Miokardiális ischaemia-reperfúziós sérülés által kiváltott mitokondriális apoptotikus útvonal emberben

Háttér: Az ischaemia-reperfúzió (I/R) által kiváltott kardiomiociták apoptózisa az egyik legfontosabb tényező a szívizom I/R sérülésében (MIRI), amely során szívbillentyű cserén esik át kardiopulmonális bypass-szal (CVRCPB) és ischaemiás utókondicionálással (I-postC). ) gátolhatja a szívizomsejtek apoptózisát. Következésképpen ez a tanulmány a szívizom kulcsfontosságú génjeit és apoptózis jelátviteli útvonalait vizsgálta CVRCPB-n átesett betegeknél.

Módszerek: Összesen 36, a New York Heart Association II. vagy III. osztályú reumás szívbetegségben (RHD) szenvedő, mindkét nemű, 21-59 éves beteg, akiknél 2014 februárjától az első szívbillentyű-cserét tervezték CPB-vel a vizsgálóintézetben. 2015 májusáig véletlenszerűen a következő három csoportra osztották (n=12): negatív kontroll csoport (NEG csoport); I/R csoport (POS csoport); és I-postC csoport (Treat group). A Treat csoportban az eljárás a felszálló aorta kinyitása előtt 5 perccel, az aorta 30 másodpercig tartó feloldását és 30 másodpercig tartó keresztbefogást tartalmazott három cikluson keresztül, majd a felszálló aorta teljesen megnyílt. A NEG és a Treat csoportot nem kezelték. Harminchat betegnél értékelték az aritmiát és a szívizom kontraktilis funkciójának helyreállítását a reperfúziót követően elektrokardiogrammal, valamint a vazoaktív gyógyszerektől való függőség mértékét. A jobb pitvari függelék szívizomszöveteit a NEG csoportban a CPB létrehozása előtt 3 perccel, a POS és a Treat csoportban az aorta megnyitása után 45 perccel vettük fel. Mindhárom csoportban a jobb pitvar függelék szívizom szöveteit megkaptuk és -80°C-on konzerváltuk a további kísérletekhez. Az egyes csoportokban véletlenszerűen kiválasztott három beteg jobb pitvari függelékét később RNS-sel fixáltuk (Qiagen, Hilden, Németország) egy centrifugacsőben egy éjszakán át 4 °C-on, majd -20 °C-on tároltuk az RNS extrakcióhoz. Az mRNS expressziók humán 12×135K Gene Array profilozását humán szívizomsejtekben végeztük. A kvantitatív valós idejű RT-PCR-rel igazolt, differenciálisan expresszált mRNS-eket útvonalanalízisnek vetettük alá. Az AIF, APAF1, CYCS, Bax, kaszpáz-3, kaszpáz-9, kaszpáz-6, kaszpáz-7, BCL2, BAG1 és PI3K mRNS expresszióját valós idejű RT-PCR és Western blot analízissel értékeltük. Az I/R által kiváltott szívizom apoptózis mértékét TUNEL assay-vel vizsgáltuk. A szívizom apoptózisa által kiváltott MIRI-változásokat a szívizom patológiás vizsgálatával vizsgáltuk.