Phénotype du sperme et régions différentiellement méthylées (Epigenetics)
Association entre la distance anogénitale, le phénotype du sperme et l'épigénétique chez les hommes infertiles.
Le syndrome de dysgénésie testiculaire (TDS) est connu pour provoquer des anomalies épigénétiques dans les spermatozoïdes. La distance anogénitale (AGD) est considérée comme un marqueur clinique approprié du TDS, mais le lien direct entre l'AGD et les anomalies épigénétiques fait toujours défaut.
Les hommes infertiles (n = 10) présentant une AGD raccourcie et un groupe témoin de donneurs de sperme normaux (n = 10) avec une AGD normale seront ensuite invités à fournir un échantillon de sperme chacun. À l'aide d'un cytomètre en flux et d'un trieur (FACS), leurs spermatozoïdes seront triés en populations de spermatozoïdes avec/sans fragmentation de l'ADN ou avec/sans décondensation de la chromatine. Ces populations triées de spermatozoïdes seront ensuite examinées pour les différences d'empreintes épigénétiques en utilisant l'analyse de l'expression du génome entier. Alors que le tri des spermatozoïdes sera effectué à Bâle, l'analyse épigénétique sera effectuée à l'Université de Genève.
Aperçu de l'étude
Statut
Les conditions
Intervention / Traitement
Description détaillée
Un sous-ensemble de 10 hommes avec un AGD raccourci (avec un groupe témoin de 10 donneurs fertiles avec un AGD normal) sera invité à fournir jusqu'à trois échantillons de sperme, dont chacun sera ensuite trié avec FACS en sous-populations avec/sans fragmentation de l'ADN et en sous-populations avec/sans décondensation de la chromatine.
Les spermatozoïdes avec de l'ADN fragmenté seront séparés par tri FACS des spermatozoïdes avec de l'ADN intact à l'aide du colorant YoPro 1, dont il a été démontré qu'il est en corrélation significative avec le degré de fragmentation de l'ADN dans les noyaux du sperme.
De plus, les spermatozoïdes présentant un remodelage anormal de la chromatine seront séparés par tri des spermatozoïdes présentant une chromatine condensée à l'aide du fluorochrome chromomycine A3 (CMA3), qui entre en compétition pour la protamine pour se lier au petit sillon de l'ADN, corrélant ainsi la persistance des histones dans les noyaux des spermatozoïdes. . Des expériences pilotes ont démontré la corrélation très significative et étroite de CMA3 avec la coloration au bleu d'aniline. La coloration au bleu d'aniline n'est pas adaptée à l'expérience de tri, car elle nécessite la fixation des spermatozoïdes. Le tri basé sur CMA3 peut être réalisé avec des spermatozoïdes vivants.
Les échantillons triés et anonymisés seront ensuite envoyés congelés dans de la neige carbonique à un laboratoire de l'Université de Genève pour l'évaluation des différences dans l'empreinte épigénétique de l'ADN à l'aide d'études d'expression du génome entier.
Type d'étude
Inscription (Réel)
Contacts et emplacements
Lieux d'étude
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Basel, Suisse, 4031
- Christian De Geyter
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Critères de participation
Critère d'éligibilité
Âges éligibles pour étudier
Accepte les volontaires sains
Méthode d'échantillonnage
Population étudiée
La description
Critère d'intégration:
- hommes infertiles avec distance anogénitale connue
Critère d'exclusion:
- la concentration de spermatozoïdes doit être supérieure à 15 millions/ml pour permettre un tri approprié par cytométrie en flux...
Plan d'étude
Comment l'étude est-elle conçue ?
Détails de conception
- Modèles d'observation: Cas-témoins
- Perspectives temporelles: Éventuel
Cohortes et interventions
Groupe / Cohorte |
Intervention / Traitement |
|---|---|
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hommes hypofertiles
10 hommes infertiles avec AGD raccourci (< 40 mm)
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tri des spermatozoïdes par cytométrie en flux.
En présence d'un nombre insuffisant de spermatozoïdes après tri (
Autres noms:
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donneurs de sperme fertiles
10 donneurs de sperme fertile avec AGD normal (> 40 mm)
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tri des spermatozoïdes par cytométrie en flux.
En présence d'un nombre insuffisant de spermatozoïdes après tri (
Autres noms:
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Que mesure l'étude ?
Principaux critères de jugement
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
|---|---|---|
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distance anogénitale et épigénétique
Délai: 6 mois
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nombre de séquences régulatrices transposables différentiellement méthylées dans le génome de spermatozoïdes triés.
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6 mois
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Mesures de résultats secondaires
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
|---|---|---|
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spermatozoïde phénotype 1
Délai: 6 mois
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sur la base d'analyses de sperme conventionnelles : concentration de spermatozoïdes (en mill/ml).
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6 mois
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spermatozoïde phénotype 2
Délai: 6 mois
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basé sur l'analyse conventionnelle du sperme : motilité progressive (en %).
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6 mois
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spermatozoïde phénotype 3
Délai: 6 mois
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sur la base d'analyses de sperme conventionnelles : morphologie normale (en %), coloration).
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6 mois
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spermatozoïde phénotype 4
Délai: 6 mois
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décondensation de la chromatine (donnée en % de coloration CMA3).
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6 mois
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phénotype de sperme 5
Délai: 6 mois
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Fragmentation de l'ADN (% de coloration YoPro 1).
|
6 mois
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Collaborateurs et enquêteurs
Parrainer
Collaborateurs
Dates d'enregistrement des études
Dates principales de l'étude
Début de l'étude (Réel)
Achèvement primaire (Réel)
Achèvement de l'étude (Réel)
Dates d'inscription aux études
Première soumission
Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité
Première publication (Réel)
Mises à jour des dossiers d'étude
Dernière mise à jour publiée (Réel)
Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité
Dernière vérification
Plus d'information
Termes liés à cette étude
Termes MeSH pertinents supplémentaires
Autres numéros d'identification d'étude
- RME12072017
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