Az azitromicin, telitromicin és levofloxacin összehasonlító hatása a gyógyszer-metabolizáló enzimekre

Konkrét célok

1. Mi a célja ennek a tanulmánynak? Milyen kérdésre hivatott válaszolni?

   Az azitromicin, telitromicin és levofloxacin hatásának összehasonlítása 7 májban lévő gyógyszert metabolizáló enzim aktivitására a Cooperstown 5+1 koktél segítségével.

   Háttér

2. Miért fontos ez a tanulmány?

Korábban kimutattuk, hogy széles körű gyógyszerkölcsönhatás-szűrés végezhető enzimspecifikus szondákkal, mint például orális koffein a CYP1A2, N-acetil-traferáz-2 (NAT-2) és xantin-oxidáz (XO), warfarin és K-vitamin a CYP2C9 esetében, omeprazol. a CYP 2C19 esetében, a dextrometorfán a CYP2D6 esetében és a midazolam a CYP3A4/5 esetében. A szondáknak ezt a kombinációját a Cooperstown 5+1 Cocktail (5+1) validálták.1 Az 5+1 koktél használata információt nyújt azokról a gyógyszer-metabolizáló enzimekről, amelyek a májban eliminálódó gyógyszerek 90%-át a költségek töredékéért metabolizálják. az egyes tanulmányok. A biomarkerek koktéljának használata csökkenti a gyógyszerkölcsönhatás-szűrés összköltségét. Az FDA jelezte, hogy a specifikus gyógyszerkölcsönhatási vizsgálatok helyett próbagyógyszerek alkalmazása is elvégezhető.2 Ez leegyszerűsíti a gyógyszerkölcsönhatások észlelését és csökkenti a költségeket. Fontos azonban a genetikai polimorfizmus ellenőrzése a gyógyszerkölcsönhatási vizsgálatok során, hogy a genetikai felépítés ne befolyásolja az eredményt.

Kísérleti tervezés és módszerek 3) Ismertesse részletesen a kísérleti tervezést és módszertant! Milyen információkat gyűjtenek, és hogyan gyűjtik azokat? Adjon leírást a tantárgy részvételéről az elejétől a végéig.

A vizsgálat bármely eljárása előtt minden alanynak írásos beleegyezését kell adnia. Valamennyi alanynál genotípust határoznak meg a CYP2D6, CYP2C9 és CYP2C19 szempontjából, miután megkapták a farmakogenomikához való tájékozott beleegyezést. Ezzel meg kell különböztetni a gyenge metabolizálókat az intenzív metabolizálóktól.

A vizsgálat előtti szűrésre az első vizsgálati fázist követő 4 héten belül kerül sor. Az alanyok teljes kórelőzményén, szociális anamnézisén (beleértve a gyógyszeres kezelést, az alkoholfogyasztást és a dohányzást is), fizikális vizsgálaton, szabványos 12 elvezetéses elektrokardiogramon (EKG) és laboratóriumi szűrésen vesznek részt, hogy megbizonyosodjanak arról, hogy a felvételi és kizárási kritériumok teljesülnek. A beszerzendő laboratóriumi szűrési adatok a következők: teljes vérkép, protrombin idő (PT), nemzetközi normalizált arány (INR), makroszkópos és mikroszkópos vizeletvizsgálat, elektrolitok, vér karbamid nitrogén (BUN), szérum kreatinin, aszpartát transzamináz (AST), alanin transzamináz (ALT), összbilirubin és szérumalbumin. A fogamzóképes korban lévő nők (amelyek premenopauzában vannak, és nem szerepeltek méheltávolításban vagy petevezeték-lekötésben) a szűrővizsgálat során szérum terhességi tesztet végeznek, és a vizsgálat minden fázisa előtt vizelet terhességi tesztet végeznek. A beiratkozást követően az alanyok véletlenszerű sorrendben vesznek részt mind a 4 vizsgálati fázisban.

A vizsgálat felépítése és eljárások Ez egy randomizált, keresztezett, nyílt elrendezésű vizsgálat lesz. A vizsgálat előtti szűrésre az első vizsgálati fázist követő 4 héten belül kerül sor. A szűrővizsgálatok magukban foglalják a beleegyezés megszerzését, a kórtörténetet, a szociális anamnézist, a fizikális vizsgálatot, az EKG-t és a laboratóriumi vizsgálatokat. A beiratkozást követően az alanyokat randomizálják (majd áthúzzák) 4 fázisra az 1. táblázatban leírtak szerint.

Asztal 1. Tanulmánytervezés Vizsgálati gyógyszerek és eljárás 1. fázis (kontroll) Cooperstown 5+1 koktél önmagában. A Cooperstown 5+1 koktél a következő összetevőkből áll:

1. Koffein (2 mg/kg szájon át, 50 mg-ra kerekítve) 12 órás vizeletgyűjtéssel.
2. Warfarin (10 mg + 10 mg K-vitamin szájon át) plazmagyűjtéssel 96 órán keresztül. A plazmafelvételi idők 0, 3, 6, 12, 24, 36, 48, 72 és 96 órával az adagolás után. Az INR 48 óra elteltével kerül ellenőrzésre. Ha az INR >1,7, napi 5 mg K-vitamint kell szájon át beadni, amíg az INR 1,2 nem lesz.
3. Omeprazol (40 mg szájon át) plazmaminta vételével az adagolás után 2 órával.
4. Dextrometorfán (30 mg szájon át) 12 órás vizeletgyűjtéssel.

5. Midazolam (0,075 mg/kg orálisan), 8 plazmaminta gyűjtése 6 órán keresztül (csak az 1. fázis esetében) a CYP3A aktivitás meghatározására (MDZ CL/F ml/perc). A mintavétel közvetlenül a midazolam beadása után (0 perc), majd 5 perccel, 0,5, 1, 2, 4, 5 és 6 óra múlva történik. A légzést, a pulzusszámot és az oxigénszaturációt pulzoximetriával monitorozzák a midazolám adagját követő első 90 percben.

   2. fázis Azithromycin 500 mg qAM 3 napig éhgyomorra. A 4. napon a Cooperstown 5+1 koktélt az 5+1 beadás után 2 órával egy negyedik adag azitromicinnel együtt adjuk be.

   3. fázis Telithromycin 800 mg qAM 3 napig éhgyomorra. A 4. napon a Cooperstown 5+1 koktélt egy negyedik adag telitromicinnel adják be, 2 órával az 5+1 beadás után.

   4. fázis Levofloxacin 750 mg qAM 3 napig éhgyomorra. A 4. napon a Cooperstown 5+1 koktélt egy negyedik adag levofloxacinnal adják be, 2 órával az 5+1 beadás után.

   Az azitromicin-, telitromicin- és levofloxacin-fázisban a midazolám plazmamintáját 0,25, 0,75, 1, 1,5, 2, 4, 6, 8, 10, 12 és 24 órában gyűjtik, hogy megfelelő mintavételt lehessen végezni olyan gyógyszerekkel, amelyek potenciálisan gátolja a CYP3A-t. Az 5+1 koktélt a 4. napon, minimum 8 órás koplalás után kell beadni.

   Az alanyok csak 2 órával a vizsgálati gyógyszerek (5+1 koktél vagy antibiotikum) beadása után étkezhetnek.

   Kiürülési időszakok: Az azitromicin fázis kivételével minden fázis után egy hétre van szükség annak biztosítására, hogy a gyógyszer teljesen kiürüljön a szervezetből. Az azitromicin fázis után három hétre van szükség, mivel az azitromicin felezési ideje hosszabb.

   Mintagyűjtés és -elemzés • A koffein fenotipizálásához az alanyok az adag beadása után 12 órán keresztül összes vizeletüket összegyűjtik, hogy meghatározzák a CYP1A2 aktivitást [(AFMU+1X+1U)/17U], NAT-2 [AFMU/(AFMU+1X+) 1U)] és XO [1U/(1X+1U)]. A vizeletet aszkorbinsavval savanyítják (in vitro), hogy megakadályozzák az AFMU átalakulását.

   • A warfarin fenotipizálásához vérmintát vesznek 0, 3, 6, 12, 24, 36, 48, 72 és 96 órával a warfarin plusz K-vitamin beadását követően a CYP2C9 aktivitás meghatározására (S-warfarin CL/F, ml/perc). ). Az első 12 órában a vért intravénás (IV) katéteren keresztül veszik. Ezt követően vénapunkción keresztül történik.

   • Az omeprazol fenotipizálásához egy 15 ml-es vérmintát vesznek 2 órával az orális omeprazol adag beadása után, hogy meghatározzák a CYP2C19 aktivitást (OMP/5OH OMP).

   • A dextrometorfán fenotipizálásához az alanyok a dózis beadása után 12 órán keresztül összes vizeletüket összegyűjtik, hogy meghatározzák a CYP2D6 aktivitást (DM/DX).

   • A midazolám fenotipizálásához az orális midazolám alkalmazása mind a bél, mind a máj CYP3A gátlását értékeli.

     • Az 1. fázishoz (5+1 koktél önmagában) 8 vérminta (egyenként 10 ml) kerül levételre közvetlenül a midazolam beadása után (0 perc), majd 5 perc múlva, 0,5, 1, 2, 4, 5 és 6 óra múlva a meghatározáshoz. CYP3A aktivitás (MDZ CL/F, ml/perc).
     • Az azitromicin-, telitromicin- és levofloxacin-fázisok alatt a vérmintákat 0,25, 0,75, 1, 1,5, 2, 4, 6, 8, 10, 12 és 24 órában gyűjtik (a potenciálisan gátló gyógyszerekkel való megfelelő mintavétel érdekében CYP3A).
   • Minden vérmintát (az omeprazol 15 ml-ét kivéve) két példányban gyűjtenek 10 ml-es EDTA-t tartalmazó kémcsövekbe, és 15 percig 2800 fordulat/perc sebességgel centrifugálják.
   • A plazma- és vizeletmintákat -80 C-on lefagyasztják az elemzésig.

   Adatelemzés • Koffein fenotipizálási vizsgálat: A vizelet alikvot részeit megvizsgálják, hogy meghatározzák a vizelet 1U, 1X, 17U és AFMU koncentrációját. A vizelet-alikvotokat a Kansas City állambeli Missouri Egyetemen elemzik. A koffein demetilációs arányait a CYP1A2, NAT-2 és XO aktivitás kifejezésére használjuk.

   • S- és R-warfarin fenotipizálási vizsgálat: A plazmában lévő S- és R-warfarint nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás (HPLC) analízissel határozzák meg az Észak-Karolinai Egyetemen, Chapel Hillben. A warfarin clearance-ét nem kompartmentális analízissel határozzák meg. A WinNonlin® 3.1-et a farmakokinetikai elemzésekhez fogják használni.

   • Omeprazol fenotipizálási vizsgálat: Vérmintákat elemeznek az Észak-Karolinai Egyetemen, Chapel Hillben, hogy meghatározzák az OMP és az 5OH OMP plazmakoncentrációit. Az OMP és az 5OH OMP aránya az omeprazol orális adagját követő 2 órában a CYP2C19 aktivitás leírására szolgál.

   • Dextrometorfán fenotipizálási vizsgálat: A vizelet alikvot részeit a Kansas City állambeli Missouri Egyetemen elemzik a DM/DX vizeletkoncentrációjának meghatározására. A dextrometorfán metabolikus arányát a CYP2D6 aktivitás leírására használjuk.

   • Midazolam fenotipizálási vizsgálat: Vérmintákat elemeznek a midazolam, 1-hidroximidazolam és 4-hidroximidazolam plazmakoncentrációjának meghatározására. Az elemzéseket az Oneida Research Services, Inc. végzi egy szabadalmaztatott LC/MS/MS módszerrel. A midazolám-clearance-t a CYP3A aktivitásának tükrözésére használják, a clearance-t pedig a midazolám plazmakoncentráció-idő adatainak nem kompartmentális elemzésével határozzák meg. A WinNonlin® 3.1-et a farmakokinetikai elemzésekhez fogják használni.

   Statisztikai analízis

   • Mintanagyság: =0,05, négy kezelési fázis és =0,20 (80%-os teljesítmény) felhasználásával a tizenhat önkéntesből álló becsült mintanagyság 25%-os eltérést észlel az anyagcserében.
   • Az adatokat az FDA szabványos bioekvivalencia vizsgálatával elemzik.3 Ha a gyógyszerfázisok a 0,8-1,25 tartományon kívül esnek a kontroll fázishoz képest, a BE nem jelenik meg.

4) Ha a kutatás részben kezelési protokoll, határozza meg, hogy mely részek rutinszerűek, és melyek azok, amelyeket kizárólag kutatás céljából végeznek.

Ez a tanulmány kutatási célokat szolgál.