Percorso apoptotico mitocondriale indotto da lesioni da ischemia-riperfusione miocardica nell'uomo

Sfondo: L'apoptosi dei cardiomiociti indotta da ischemia-riperfusione (I/R) è uno dei fattori più importanti nella lesione miocardica I/R (MIRI) sottoposta a sostituzione della valvola cardiaca con bypass cardiopolmonare (CVRCPB) e postcondizionamento ischemico (I-postC ) può inibire l'apoptosi delle cellule del miocardio. Di conseguenza, questo studio ha studiato i geni chiave e le vie di segnalazione dell'apoptosi del miocardio nei pazienti sottoposti a CVRCPB.

Metodi: Un totale di 36 pazienti di classe II o III della New York Heart Association con cardiopatia reumatica (RHD) di entrambi i sessi, di età compresa tra 21 e 59 anni, che erano programmati per la prima sostituzione della valvola cardiaca con CPB nell'ospedale dei ricercatori da febbraio 2014 a maggio 2015, sono stati divisi casualmente nei seguenti tre gruppi (n=12 ciascuno): gruppo di controllo negativo (gruppo NEG); gruppo I/R (gruppo POS); e gruppo I-postC (gruppo Treat). Nel gruppo Treat, la procedura prevedeva 5 minuti prima dell'apertura dell'aorta ascendente, sbloccaggio dell'aorta per 30 secondi e bloccaggio incrociato per 30 secondi per tre cicli, dopodiché l'aorta ascendente era completamente aperta. I gruppi NEG e Treat non sono stati trattati. Trentasei pazienti sono stati valutati per l'aritmia e il recupero della funzione contrattile del miocardio dopo la riperfusione mediante elettrocardiogrammi e il grado di dipendenza dai farmaci vasoattivi. I tessuti miocardici dell'appendice atriale destra sono stati ottenuti 3 minuti prima che il CPB fosse stabilito nel gruppo NEG e 45 minuti dopo l'apertura dell'aorta nei gruppi POS e Treat. In tutti e tre i gruppi, i tessuti miocardici dell'appendice atriale destra sono stati ottenuti e conservati a -80°C per ulteriori esperimenti. L'appendice atriale destra di tre pazienti selezionati in modo casuale in ciascun gruppo è stata successivamente fissata con RNA (Qiagen, Hilden, Germania) in una provetta da centrifuga durante la notte a 4°C e quindi conservata a -20°C per l'estrazione dell'RNA. La profilazione dell'array genico umano 12 × 135 K delle espressioni di mRNA è stata intrapresa nelle cellule del muscolo cardiaco umano. Gli mRNA differenzialmente espressi verificati mediante RT-PCR quantitativa in tempo reale sono stati sottoposti ad analisi del percorso. Le espressioni di mRNA di AIF, APAF1, CYCS, Bax, caspase-3, caspase-9, caspase-6, caspase-7, BCL2, BAG1 e PI3K sono state valutate mediante RT-PCR in tempo reale e analisi western blot. I livelli di apoptosi miocardica indotta da I/R sono stati studiati mediante saggi TUNEL. I cambiamenti nel MIRI indotti dall'apoptosi miocardica sono stati studiati mediante esame patologico del miocardio.