Путь митохондриального апоптоза, индуцированный ишемией-реперфузией миокарда у человека

Актуальность: Апоптоз кардиомиоцитов, индуцированный ишемией-реперфузией (И/Р), является одним из наиболее важных факторов при И/Р-повреждении миокарда (МИРИ), подвергающемся замене сердечного клапана с помощью искусственного кровообращения (CVRCPB), и ишемическому посткондиционированию (I-postC). ) может ингибировать апоптоз клеток миокарда. Следовательно, в этом исследовании изучались ключевые гены и сигнальные пути апоптоза миокарда у пациентов, перенесших CVRCPB.

Методы: в общей сложности 36 пациентов класса II или III Нью-Йоркской кардиологической ассоциации с ревматической болезнью сердца (РБС) обоего пола в возрасте 21–59 лет, которым была запланирована первая замена сердечного клапана с помощью искусственного кровообращения в исследовательской больнице с февраля 2014 г. по май 2015 г. были случайным образом разделены на следующие три группы (n=12 в каждой): группа отрицательного контроля (группа NEG); Группа И/Р (группа ПОС); и группа I-postC (группа лечения). В группе Treat процедура включала 5 мин перед открытием восходящей аорты, разжатие аорты в течение 30 с и перекрестное пережатие в течение 30 с в течение трех циклов, после чего восходящая аорта была полностью открыта. Группы NEG и Treat не лечили. У 36 пациентов оценивали аритмию и восстановление сократительной функции миокарда после реперфузии по электрокардиограммам и степень зависимости от вазоактивных препаратов. Ткани миокарда ушка правого предсердия были получены за 3 мин до установления ИК в группе НЭГ и через 45 мин после вскрытия аорты в группах ПОС и Обработка. Во всех трех группах были получены ткани миокарда ушка правого предсердия, которые были сохранены при -80°С для дальнейших экспериментов. Ушко правого предсердия трех пациентов, случайно выбранных в каждой группе, позже фиксировали с помощью РНК (Qiagen, Hilden, Germany) в центрифужной пробирке в течение ночи при 4°C, а затем сохраняли при -20°C для выделения РНК. Профилирование экспрессии мРНК с помощью массива генов человека 12 × 135K было проведено в клетках сердечной мышцы человека. Дифференциально экспрессируемые мРНК, подтвержденные количественной ОТ-ПЦР в реальном времени, подвергали анализу путей. Экспрессию мРНК AIF, APAF1, CYCS, Bax, каспазы-3, каспазы-9, каспазы-6, каспазы-7, BCL2, BAG1 и PI3K оценивали с помощью RT-PCR в реальном времени и вестерн-блоттинга. Уровни миокардиального апоптоза, индуцированного I/R, исследовали с помощью анализов TUNEL. Изменения MIRI, вызванные апоптозом миокарда, исследовали путем патологоанатомического исследования миокарда.