Estudo Piloto Prospectivo de Amostras de Medula Óssea e Sangue Periférico de Pacientes com LMA para Caracterizar a Heterogeneidade Biológica da Doença Usando Perfil de Rede de Célula Única (SCNP)

O estudo proposto será uma investigação prospectiva aberta usando medula óssea fresca e amostras de sangue periférico pareadas obtidas de pacientes com LMA começando no momento do diagnóstico e incluindo amostras nos momentos de avaliação da resposta (CR e NR) continuando até a recaída para respondedores e para outros tratamentos subsequentes, incluindo terapia de resgate após resistência/recaída. Espera-se que aproximadamente 100 pacientes com LMA sejam inscritos. Não há coleta extra de medula e sangue de pacientes que se inscrevem neste estudo porque só estudamos sua medula e sangue quando eles passam por essa amostragem para necessidades médicas de rotina. Os resultados do SCNP não serão usados ​​para orientar ou ajustar o tratamento atual ou futuro dos pacientes incluídos neste estudo e eles não serão contatados sobre os resultados do estudo.

Medula óssea total fresca (5-10ml) e sangue periférico pareado (5-10ml) serão coletados de pacientes com LMA nas instituições participantes quando esses pacientes precisarem de exames de medula/sangue antes do início da terapia, após cada indução, pós-consolidação, na recidiva e/ou refratários, o que está de acordo com seu cuidado padrão. Quando a medula não pode ser obtida, é aceitável coletar apenas sangue periférico do paciente. As informações demográficas do paciente, diagnóstico, opção de tratamento e resultado serão desidentificados pelo PI do estudo. As amostras devem ser coletadas em um vacutainer padrão de tampa verde heparinizado de 10 ml rotulado com ID de amostra não identificado, hora e data de coleta. As amostras serão enviadas para a Nodality Inc. via FedEx em kits de remessa em temperatura ambiente no mesmo dia. O pessoal da Nodality Inc. processará a amostra para estudo dentro de 36 horas a partir da coleta. O SCNP da explosão leucêmica será conduzido sob a supervisão dos pesquisadores da Nodality Inc. e em instalações pertencentes à Nodality Inc. As amostras serão fracionadas em células mononucleares da medula óssea (BMMC) ou células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e então aliquotadas. Todas as alíquotas fracionadas, exceto uma, serão criopreservadas. A alíquota fracionada fresca será incubada com citocinas (por exemplo, interleucinas, Flt3L), fatores de crescimento (por exemplo, SCF, GM-CSF e G-CSF), agentes quimioterapêuticos (por exemplo, citarabina, ara-C, etoposido) e outros moduladores. As células serão então fixadas, permeabilizadas e coradas com anticorpos que reconhecem marcadores extracelulares (ou seja, marcadores fenotípicos de superfície, como aglomerados de diferenciação, transportadores de drogas e receptores) em conjunto com epítopos específicos de estado de ativação intracelular (leituras) de moléculas de sinalização designadas. Posteriormente, as células serão processadas por citometria de fluxo multiparamétrica para SCNP. As populações de explosão serão definidas usando a combinação de marcadores de superfície (CD33, CD34, CD38, CD45, CD11b) e aproximadamente 30 nós de sinalização diferentes (modulador/leitor emparelhado, por exemplo Flt3L → fosfo-Erk), dependendo do número de células de amostra (idealmente 5-6 milhões; mínimo 3 milhões). As leituras de sinalização serão avaliadas na população total de blastos, bem como em subpopulações individuais, definidas por CD33, CD34, CD 38, CD45, CD11b e Side Scatter (SSC). As leituras de sinalização serão analisadas para cada nó de sinalização (análise univariada), bem como uma combinação de nós quando o conjunto de dados permitir análises multivariadas. No ensaio de "ponte", marcadores de superfície celular e leituras de sinalização serão comparados entre amostras de AML frescas e criopreservadas, incluindo BMMC e PBMC, quando disponíveis, além de amostras de BM.