Terapia MAB Portatori di mutazione m.3243A>G (MABS01)

Razionale: I disturbi mitocondriali sono disturbi multisistemici progressivi, spesso fatali, nel 20-25% dei casi causati da mutazioni eteroplasmiche nel DNA mitocondriale (mtDNA). Studi epidemiologici hanno dimostrato che i disturbi del mtDNA colpiscono circa 1 su 10.000 della popolazione generale, inducendo morbilità e mortalità significative e costi sanitari e sociali elevati. Le manifestazioni cliniche sono più evidenti negli organi con un'elevata richiesta di energia, come i muscoli e il cervello. In questo momento, non esiste un trattamento efficace noto per influenzare il processo o la manifestazione della malattia. Le terapie a base di cellule staminali miogeniche che completano le cellule e le fibre muscolari difettose sono molto promettenti per combattere la miopatia e l'intolleranza all'esercizio che colpiscono >50% dei portatori di mutazione del mtDNA eteroplasmico. Le cellule staminali miogeniche denominate mesoangioblasti (MAB) sono attualmente gli unici precursori miogenici che soddisfano tutti i criteri per essere utilizzati come medicinale per terapie avanzate (ATMP) per il trattamento sistemico, vale a dire buona capacità di proliferazione ex vivo, elevata capacità miogenica e capacità di attraversare il sangue vasi sanguigni, consentendo il rilascio intra-arterioso (sistemico) verso il muscolo interessato. Sia il trapianto di MAB autologo che quello allogenico geneticamente corretto è stato eseguito in modelli di topo e cane, ma solo il trapianto di MAB allogenico è stato eseguito in pazienti con distrofia muscolare di Duchene (DMD). Il trattamento con MAB espansi ex-vivo ha portato a una rigenerazione significativa delle fibre muscolari positive alla DMD sia nei topi che nei modelli di cane. Il rilascio intra-arterioso di MAB allogenici nei ragazzi DMD (studio clinico di fase I/IIa) ha dimostrato che il trattamento era relativamente sicuro e che una certa quantità di distrofina veniva prodotta dalle nuove fibre muscolari, sebbene non sufficiente per il miglioramento funzionale. L'approccio di questo studio presenta vantaggi chiave in quanto vengono utilizzati MAB autologhi, che non richiedono un regime immunosoppressivo. Inoltre, la funzione mitocondriale è parzialmente preservata nei portatori di mutazioni del mtDNA e l'integrazione parziale con fibre sane dovrebbe essere sufficiente a migliorare la funzione mitocondriale. I ricercatori hanno dimostrato che i MAB della maggior parte dei portatori di m.3243A>G non contengono o contengono solo una piccola quantità (<10%) della mutazione del mtDNA, consentendo l'espansione diretta ex vivo dei MAB derivati ​​dal paziente. L'obiettivo generale è indurre la rigenerazione muscolare utilizzando questi MAB autologhi con un carico di mutazione <10%, come medicinale per terapie avanzate (ATMP). Questa proposta riguarda la prima sperimentazione di fase I/IIa.

Obiettivo: Lo studio di fase I/IIa consisterà in un'iniezione intra-arteriosa (tramite catetere nell'arteria femorale) dei MAB autologhi nella parte inferiore della gamba sinistra di 5 pazienti m.3243A>G. L'obiettivo primario è valutare la sicurezza della somministrazione di MAB autologhi, che non sono stati utilizzati come trattamento prima negli esseri umani. Gli obiettivi secondari sono (1) valutare l'homing dei MAB autologhi marcati al muscolo tibiale anteriore 24 ore dopo i.a. consegna e (2) valutare l'efficacia a livello tissutale misurando la miogenesi e il carico di mutazione del mtDNA del muscolo tibiale anteriore trattato rispetto al muscolo non trattato della gamba controlaterale.

Disegno dello studio: Studio clinico monocentrico prospettico in aperto di fase I/IIa controllato intra-soggetto.

Popolazione in studio: 15 pazienti adulti m.3243A>G, di cui 5 saranno arruolati nello studio clinico.

Intervento: tutti i 15 pazienti adulti m.3243A> G saranno sottoposti a ~ 30 mg m. biopsia del muscolo vasto laterale alla visita 1. Di questi 15 pazienti, cinque pazienti si iscriveranno allo studio clinico in base al loro carico di mutazione m.3243A>G nel muscolo scheletrico e nei mesoangioblasti. Questi 5 pazienti visiteranno il MUMC per altre quattro volte. Da ciascun paziente, durante la visita 2 fino alla 5, verranno raccolte in totale cinque biopsie muscolari (1x ~100 mg m.vastus lateralis entrambe le gambe alla visita 2, 2x ~30mg m. tibialis anteriore entrambe le gambe alla visita 4 e 2x ~30mg m tibiale anteriore di entrambe le gambe alla visita 5). Alla visita 4, il muscolo tibiale anteriore di una gamba sarà trattato con 5*10E7/kg di MAB autologhi tramite erogazione dell'arteria tibiale anteriore. Alla visita 3 verrà eseguito un esercizio eccentrico massimale. A tutte le visite verranno prelevati campioni di sangue venoso.

Principali parametri/endpoint dello studio: l'endpoint primario è valutare la sicurezza mediante il monitoraggio dell'infusione (angiografia), il monitoraggio degli effetti avversi acuti (24 ore), il prelievo di sangue e il prelievo muscolare per valutare l'infiammazione locale e sistemica e i marcatori muscolari (CK). Gli endpoint secondari sono la valutazione dell'efficacia a livello tissutale: in particolare, migrazione dei mesoangioblasti marcati con IC-Green dal flusso sanguigno al muscolo tibiale anteriore (24 ore dopo l'infusione) e formazione di nuove fibre muscolari e carico di mutazione m.3243A>G ( 28 giorni dopo l'infusione).

Natura ed entità dell'onere e dei rischi associati alla partecipazione, al beneficio e alla parentela di gruppo: dei 15 pazienti, 5 pazienti si iscriveranno allo studio clinico e visiteranno l'ospedale cinque volte in totale. I 10 pazienti, che non sono selezionati, visiteranno il MUMC una volta.

• Alla prima visita (tutti i 15 pazienti), verranno raccolti un esame clinico neurologico e di routine e una biopsia del muscolo scheletrico del vasto laterale (~ 30 mg).
• Alla seconda visita (5 pazienti), verrà eseguito un esame fisico di routine e verrà raccolta una biopsia del muscolo scheletrico del vasto laterale (~ 100 mg) e un campione di sangue venoso (~ 10 ml) e proveranno l'attacco di esercizio eccentrico.
• Alla visita 3: esame fisico di routine, verrà eseguito un esercizio eccentrico massimale e verrà raccolto un campione di sangue venoso (10 ml).
• Alla visita 4: esame fisico di routine, somministrazione intra-arteriosa di 5*10E7 MAB in una gamba, seguita da 24 ore di osservazione in ospedale compreso regolare prelievo di sangue (4x ~ 10 ml) e una biopsia del muscolo tibiale anteriore ~ ​​30 mg di entrambe le gambe 24 ore dopo l'infusione dei MAB autologhi.
• La visita 5 consiste in un esame fisico neurologico e di routine, un campione di sangue venoso (~ 10 ml) e una biopsia muscolare di ~ 30 mg nei muscoli tibiali anteriori di entrambe le gambe.