Via apoptótica mitocondrial induzida por lesão de isquemia-reperfusão miocárdica em humanos

Fundamento: A apoptose de cardiomiócitos induzida por isquemia-reperfusão (I/R) é um dos fatores mais importantes na lesão de I/R miocárdica (MIRI) submetida à troca valvar cardíaca por circulação extracorpórea (CVRCPB) e pós-condicionamento isquêmico (I-postC ) pode inibir a apoptose das células miocárdicas. Consequentemente, este estudo investigou os principais genes e as vias de sinalização da apoptose do miocárdio em pacientes submetidos a CVRCPB.

Métodos: Um total de 36 pacientes classe II ou III da New York Heart Association com doença cardíaca reumática (DRC) de ambos os sexos, com idade entre 21 e 59 anos, que foram agendados para a primeira substituição da válvula cardíaca com CEC no hospital dos investigadores a partir de fevereiro de 2014 até maio de 2015, foram aleatoriamente divididos em três grupos (n=12 cada): grupo controle negativo (grupo NEG); grupo I/R (grupo POS); e grupo I-postC (grupo Tratar). No grupo Tratar, o procedimento envolveu 5 min antes da abertura da aorta ascendente, despinçamento aórtico por 30 s e pinçamento cruzado por 30 s por três ciclos, após os quais a aorta ascendente foi completamente aberta. Os grupos NEG e Tratar não foram tratados. Trinta e seis pacientes foram avaliados quanto à arritmia e recuperação da função contrátil do miocárdio após reperfusão por eletrocardiogramas e grau de dependência de drogas vasoativas. Os tecidos miocárdicos do apêndice atrial direito foram obtidos 3 min antes do estabelecimento da CEC no grupo NEG e 45 min após a abertura da aorta nos grupos POS e Treat. Em todos os três grupos, os tecidos miocárdicos do apêndice atrial direito foram obtidos e preservados a -80°C para experimentos posteriores. O apêndice atrial direito de três pacientes selecionados aleatoriamente em cada grupo foi fixado com RNA posteriormente (Qiagen, Hilden, Alemanha) em um tubo de centrífuga durante a noite a 4°C e depois preservado a -20°C para extração de RNA. O perfil de Gene Array 12×135K humano de expressões de mRNA foi realizado em células musculares cardíacas humanas. Os mRNAs expressos diferencialmente verificados por RT-PCR quantitativo em tempo real foram submetidos à análise de via. As expressões de mRNA de AIF, APAF1, CYCS, Bax, caspase-3, caspase-9, caspase-6, caspase-7, BCL2, BAG1 e PI3K foram avaliadas por RT-PCR em tempo real e análise de western blot. Os níveis de apoptose miocárdica induzida por I/R foram investigados por ensaios TUNEL. As alterações em MIRI induzidas por apoptose miocárdica foram investigadas por exame patológico do miocárdio.