCC27768T werd als standaardstam gebruikt.

3-9 Biochemische bloedanalyses

3-9-1 Bloedafname Bij de proefpersonen werden voor en na de test bloedmonsters afgenomen. De bloedmonsters werden in verzamelbuisjes met antistollingsmiddel EDTA en heparine geplaatst.

3-9-2 Metabolische parameters Alle metabole metingen werden één dag voor aanvang van de interventie en aan het einde van de interventie uitgevoerd. CBC, TSH, Vrij T4, Vit-D, Totaal cholesterol, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, triglyceriden, nuchtere glucose, nuchtere insuline, bloedureum, stikstof, plasma prealbumine, albumine, ALT, AST, HbA1c, HS-CRP, osteocalcine, adiponectine, leptine, serotonine en creatinine werden gemeten na ten minste 8 uur vasten.

3-9-3 Plasma-aminozuuranalyse Onderzoekers gebruikten een Hitachi L-8900 aminozuuranalysator (locatie) om alanine, fenylalanine, cysteïne, asparaginezuur, asparagine, glutaminezuur, glutamine, glycine, histidine, leucine, isoleucine te detecteren en te kwantificeren , lysine, proline, arginine, serine, threonine, valine, tryptofaan, tyrosine en methionine in de plasmamonsters.

3-9-4 Analyse van ontstekingscytokinen De met ontsteking geassocieerde serumcytokines TNF-a, TGF-p, IL-6, IL-17 en IL-10 werden geanalyseerd met behulp van colorimetrische kits (Elabscience, China). De procedures volgden de kitinstructies en werden gemeten met behulp van een ELISA-lezer (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, VS).

3-9-5 Anti-oxidant merkeranalyse Veel anti-oxidant enzymen in het menselijk lichaam, zoals Superoxide dismutase (SOD) (Elabscience, China), Glutathione peroxidase (GPx) (biovision, City, State, USA) en Catalase (CAT ) (biovisie, stad, staat, VS). Enzymen in het serum werden beoordeeld op hun activiteit met behulp van een ELISA-kit. De procedures volgden de kitinstructies en werden gemeten door de ELISA-lezer (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, VS).

3-9-6 Spoorelementen Ongeveer 1 ml van elk volbloedmonster werd in de magnetron afgebroken met 3 ml 65% salpeterzuur (Ultrapure Reagent, J.T. Baker). Vervolgens wasten de onderzoekers de residuen in microgolfbuizen met 2% salpeterzuur en filterden vervolgens de verteerde vloeistoffen met een filter van 0,22 μm. De totaal gefiltreerde oplossingen werden bewaard in centrifugebuizen van 15 ml. De niveaus van Pb, Cd, As, Hg, Mn, Al, Tl, V, Na, K, Mg, Ca, Fe, Zn, Se werden bepaald met behulp van inductief gekoppelde plasmamassaspectrometrie (ICP-MS; Agilent 7800).

3-9-7 Immuunfunctie-analyse In T-cellen die skeletspieren infiltreren, vormen regulerende T-cellen (Tregs) een belangrijke subgroep. Tregs kunnen ontstekingen in spieren reguleren en de regeneratie van spieren bevorderen; het katabole effect van ontsteking werd echter bevorderd door de disfunctionele Tregs in verouderde spieren. [EbioMedicine. 2019 nov;49:381-388.] De bloedcellen werden gekleurd met monoklonale antilichamen (anti-CD4, -CD25 en -FoxP3) en geanalyseerd met flowcytometrie.