Biodisponibilità di proteine ​​​​e aminoacidi dell'isolato proteico di piselli in volontari sani (Qualipois)

Vengono reclutati 2 gruppi di volontari sani (maschi e femmine dai 18 ai 65 anni), BMI da 18 a 30.

Ogni gruppo testa una fonte proteica (30 g) incorporata in un purè di patate che viene diviso in piccole porzioni per eseguire un protocollo di pasti ripetuti. Le fonti proteiche (pisello o caseina) sono intrinsecamente marcate con 15N e deuterio (2H).

Il giorno prima del test del pasto, i volontari vengono dotati di un tubo intestinale che migra fino all'ileo. Il giorno dell'esperimento, la posizione del tubo intestinale viene controllata mediante radiografia per verificarne l'ubicazione all'ileo terminale. Un catetere viene inserito nella vena dell'avambraccio per il prelievo di sangue. Una soluzione salina contenente polietilenglicole 4000 (PEG-4000, 20 g/L), utilizzata come marcatore non assorbibile del flusso intestinale, viene infusa nell'ileo per calcolare la portata degli effluenti intestinali. Dopo un prelievo basale di sangue e urine, nonché una raccolta basale di effluenti ileali eseguita per 30 min, il soggetto ingerisce a t=0 la prima dose di biscotto. Le piccole porzioni di pasto vengono ingerite ogni 30 minuti per 4 ore, per raggiungere un plateau isotopico. Dosi traccianti di aminoacidi carbonio 13 (13C) vengono ingerite in concomitanza con le dosi dei pasti. Il marcatore non assorbibile (inulina) viene aggiunto al pasto di prova per correggere il recupero incompleto a livello ileale.

Il periodo di campionamento postprandiale dura 8 ore dopo l'ingestione del pasto. Il contenuto intestinale viene continuamente raccolto su ghiaccio e riunito ogni 30 min. Il sangue viene prelevato ogni 30 minuti per 4 ore e successivamente ogni ora. L'urina totale viene raccolta ogni 2 ore.

Misure:

Negli effluenti, i ricercatori misurano PEG 4000, azoto (N) e 15N, carbonio e 13C, amminoacidi (AA), 15N e 13C negli amminoacidi e marcatori non assorbibili del pasto. I ricercatori calcolano la portata ileale, la reale digeribilità proteica ileale complessiva e la reale digeribilità ileale dei singoli amminoacidi.

Nel plasma, i ricercatori misurano l'uremia e il 15N in urea, AA e proteine ​​per misurare il trasferimento di N alimentare nei pool di proteine ​​plasmatiche; Anche 15N, 2H e 13C nei singoli amminoacidi misurano la biodisponibilità relativa degli amminoacidi 15N/2H rispetto agli amminoacidi 13C liberi.

Nelle urine, i ricercatori misurano l'urea e il 15N nell'ammoniaca urea per calcolare le perdite di deaminazione postprandiale.

Queste misure permetteranno di determinare la biodisponibilità proteica e aminoacidica della proteina di pisello e di confrontarla con la caseina, utilizzando il metodo classico che prevede il campionamento ileale e il tracciante intrinseco delle proteine ​​alimentari (15N). Inoltre, consentirà di testare una procedura meno invasiva utilizzando più traccianti per valutare la biodisponibilità degli amminoacidi.