ヒトにおける心筋虚血再灌流傷害によって誘導されるミトコンドリアアポトーシス経路

背景: 虚血再灌流 (I/R) によって誘発される心筋細胞のアポトーシスは、心肺バイパスによる心臓弁置換術 (CVRCPB) および虚血性ポストコンディショニング (I-postC ) 心筋細胞のアポトーシスを阻害することができます。 その結果、この研究では、CVRCPBを受けている患者の心筋の重要な遺伝子とアポトーシスシグナル伝達経路を調査しました。

方法: 2014 年 2 月から研究者病院で CPB による最初の心臓弁置換術が予定された、合計 36 人のニューヨーク心臓協会のクラス II または III のリウマチ性心疾患 (RHD) 患者、年齢 21 歳から 59 歳まで2015 年 5 月まで、次の 3 つのグループに無作為に分けられました (各 n = 12): ネガティブ コントロール グループ (NEG グループ)。 I/R グループ (POS グループ);およびI-postCグループ（治療グループ）。 治療群では、上行大動脈を開く 5 分前、30 秒間大動脈アンクランプ、30 秒間クロスクランプを 3 サイクル行った後、上行大動脈を完全に開いた。 NEG および治療グループは治療を受けませんでした。 36人の患者が、心電図による再灌流後の不整脈と心筋収縮機能の回復、および血管作用薬への依存度について評価されました。 右心耳の心筋組織は、NEG グループでは CPB が確立される 3 分前に、POS および治療グループでは大動脈を開いてから 45 分後に取得されました。 3つのグループすべてで、右心耳の心筋組織が得られ、さらなる実験のために-80°Cで保存されました。 各グループで無作為に選択された 3 人の患者の右心耳を、4°C で一晩遠心チューブ内で RNA レイター (Qiagen、ヒルデン、ドイツ) で固定し、RNA 抽出のために -20°C で保存しました。 mRNA発現のヒト12×135K遺伝子アレイプロファイリングは、ヒト心筋細胞で行われました。 定量的リアルタイム RT-PCR によって検証された差次的に発現する mRNA を経路分析にかけました。 AIF、APAF1、CYCS、Bax、カスパーゼ-3、カスパーゼ-9、カスパーゼ-6、カスパーゼ-7、BCL2、BAG1、および PI3K の mRNA 発現は、リアルタイム RT-PCR およびウエスタンブロット分析によって評価されました。 I/R によって誘発される心筋アポトーシスのレベルは、TUNEL アッセイによって調査されました。 心筋アポトーシスによって誘導される MIRI の変化は、心筋の病理学的検査によって調査されました。