Účinek fermentovaného mléka obsahujícího Lactobacillus Casei kmen Shirota u sarkopenie starších osob

1. Zápis subjektu Definice sarkopenie je založena na algoritmu Asian Working Group for Sarcopenia (AWGS).

1. Svalová hmota: měřeno pomocí Inbody S10 a standardizováno podle výšky, znázorněné indexem kosterního svalstva [SMI=hmotnost apendikulárního svalstva (kg)/výška (m2)]. Nízká svalová hmota byla definována jako:

   • Muži: SMI <7,0 kg/m2
   • Ženy: SMI <5,4 kg/m2

2. Síla rukojeti: měřena elektronickým dynamometrem rukojeti. Nízká síla úchopu byla definována jako:

   • Muži: <28 kg
   • Ženy: <18 kg

3. Síla končetin: měřeno pomocí Time for 5 krát pro metodu stojanu na židli. Nízká síla končetin byla definována jako:

   • Doba pro 5 stání na židli: ≧12 s Sarkopenie byla definována (1) a jednou z (2), nebo (3)

     2. Intervence studie Testované nápoje zahrnovaly Fermentační mléko fermentované kmenem L. casei Shirota YIT9029 (LCS) poskytované společností Yakult Company (Taipei, Taiwan). Nápoje byly distribuovány a skladovány při teplotách v rozmezí 0-10 °C. Fermentační mléko obsahovalo LCS ve více než 3x10^8 CFU na 100 ml lahvičku.

Účastníci by brali 2 lahve denně (104 kcal/den). Intervence studie by měla být prováděna dvakrát denně přibližně ve stejnou dobu. Všechna mléka budou účastníkům zasílána týdně (14 lahví/týden).

3. Vyhodnocení studie 3-1 Antropometrické měření a hodnocení tělesného složení Údaje z antropometrických měření byly zjištěny pomocí měřicí pásky a váhové váhy.

Složení těla bylo detekováno pomocí bioelektrické impedanční analýzy (BIA) jako neinvazivního testovacího nástroje.

3-2 BIA Subjekty stojí na metě bez bot a ponožek. Paže se nedotýkají trupové části těla a jsou přirozeně roztaženy do úhlu 15 stupňů od trupu. Ruční elektrody jsou označeny THUMB pro palec a MIDDLE pro prostředníček. Nožní elektrody by měly být umístěny mezi hlezenní kost a patu vyšetřovaného. Elektrický proud byl přiváděn z elektrod na špičkách pat obou nohou a na konečcích prstů obou rukou.

3-3 Svalová síla Síla úchopu měřená za standardních podmínek s dobře prostudovaným modelem ručního dynamometru s referenčními populacemi může být spolehlivou náhradou za komplikovanější měření svalové síly v dolní části paží nebo nohou. Měření využívá elektronický ruční dynamometr. Nízká síla úchopu je definována u mužů: <28 kg ; Ženy: < 18 kg. Síla končetin měřená časem 5krát pro stojan na židli. Subjekty pětkrát seděly a stály a počítaly čas podle časovače. Nízká síla končetin je definována v čase pro Čas 5krát pro stoj na židli: ≧12s.

3-4 Fyzická výkonnost Fyzická výkonnost byla hodnocena pomocí 6metrové obvyklé rychlosti chůze, TUG a SPPB.

3-5 Rychlost chůze Účastníci byli instruováni, aby šli z místa na místo tempem, které je pro ně normální a pohodlné, nebo aby šli tak rychle, jak účastníci mohli, dokud účastníci nedosáhnou konce vyznačené cesty. Vyškolený examinátor šel za účastníkem a zastavil měření času, když se noha účastníka dotkla podlahy na konci kurzu chůze. Účastníkům byly poskytnuty přestávky na odpočinek podle potřeby po celou dobu testování. Nízká fyzická výkonnost je definována < 1 m/s.

3-6 TUG Účastníci byli instruováni, aby vstali ze židle, šli 3 metry vpřed a vrátili se a posadili se na židli. Nízká fyzická výkonnost je definována ≧ 20s.

3-7 SPPB Účastníci byli sledováni do SPPB, aby provedli test. Nízká fyzická výkonnost je definována ≦ 9 skóre.

3-8 Celkový počet bakterií, složení střevní mikrobioty a analýza metabolitů odvozených od mikrobioty

3-8-1 Sekvenování 16S V1-V2 Celková genomová DNA ze vzorků byla extrahována ze vzorků stolice metodou CTAB/SDS. Oblasti V1-V2 genu 16S rRNA byly vybrány pro pyrosekvenační analýzu.

3-8-2 Analýza sekvence genu 16S rRNA Data o sekvenci genu 16S rRNA byla zpracována pomocí QIIME v 1.8.0 s použitím výchozích parametrů. Sekvence byly seskupeny do operačních taxonomických jednotek (OTU) s 97% podobností a poté přiřazeny Greengenes taxonomii pomocí klasifikátoru uclust consensus taxonomy.

3-8-3 Fekální mastné kyseliny s krátkým řetězcem Vzorky stolice byly zředěny v deionizované vodě a homogenizovány. Pro analýzu mastných kyselin s krátkým řetězcem (SCFA) byl použit supernatant. Extrakce diethyletherem byla provedena za použití metody Adorna et al.

3-8-4 Stanovení IPA a TMAO Výzkumníci analyzovali sérové ​​a fekální hladiny IPA pomocí LC-MS/MS (4000 QTRAP, City, State, USA).

Plazmatické koncentrace TMAO byly detekovány stabilní izotopovou (DLM4779-1, Andover, MA, USA) diluční kapalinovou chromatografií tandemovou hmotnostní spektrometrií (Ke et al., 2018).

3-8-5 Celkový počet bakterií pomocí qPCR Celkové počty bakterií byly stanoveny analýzou qPCR podle metody popsané Shima et al. (Beneficial Microbes, 2019) pomocí sad dopředného primeru (UniF: GTGSTGCAYGGYYGTCGTCA) a reverzního primeru (UniR: ACGTCRTCCMCNCCTTCCTC). Jako standardní kmen byl použit Faecalibacterium prausnitzii ATCC27768T.

3-9 Biochemické analýzy krve

3-9-1 Odběr vzorků krve Vzorky krve byly odebírány subjektům před testem a po testu. Vzorky krve byly umístěny do odběrových zkumavek obsahujících antikoagulant EDTA a heparin.

3-9-2 Metabolické parametry Všechna metabolická měření byla provedena jeden den před začátkem intervence a na konci intervence. CBC, TSH, volný T4, Vit-D, celkový cholesterol, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol, triglyceridy, glukóza nalačno, inzulín nalačno, močovina v krvi, dusík, plazmatický prealbumin, albumin, ALT, AST, HbA1c, HS-CRP, osteokalcin, adiponektin, leptin, serotonin a kreatinin byly měřeny po lačnění alespoň 8 hodin.

3-9-3 Analýza plazmatických aminokyselin Výzkumníci použili analyzátor aminokyselin Hitachi L-8900 (umístění) k detekci a kvantifikaci alaninu, fenylalaninu, cysteinu, kyseliny asparagové, asparaginu, kyseliny glutamové, glutaminu, glycinu, histidinu, leucinu, isoleucinu lysin, prolin, arginin, serin, threonin, valin, tryptofan, tyrosin a methionin ve vzorcích plazmy.

3-9-4 Analýza zánětlivých cytokinů Se zánětem spojené cytokiny TNF-a, TGF-p, IL-6, IL-17 a IL-10 byly analyzovány pomocí kolorimetrických souprav (Elabscience, Čína). Postupy se řídily instrukcemi soupravy a byly měřeny pomocí čtečky ELISA (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-5 Analýza antioxidačních markerů Mnoho antioxidačních enzymů v lidských tělech, jako je superoxiddismutáza (SOD) (Elabscience, Čína), glutathionperoxidáza (GPx) (biovision, City, State, USA) a kataláza (CAT ) (biovize, město, stát, USA). Aktivita enzymů v séru byla hodnocena pomocí soupravy ELISA. Postupy se řídily instrukcemi soupravy a byly měřeny čtečkou ELISA (Bio Tek, PowerWave XS2, City, State, USA).

3-9-6 Stopové prvky Přibližně 1 ml každého vzorku plné krve byl štěpen mikrovlnami se 3 ml 65% kyseliny dusičné (Ultrapure Reagent, J.T. Baker). Následně vyšetřovatelé promyli zbytky v mikrovlnných zkumavkách 2% kyselinou dusičnou a poté filtrovali natrávené tekutiny filtrem 0,22 μm. Celkové přefiltrované roztoky byly skladovány v 15ml centrifugačních zkumavkách. Hladiny Pb, Cd, As, Hg, Mn, Al, Tl, V, Na, K, Mg, Ca, Fe, Zn, Se byly stanoveny pomocí hmotnostní spektrometrie s indukčně vázaným plazmatem (ICP-MS; Agilent 7800).

3-9-7 Analýza imunitní funkce V T-buňkách infiltrujících kosterní sval jsou hlavní podskupinou regulační T-buňky (Treg). Tregy mohou regulovat zánět ve svalu a podporovat regeneraci svalů; nicméně, katabolický účinek zánětu byl podporován dysfunkčními Tregs ve stárnoucích svalech [EbioMedicine. listopad 2019;49:381-388.] Krvinky byly obarveny monoklonálními protilátkami (anti-CD4, -CD25 a -FoxP3) a analyzovány průtokovou cytometrií.