Risultati clinici dell'emodialisi in Brasile (COHEBRA): uno studio prospettico di coorte (COHEBRA)

Valutazione dell'HRV. La misurazione dell'HRV è stata eseguita utilizzando un dispositivo elettrocardiografico (Wincardio@, Micromed). Il registro è stato acquisito per 20 minuti prima, nella seconda ora e immediatamente dopo una sessione HD infrasettimanale. I pazienti erano in posizione supina e respiravano normalmente durante la registrazione. I pazienti con pattern respiratori instabili hanno avuto il rinvio della registrazione della HRV. Il dispositivo elettrocardiografico ha trasmesso la registrazione dell'intervallo RR alla memoria digitale, che è stata successivamente analizzata nei domini del tempo e della frequenza dell'HRV tramite il software CardioSeries@ 2.4. Nel dominio del tempo sono stati acquisiti RMSSD e SDNN. Nell'analisi del dominio della frequenza, un tacogramma è stato interpolato in una frequenza di 4 Hertz e suddiviso in periodi di 256 punti con una sovrapposizione del 50%. Questi segnali sono stati sottoposti ad analisi spettrale mediante trasformata veloce di Fourier per ottenere la potenza totale dello spettro. La banda LF, che rappresenta la modulazione simpatica, era compresa tra 0,02 e 0,15 Hz. La banda HF, attribuita alla modulazione parasimpatica, era compresa tra 0,15 e 0,40 Hz.

Tipizzazione del gene ACE. I campioni di sangue sono stati prelevati e centrifugati. Il pellet supernatante di leucociti è stato estratto e conservato. Il polimorfismo ACE è stato tipizzato mediante PCR per i genotipi DD, ID e II. Ha utilizzato i seguenti primer specifici per l'amplificazione del DNA: sense 5=-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3= e antisense 5= GATGTGGCCATCACATTCGTAGA- 3=. Attraverso questi primer, è stato possibile rilevare la delezione e l'inserimento dell'allele. È stata eseguita una PCR di conferma per tutti i campioni con il genotipo DD per aumentare la specificità della genotipizzazione utilizzando una coppia di primer specifici per gli inserimenti, ovvero un amplificatore dell'allele I. Questi primer erano i seguenti: senso 5=-TGGGACCACAGCGCCCGCCACTAC-3= e antisenso 5=-TCGCCAGCCCTACCATGCCCATAA-3=. Il protocollo di temperatura è stato programmato nel termociclatore iniziando a 95°C per 5 min e poi 40 cicli di denaturazione a 95°C per 45 s, ricottura a 54°C per 1 min ed estensione a 72°C per 30 s ciascuno e quindi a 5 min a 72°C per terminare le catene non completate.

Valutazione dello stato di idratazione. Lo stato di idratazione del paziente è stato valutato prima e dopo (fino a 20 minuti) la sessione HD studiata utilizzando un Body Composition Monitor (Fresenius), che utilizza la spettroscopia di bioimpedenza multifrequenza per determinare le resistenze elettriche dell'acqua corporea totale e dell'acqua extracellulare. Gli elettrodi sono stati attaccati alla mano e ai piedi opposti all'accesso vascolare, con il paziente in posizione supina, e la misurazione è stata eseguita e memorizzata in un formato digitale e analizzata con lo strumento di gestione dei fluidi. I risultati sono stati forniti come iperidratazione (in litri), che rappresenta l'eccesso di acqua rispetto ai livelli di riferimento in base al sesso e all'età del paziente.

Spessore muscolare e intensità dell'eco mediante ultrasuoni I pazienti sono stati valutati dopo una sessione di dialisi infrasettimanale. Inizialmente sono stati istruiti a stare in piedi con le gambe ea circa 20 cm di distanza. La lunghezza della coscia destra è stata misurata dalla spina iliaca superiore al bordo prossimale della rotula. Le circonferenze destra e sinistra sono state valutate nel punto medio delle cosce. Allo stesso livello sulla faccia anteriore delle cosce, la pelle è stata segnata con una penna resistente all'acqua. Lo spessore del quadricipite è stato misurato con la sonda su questi punti, perpendicolarmente all'asse lungo dell'arto (immagine in sezione trasversale) e catturato dopo un'adeguata visualizzazione della superficie ossea. L'immagine è stata memorizzata nel disco rigido del dispositivo per ciascuno dei due siti.

Le immagini sono state successivamente analizzate utilizzando il software ImageJ (National Institute of Health, USA, versione 1.37) sia per lo spessore muscolare che per l'intensità dell'eco (EI). Lo spessore è stato misurato come la distanza perpendicolare tra il punto appena sopra l'apice della superficie del femore e il punto appena sotto la fascia superficiale del retto femorale ottenuta utilizzando lo stesso software con la funzione di lunghezza. Le misure sono state registrate in millimetri e posteriormente convertite in centimetri.

L'analisi EI è stata eseguita dopo la selezione di una regione record che include il maggior numero possibile di muscoli evitando la fascia circostante. L'EI è stato quindi calcolato dalla regione selezionata con analisi in scala di grigi utilizzando la funzione istogramma standard ed espresso in valori compresi tra 0 e 255 (0 = nero; 255 = bianco) (Radaelli et al., 2013; Wilhelm et al., 2014 ).

Capacità funzionale - test del cammino di sei minuti La capacità funzionale è stata misurata utilizzando il test del cammino di 6 minuti (6MWT). Questo test è un test di sforzo submassimale, economico e facile da eseguire, oltre ad essere ben affermato come rappresentativo della capacità funzionale nei soggetti fragili. Il test del cammino di 6 minuti mostra una buona correlazione con la misura del massimo consumo di ossigeno. Il risultato di 6 MWT in metri è stato moltiplicato per 100 e diviso per la distanza prevista per l'età. Il risultato (percentuale della distanza prevista percorsa per età) è stato utilizzato nell'analisi.

Valutazione della forza muscolare La valutazione della forza muscolare è stata eseguita utilizzando il test di resistenza statica delle gambe, utilizzando un dinamometro Crown® (Oswaldo Filizola Industry, São Paulo, Brasile). La misurazione è stata ripetuta dopo un intervallo di 1 minuto. Nell'analisi è stata utilizzata la media delle due misurazioni.