Biodisponibilidad de Proteínas y Aminoácidos del Aislado de Proteína de Guisante en Voluntarios Sanos (Qualipois)

Se reclutan 2 grupos de voluntarios sanos (hombres y mujeres de 18 a 65 años), IMC de 18 a 30.

Cada grupo prueba una fuente de proteína (30 g) incorporada en un puré de papas que se divide en pequeñas porciones para realizar un protocolo de comidas repetidas. Las fuentes de proteína (guisante o caseína) están intrínsecamente marcadas con 15N y deuterio (2H).

El día anterior a la prueba de comida, los voluntarios son equipados con un tubo intestinal que migra hasta el íleon. El día del experimento se comprueba mediante radiografía la posición del tubo intestinal para verificar su ubicación en el íleon terminal. Se inserta un catéter en la vena del antebrazo para tomar muestras de sangre. Se infunde en el íleon una solución salina que contiene polietilenglicol 4000 (PEG-4000, 20 g/L), utilizada como marcador no absorbible del flujo intestinal, para calcular el caudal de los efluentes intestinales. Después de un muestreo basal de sangre y orina, así como una recolección basal de efluentes ileales realizada durante 30 min, el sujeto ingiere en t=0 la primera dosis de galleta. Las porciones pequeñas de comida se ingieren cada 30 min durante 4 h, para lograr una meseta isotópica. Las dosis de trazadores de aminoácidos de carbono 13 (13C) se ingieren concomitantemente con las dosis de las comidas. Se agrega un marcador no absorbible (inulina) a la comida de prueba para corregir la recuperación incompleta a nivel ileal.

El período de muestreo posprandial dura 8 h después de la ingestión de la comida. El contenido intestinal se recoge continuamente sobre hielo y se mezcla cada 30 min. Se toman muestras de sangre cada 30 min durante 4 hy cada hora a partir de entonces. La orina total se recoge cada 2 h.

Mediciones:

En los efluentes, los investigadores miden PEG 4000, nitrógeno (N) y 15N, carbono y 13C, aminoácidos (AA), 15N y 13C en aminoácidos y los marcadores no absorbibles de la harina. Los investigadores calculan la tasa de flujo ileal, la digestibilidad ileal real de proteínas en general y la digestibilidad ileal real de aminoácidos individuales.

En el plasma, los investigadores miden la uremia y el 15N en la urea, AA y proteína para medir la transferencia de N dietético en las reservas de proteínas plasmáticas; 15N, 2H y 13C en aminoácidos individuales también miden la biodisponibilidad relativa de los aminoácidos 15N/2H en comparación con los aminoácidos 13C libres.

En la orina, los investigadores miden la urea y el 15N en la urea amoniacal para calcular las pérdidas por desaminación posprandial.

Estas mediciones permitirán determinar la biodisponibilidad de proteínas y aminoácidos de la proteína de guisante y compararla con la caseína, utilizando el método clásico que implica muestreo ileal y trazador intrínseco de proteína dietética (15N). Además, permitirá probar un procedimiento menos invasivo utilizando múltiples trazadores para evaluar la biodisponibilidad de aminoácidos.