Studio pilota prospettico su campioni di midollo osseo e sangue periferico da pazienti affetti da leucemia mieloide acuta per caratterizzare l'eterogeneità biologica della malattia utilizzando il profilo della rete a singola cellula (SCNP)

Lo studio proposto sarà un'indagine prospettica in aperto utilizzando campioni di midollo osseo fresco e sangue periferico accoppiato ottenuti da pazienti con AML a partire dal momento della diagnosi e includendo campionamenti ai tempi della valutazione della risposta (CR e NR) continuando attraverso la ricaduta per i responder e per altri trattamenti successivi inclusa la terapia di salvataggio dopo resistenza/ricaduta. Si prevede l'arruolamento di circa 100 pazienti affetti da LMA. Non viene prelevato alcun prelievo extra di midollo e sangue dai pazienti che si iscrivono a questo studio perché studiamo il loro midollo e sangue solo quando vengono sottoposti a tale prelievo per esigenze mediche di routine. I risultati SCNP non verranno utilizzati per guidare o modificare il trattamento attuale o futuro per i pazienti arruolati in questo studio e non saranno contattati in merito ai risultati dello studio.

Midollo osseo intero fresco (5-10 ml) e sangue periferico accoppiato (5-10 ml) saranno raccolti da pazienti affetti da LMA presso le istituzioni partecipanti quando questi pazienti necessitano di esami del midollo/sangue prima dell'inizio della terapia, dopo ogni induzione, dopo il consolidamento, alla ricaduta e/o refrattario, secondo la loro cura standard. Quando non è possibile ottenere il midollo, è accettabile prelevare solo sangue periferico dal paziente. Le informazioni demografiche, la diagnosi, l'opzione terapeutica e l'esito del paziente saranno rese anonime dal PI dello studio. I campioni devono essere raccolti in un vacutainer eparinizzato verde standard da 10 ml etichettato con l'ID del campione non identificato, l'ora e la data di raccolta. I campioni verranno quindi spediti a Nodality Inc. tramite FedEx in kit di spedizione a temperatura ambiente lo stesso giorno. Il personale di Nodality Inc. elaborerà il campione per lo studio entro 36 ore dalla raccolta. Blast leucemico SCNP sarà condotto sotto la supervisione dei ricercatori di Nodality Inc. e presso strutture di proprietà di Nodality Inc. I campioni saranno frazionati in cellule mononucleate di midollo osseo (BMMC) o in cellule mononucleate di sangue periferico (PBMC) e quindi aliquotati. Tutte tranne una di queste aliquote frazionate saranno criopreservate. L'aliquota fresca e frazionata sarà incubata con citochine (ad es. interleuchine, Flt3L), fattori di crescita (es. SCF, GM-CSF e G-CSF), agenti chemioterapici (ad es. citarabina, ara-C, etoposide) e altri modulatori. Le cellule saranno quindi fissate, permeabilizzate e colorate con anticorpi che riconoscono marcatori extracellulari (es. marcatori fenotipici di superficie come gruppi di differenziazione, trasportatori di farmaci e recettori) in combinazione con epitopi specifici dello stato di attivazione intracellulare (letture) di molecole di segnalazione designate. Successivamente, le cellule saranno processate mediante citometria a flusso multiparametrica per SCNP. Le popolazioni blastiche saranno definite utilizzando una combinazione di marcatori di superficie (CD33, CD34, CD38, CD45, CD11b) e circa 30 diversi nodi di segnalazione (modulatore/lettura accoppiati, ad es. Flt3L → phospho-Erk), a seconda del numero di cellule del campione (idealmente 5-6 milioni; minimo 3 milioni). Le letture di segnalazione saranno valutate nella popolazione totale di blasti, così come all'interno delle singole sottopopolazioni, definite da CD33, CD34, CD 38, CD45, CD11b e Side Scatter (SSC). Le letture di segnalazione saranno analizzate per ciascun nodo di segnalazione (analisi univariata) così come una combinazione di nodi quando il set di dati consente analisi multivariate. Nel test "bridging", i marcatori di superficie cellulare e le letture di segnalazione saranno confrontati tra campioni AML freschi e crioconservati, inclusi BMMC e PBMC, se disponibili in aggiunta ai campioni BM.