Mitochondriální apoptotická dráha indukovaná ischemicko-reperfuzním poškozením myokardu u člověka

Východiska: Apoptóza kardiomyocytů indukovaná ischemicko-reperfuzí (I/R) je jedním z nejdůležitějších faktorů při I/R poranění myokardu (MIRI) při náhradě srdeční chlopně kardiopulmonálním bypassem (CVRCPB) a ischemickým postkondicionováním (I-postC ) může inhibovat apoptózu buněk myokardu. V důsledku toho tato studie zkoumala klíčové geny a signální dráhy apoptózy myokardu u pacientů podstupujících CVRCPB.

Metody: Celkem 36 pacientů třídy II nebo III New York Heart Association s revmatickým onemocněním srdce (RHD) obou pohlaví ve věku 21-59 let, u kterých byla od února 2014 plánována první náhrada srdeční chlopně pomocí CPB v nemocnici vyšetřovatelů do května 2015, byly náhodně rozděleny do následujících tří skupin (n=12 každá): negativní kontrolní skupina (NEG skupina); I/R skupina (POS skupina); a I-postC skupina (Treat group). Ve skupině Treat procedura zahrnovala 5 minut před otevřením ascendentní aorty, uvolnění aorty po dobu 30 s a cross-clamping po dobu 30 s po dobu tří cyklů, po kterých byla ascendentní aorta zcela otevřena. Skupiny NEG a Treat nebyly léčeny. U 36 pacientů byla hodnocena arytmie a obnovení kontraktilní funkce myokardu po reperfuzi pomocí elektrokardiogramů a stupeň závislosti na vazoaktivních lécích. Tkáně myokardu oušku pravé síně byly získány 3 minuty před zavedením CPB ve skupině NEG a 45 minut po otevření aorty u skupin POS a Treat. Ve všech třech skupinách byly získány tkáně myokardu ouška pravé síně a uchovány při -80 °C pro další experimenty. Ouška pravé síně tří pacientů náhodně vybraných v každé skupině byla později fixována RNA (Qiagen, Hilden, Německo) v centrifugační zkumavce přes noc při 4 °C a poté uchována při -20 °C pro extrakci RNA. Profilování exprese mRNA lidského genového pole 12x135K bylo provedeno v buňkách lidského srdečního svalu. Diferenciálně exprimované mRNA ověřené kvantitativní RT-PCR v reálném čase byly podrobeny analýze dráhy. Exprese mRNA AIF, APAF1, CYCS, Bax, kaspázy-3, kaspázy-9, kaspázy-6, kaspázy-7, BCL2, BAG1 a PI3K byly hodnoceny pomocí RT-PCR a analýzy western blot v reálném čase. Hladiny myokardiální apoptózy indukované I/R byly zkoumány pomocí testů TUNEL. Změny v MIRI indukované apoptózou myokardu byly zkoumány patologickým vyšetřením myokardu.