Fenotyp plemników i regiony zróżnicowanej metylacji (Epigenetics)
Związek między odległością odbytowo-płciową, fenotypem plemników i epigenetyką u niepłodnych mężczyzn.
Wiadomo, że zespół dysgenezji jąder (TDS) powoduje nieprawidłowości epigenetyczne w plemnikach. Uważa się, że odległość odbytowo-płciowa (AGD) jest odpowiednim klinicznym markerem TDS, ale wciąż brakuje bezpośredniego związku między AGD a nieprawidłowościami epigenetycznymi.
Niepłodni mężczyźni (n=10) ze skróconą AGD i grupa kontrolna normalnych dawców nasienia (n=10) z prawidłową AGD zostaną następnie poproszeni o dostarczenie po jednej próbce nasienia. Za pomocą cytometru przepływowego i sortera (FACS) ich plemniki zostaną posortowane na populacje plemników z/bez fragmentacji DNA lub z/bez dekondensacji chromatyny. Te posortowane populacje plemników zostaną następnie zbadane pod kątem różnic w różnicach imprintingu epigenetycznego przy użyciu analizy ekspresji całego genomu. Podczas gdy sortowanie plemników zostanie przeprowadzone w Bazylei, analiza epigenetyczna zostanie przeprowadzona na Uniwersytecie Genewskim.
Przegląd badań
Status
Warunki
Interwencja / Leczenie
Szczegółowy opis
Podgrupa 10 mężczyzn ze skróconą AGD (wraz z grupą kontrolną 10 płodnych dawców z prawidłową AGD) zostanie poproszona o dostarczenie do trzech próbek nasienia, z których każda zostanie następnie posortowana za pomocą FACS na subpopulacje z/bez fragmentacji DNA i na subpopulacje z/bez dekondensacji chromatyny.
Plemniki z pofragmentowanym DNA zostaną rozdzielone poprzez sortowanie FACS plemników z nienaruszonym DNA przy użyciu barwnika YoPro 1, który, jak wykazano, istotnie koreluje ze stopniem fragmentacji DNA w jądrach plemników.
Ponadto plemniki z nieprawidłową przebudową chromatyny zostaną oddzielone poprzez sortowanie od plemników ze skondensowaną chromatyną przy użyciu fluorochromu chromomycyny A3 (CMA3), która konkuruje o protaminę o wiązanie z mniejszym rowkiem DNA, korelując w ten sposób z trwałością histonów w jądrach plemników . Eksperymenty pilotażowe wykazały bardzo istotną i bliską korelację CMA3 z barwieniem błękitem aniliny. Barwienie błękitem aniliny nie nadaje się do eksperymentu sortowania, ponieważ wymaga utrwalenia plemników. Sortowanie na podstawie CMA3 można przeprowadzić z żywymi plemnikami.
Posortowane i zanonimizowane próbki zostaną następnie wysłane zamrożone w suchym lodzie do laboratorium na Uniwersytecie Genewskim w celu oceny różnic w imprintingu epigenetycznym DNA przy użyciu badań ekspresji całego genomu.
Typ studiów
Zapisy (Rzeczywisty)
Kontakty i lokalizacje
Lokalizacje studiów
-
-
-
Basel, Szwajcaria, 4031
- Christian De Geyter
-
-
Kryteria uczestnictwa
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
Akceptuje zdrowych ochotników
Metoda próbkowania
Badana populacja
Opis
Kryteria przyjęcia:
- niepłodnych mężczyzn ze znaną odległością odbytowo-płciową
Kryteria wyłączenia:
- stężenie plemników musi być większe niż 15 milionów/ml, aby umożliwić odpowiednie sortowanie za pomocą cytometrii przepływowej...
Plan studiów
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
- Modele obserwacyjne: Kontrola przypadków
- Perspektywy czasowe: Spodziewany
Kohorty i interwencje
Grupa / Kohorta |
Interwencja / Leczenie |
|---|---|
|
niepłodni mężczyźni
10 niepłodnych mężczyzn ze skróconą AGD (< 40 mm)
|
sortowanie plemników metodą cytometrii przepływowej.
W przypadku niewystarczającej liczby plemników po sortowaniu (
Inne nazwy:
|
|
płodnych dawców nasienia
10 płodnych dawców nasienia z prawidłową AGD (>40 mm)
|
sortowanie plemników metodą cytometrii przepływowej.
W przypadku niewystarczającej liczby plemników po sortowaniu (
Inne nazwy:
|
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
odległość anogenitalna i epigenetyka
Ramy czasowe: 6 miesięcy
|
liczba różnicowo metylowanych transpozycyjnych sekwencji regulatorowych w genomie sortowanych plemników.
|
6 miesięcy
|
Miary wyników drugorzędnych
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
fenotyp plemników 1
Ramy czasowe: 6 miesięcy
|
na podstawie konwencjonalnej analizy nasienia: stężenie plemników (w mililitrach/ml).
|
6 miesięcy
|
|
fenotyp plemników 2
Ramy czasowe: 6 miesięcy
|
na podstawie konwencjonalnej analizy nasienia: ruchliwość progresywna (w %).
|
6 miesięcy
|
|
fenotyp plemników 3
Ramy czasowe: 6 miesięcy
|
na podstawie konwencjonalnej analizy nasienia: morfologia prawidłowa (w %), wybarwienie).
|
6 miesięcy
|
|
fenotyp plemników 4
Ramy czasowe: 6 miesięcy
|
dekondensacja chromatyny (podana jako % barwienia CMA3).
|
6 miesięcy
|
|
fenotyp plemników 5
Ramy czasowe: 6 miesięcy
|
Fragmentacja DNA (% barwienia YoPro 1).
|
6 miesięcy
|
Współpracownicy i badacze
Sponsor
Współpracownicy
Daty zapisu na studia
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (Rzeczywisty)
Zakończenie podstawowe (Rzeczywisty)
Ukończenie studiów (Rzeczywisty)
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
Pierwszy wysłany (Rzeczywisty)
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Rzeczywisty)
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
Ostatnia weryfikacja
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Dodatkowe istotne warunki MeSH
Inne numery identyfikacyjne badania
- RME12072017
Plan dla danych uczestnika indywidualnego (IPD)
Planujesz udostępniać dane poszczególnych uczestników (IPD)?
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
produkt wyprodukowany i wyeksportowany z USA
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .