Jód-129 nyomjelző módszer az emberi jódanyagcsere vizsgálatára

Kísérleti terv. Ennek a kísérleti kísérletnek a kísérleti terve 12 µg 129I (a nyomjelző) fiziológiás orális dózisának beadását irányozza elő egészséges felnőtteknél, valamint a nyomjelző anyag koncentrációjának kvantitatív mérését a plazma-, vizelet- és székletmintákban, amelyeket a nyomjelző beadása előtt és után gyűjtöttek. . Egyszeri 12 µg 129I dózis 78,5 Bq aktivitási szintnek, felnőtteknél pedig körülbelül 0,16 mSv expozíciónak felel meg a pajzsmirigy mint célszerv esetében. A kiindulási plazmamintát közvetlenül a nyomjelző beadása előtt (-5 perc), az utánkövetési mintákat pedig 15, 30, 45, 60 és 90 perccel, valamint 2, 4, 8, 24, 48 perccel kell gyűjteni. , 72 és 96 órával a nyomjelző beadása után. A teljes vizelet gyűjtése 8 nap alatt történik: kiindulási minták 1 nappal a nyomjelző adagolása előtt (3. nap) és nyomon követési minták 7 nappal azt követően (a 10. napig). Hasonlóképpen, a teljes székletgyűjtést a nyomjelző adagot megelőző napon (3. nap), valamint az azt követő 3 napon (a 6. napig) kell elvégezni. A 20. és 40. napon (utókövetés) megismétlik a vérmintavételt és a vizeletvételt a kimosott időszak ellenőrzésére. A kiindulási mintákat a beadás utáni minták kiindulási korrekciójához használják fel. Annak érdekében, hogy a kísérleti kísérlet során minimálisra csökkentsék a válaszreakciók variabilitását, a résztvevők szabványos étrendet fogyasztanak a kísérlet első 6 napjában, és étkezési naplót vezetnek a kísérlet utolsó 4 napjában. Megfelelő előkészítés után a plazma-, vizelet- és székletmintákat elemzik a nyomjelző mennyiségi meghatározásához (129I tömeg meghatározása 127I tömegen; 127I a természetben előforduló jód). Ezekből az adatokból farmakokinetikai görbéket készítünk a nyomjelző megjelenéséről és kiürüléséről a vérben, vizeletben és székletben, és levezetjük az emberi jód felszívódásának, visszatartásának és kiválasztásának sebességét és időzítését. Ezen túlmenően a jódspeciációt ICP-MS-sel párosított kromatográfiás módszeren alapuló jódspeciáció segítségével végzik el a jódfajták, mint plazma szervetlen jód (PII) és fehérjéhez kötött jód (PBI) tömegének közvetlen meghatározására. Ez további információkkal szolgál a metabolizált és nem metabolizálódó 129I különálló farmakokinetikájával kapcsolatban. Mivel a pajzsmirigy általi felvétel meghatározza a visszatartott nyomjelző hányadát, a résztvevők pajzsmirigyfunkciójának jellemzése fontos, hogy ellenőrizzük alanyainknál a számított retenció lehetséges eltéréseit, és a tiroglobulin és a pajzsmirigyhormonok a teljes vérben. értékelni kell.

Elemzési módszerek. A plazmában, a vizeletben és a székletben lévő nyomjelző koncentrációt nagy felbontású többkollektoros ICP-MS-sel, izotóphígítási analízissel (IDA) mérjük, tellúros belső standardot használva a minta emésztését követően, a laboratóriumunkban nemrégiben kifejlesztett módszer szerint [Dold et al, Pajzsmirigy 2015]. A 129I plazmában történő további specifikációjához az elemzést ionkromatográfiás ICP-MS analízissel (IC-ICP-MS) végzik el a Szövetségi Élelmiszerbiztonsági és Állategészségügyi Hivatalban, Svájcban. A vizelet jódkoncentrációját a Sandell-Kolthoff reakció segítségével mérjük [Pino és munkatársai, Clin Chem. 1996, 42:239-243] laboratóriumunkban. A tiroglobulint a laboratóriumunkban nemrégiben kifejlesztett ELISA szárított vérfolt módszerrel értékeljük [Stinca et al, Thyroid 2015, 25:1297-1305]. A pajzsmirigyhormonokat a svájci zürichi egyetemi kórház méri majd DELFIA (disszociáció-fokozott lantanid fluoreszcens immunoassay) módszerrel. A standardizált étrend jódtartalmát laboratóriumunkban ICP-MS analízissel mérjük, az élelmiszernaplók adatait pedig az EBIS-Pro (University of Hohenheim) táplálkozási szoftverrel értékeljük.

Adatelemzés és -értékelés. Az ezen kísérleti kísérlet során generált adatokat az összegyűjtött mintákban (teljes plazma, plazma PII-frakció, plazma PBI-frakció, vizelet, széklet) a nyomjelző megjelenésének és kiürülésének farmakokinetikai görbéinek felépítésére használjuk fel. A görbéket egy LOESS többszörös regressziós modell, egy nem-paraméteres, lokálisan súlyozott szórásdiagram illesztésével hozzuk létre, amely a mintákban a nyomjelző koncentrációját az idő függvényében simítja, és bizonytalansági tartományt biztosít a nyomjelző farmakokinetikai mintázatainak és a válasz variabilitásának vizuális megjelenítéséhez. A nyomjelző kinetikai mintázatainak kiértékeléséhez klasszikus farmakokinetikai modellezési paramétereket generálunk, beleértve a maximális nyomjelző koncentrációt (cmax), a maximális nyomjelző koncentrációnál eltöltött időt (Tmax), az eliminációs sebességi állandót (ke), az abszorpciós sebességi állandót (ka) és az alatti területet. görbe (AUC), a SAAM II (University of Washington) szimulációs elemző és modellező szoftver segítségével. A teljes jelölőanyag-visszatartás a teljes nyomjelző bevitel - teljes jelölőanyag kiválasztódott (AUCurine + AUCstool) alapján kerül kiszámításra. A teljes nyomjelző abszorpciót a teljes nyomjelző bevitelként számítják ki – a nyomjelző teljes megjelenését plazma szervetlen jódként (AUCPII). A módszer rutinszerű alkalmazásához szükséges eljárások optimalizálása elsősorban a minta specifikus mintavételi időtartamára (napok számára) vonatkozó minimális követelmények meghatározását foglalja magában a nyomjelző dózisának beadása után. Ezt a ROC görbék segítségével értékeljük.

Várható teljesítmény és jelentőség/várható hatás. Ez a tanulmány lesz az első, amely a 129I-t biológiai nyomkövetőként alkalmazza emberekben. Kifejlesztését követően ennek az új módszernek az elérhetősége egyedülálló eszközt biztosítana az emberi jódanyagcserével és a pajzsmirigy működésével kapcsolatos számos kulcsfontosságú kérdés megoldására. Ezek közé tartozik a fontos életszakaszok jódigényének pontos meghatározása, a jódhiány alatti jódfelszívódás esetleges fokozódásának vizsgálata, a pajzsmirigy jódfelvétele és jódforgalma változó jódstátusz esetén, a placenta és az anyatej jódtranszferének felmérése, valamint a jód biohasznosulásának értékelése különböző élelmiszerekből. Így ennek a projektnek jelentős hosszú távú hatásai lehetnek a jód és a pajzsmirigy területén.