Biodisponibilidade de Proteína e Aminoácidos da Proteína Isolada de Ervilha em Voluntários Saudáveis (Qualipois)

São recrutados 2 grupos de voluntários saudáveis ​​(homens e mulheres de 18 a 65 anos), IMC de 18 a 30.

Cada grupo testa uma fonte de proteína (30g) incorporada em um purê de batata que é dividido em pequenas porções para realizar um protocolo de refeição repetida. As fontes de proteína (ervilha ou caseína) são marcadas intrinsecamente com 15N e deutério (2H).

No dia anterior ao teste da refeição, os voluntários são munidos de um tubo intestinal que migra até o íleo. No dia do experimento, a posição do tubo intestinal é verificada por radiografia para verificar sua localização no íleo terminal. Um cateter é inserido na veia do antebraço para coleta de sangue. Uma solução salina contendo polietilenoglicol 4000 (PEG-4000, 20 g/L), utilizada como marcador não absorvível do fluxo intestinal, é infundida no íleo para calcular a taxa de fluxo dos efluentes intestinais. Após uma amostragem basal de sangue e urina, bem como uma coleta basal de efluentes ileais realizada por 30 min, o sujeito ingere em t=0 a primeira dose de biscoito. As pequenas porções da refeição são ingeridas a cada 30 minutos por 4 horas, para atingir um platô isotópico. Doses traçadoras de aminoácidos carbono 13 (13C) são ingeridas concomitantemente com as doses das refeições. O marcador não absorvível (inulina) é adicionado à refeição de teste para corrigir a recuperação incompleta no nível ileal.

O período de amostragem pós-prandial dura 8 horas após a ingestão da refeição. O conteúdo intestinal é coletado continuamente sobre gelo e reunido a cada 30 min. O sangue é coletado a cada 30 minutos por 4 horas e depois de hora em hora. A urina total é coletada a cada 2 horas.

Medidas:

Nos efluentes, os pesquisadores medem PEG 4000, nitrogênio (N) e 15N, carbono e 13C, aminoácidos (AA), 15N e 13C em aminoácidos e os marcadores não absorvíveis da refeição. Os investigadores calculam a taxa de fluxo ileal, a digestibilidade ileal real geral da proteína e a digestibilidade ileal real de aminoácidos individuais.

No plasma, os investigadores medem a uremia e 15N na ureia, AA e proteína para medir a transferência de N dietético em pools de proteínas plasmáticas; 15N, 2H e 13C em aminoácidos individuais também medem a biodisponibilidade relativa dos aminoácidos 15N/2H em comparação com os aminoácidos 13C livres.

Na urina, os investigadores medem a ureia e 15N na ureia amônia para calcular as perdas de desaminação pós-prandial.

Estas medições permitirão determinar a biodisponibilidade proteica e de aminoácidos da proteína da ervilha e compará-la com a caseína, utilizando o método clássico implicando amostragem ileal e traçador intrínseco da proteína dietética (15N). Além disso, permitirá testar um procedimento menos invasivo usando múltiplos traçadores para avaliar a biodisponibilidade de aminoácidos.