Una decifrazione della medicina sperimentale di un correlato minimo dell'immunità cellulare

Criteri per il reclutamento e il processo di reclutamento: i soggetti saranno reclutati dal database di volontari sani dell'Unità di medicina sperimentale SingHealth (IMU) e dai manifesti di reclutamento. Ai soggetti verrà consegnata una copia delle informazioni del partecipante e del modulo di consenso informato da leggere al loro arrivo. Una sessione informativa sullo studio sarà condotta dallo sperimentatore. Successivamente, i soggetti verranno introdotti in una stanza privata dove si ottiene il consenso informato e dove possono essere poste liberamente domande sullo studio. I soggetti non saranno affrettati a prendere una decisione per partecipare allo studio. Saranno incoraggiati a parlare con i loro familiari della partecipazione allo studio; e consentito di rinviare la loro decisione (senza alcun pregiudizio) di partecipare fino a dopo la discussione con i loro familiari.

Visite e procedure di screening: i soggetti saranno reclutati tramite l'Unità di medicina sperimentale di SingHealth (IMU). Il consenso informato scritto sarà richiesto ai soggetti che soddisfano i criteri per l'arruolamento. Tutti i soggetti acconsentiti saranno sottoposti a screening, che include esame fisico, emocromo completo, test di funzionalità epatica, anticorpi anti-dengue ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) e test di gravidanza urinario (per soggetti di sesso femminile in età fertile).

Un test di gravidanza sulle urine verrà eseguito allo screening e il giorno della vaccinazione (giorno 0 e giorno 28) per i soggetti di sesso femminile in età fertile. Solo quelli con un test di gravidanza sulle urine negativo saranno considerati idonei per lo studio, a condizione che siano stati soddisfatti altri criteri di ammissibilità.

Sia i soggetti di sesso maschile (se ha un partner in età fertile) che i soggetti di sesso femminile (in età fertile) devono accettare di utilizzare misure contraccettive adeguate e affidabili (ad es. spermicidi, preservativi, pillole contraccettive) o praticare l'astinenza per 10 giorni dopo la vaccinazione.

Visite e procedure di studio: 58 soggetti saranno randomizzati in 1 braccio su 2 (braccio B1 e braccio B2) in un rapporto 1:1, in doppio cieco. I soggetti nel braccio B1 riceveranno il vaccino JE-YF17D (Imojev, Sanofi Pasteur) il giorno 0 seguito dal vaccino YF17D (Stamaril, Sanofi Pasteur) il giorno 28. I soggetti nel braccio B2 riceveranno Stamaril il giorno 0 seguito da Imojev il giorno 28. Il braccio B3 sarà condotto come design separato a etichetta aperta a braccio singolo in 14 soggetti. I soggetti nel braccio B3 riceveranno il vaccino JE inattivato (Ixiaro, Valneva) il giorno 0 seguito da Stamaril il giorno 28. Le visite di studio in tutte le braccia si svolgeranno nei giorni 0, 4, 7, 10, 14, 28, 29, 32, 35, 38, 42, 58. Ad ogni visita di studio, verranno eseguiti esame fisico, segni vitali e prelievo di sangue di ricerca. Il giorno 0 e il giorno 28, il prelievo di sangue verrà eseguito prima della vaccinazione.

Visita di studio finale: l'ultima visita di studio sarà il giorno 58 dopo la vaccinazione post-studio.

Follow-up e procedure post-studio: non sono richiesti follow-up o procedure post-studio.

Piano di monitoraggio della sicurezza: lo studio può essere valutato da ispettori governativi/autorità di regolamentazione a cui deve essere consentito l'accesso a e-CRF, documenti di origine e altri file di studio. Gli ispettori esamineranno i CRF e li confronteranno con i documenti di origine per verificare la raccolta accurata e completa dei dati e confermare che lo studio è stato condotto secondo il protocollo, le buone pratiche cliniche ICH (ICH-GCP) e tutte le normative applicabili.

In qualsiasi momento dopo la vaccinazione, tutti i soggetti saranno addestrati a osservare gli eventi avversi sistemici. Ai soggetti verrà inoltre consegnato un diario per registrare tali eventi qualora si verificassero in questo periodo. Se dovessero sviluppare sintomi sistemici che richiedono un intervento, si riferiranno al sito dello studio per la valutazione medica e riceveranno la terapia appropriata. La durata dei sintomi sarà registrata. Sarà registrato anche l'eventuale uso concomitante di farmaci durante questo periodo.

Durante lo studio, verranno eseguiti l'anamnesi completa e l'esame fisico sia alle visite programmate che a quelle non programmate. Un esame fisico completo verrà effettuato solo durante la visita di screening, mentre verrà effettuato un breve esame fisico per tutte le visite successive. I Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE), abitualmente impiegati negli studi clinici, saranno utilizzati per definire la terminologia e la gravità degli eventi avversi. La gestione degli eventi avversi è a discrezione del gruppo di studio PI e co-Is, guidata dalla gravità e dall'indicazione clinica per l'intervento. Tutti i farmaci prescritti per la gestione degli eventi avversi saranno documentati nel modulo di cartella clinica del farmaco/farmaco concomitante. I dettagli della terminologia dell'evento AE, la data e l'ora di inizio e fine dell'evento, la gravità, l'utilizzo del CTCAE o il trattamento somministrato, l'impatto sul lavoro e sulla continuazione dello studio e l'esito finale dell'evento saranno registrati sul case report fino alla risoluzione dell'evento.

Garanzia della qualità dei dati: il PI e il Co-I rivedranno periodicamente lo studio per il monitoraggio dei dati e della sicurezza. I controlli di qualità interni saranno eseguiti da due CRC che sono membri del gruppo di studio. I dati inseriti da un CRC saranno verificati da un altro utilizzando i documenti di origine. Lo studio può anche essere selezionato per il monitoraggio da SingHealth Office of Research Integrity and Compliance (ORIC) o valutato da ispettori governativi/autorità di regolamentazione a cui deve essere consentito l'accesso a e-CRF, documenti di origine e altri file di studio. I monitor/ispettori possono rivedere i CRF e confrontarli con i documenti di origine per verificare la raccolta accurata e completa dei dati e confermare che lo studio è condotto secondo il protocollo, ICH-Good Clinical Practices (ICH-GCP) e tutte le normative applicabili.

Inserimento e archiviazione dei dati: tutti i dati dei partecipanti verranno resi anonimi al momento del reclutamento. I moduli cartacei di raccolta dei dati di ricerca come CRF, registri e diari saranno conservati nel file del sito dello sperimentatore e archiviati in SingHealth IMU sotto chiave, accessibili solo ai membri delegati del team di studio.

L'acquisizione diretta dei dati demografici e clinici verrà acquisita sui documenti di origine. Gli identificatori saranno conservati in un file separato in un altro ufficio e sarà fatto ogni sforzo per proteggere la privacy dei partecipanti. I dati da analizzare conterranno solo dati anonimi. Verrà utilizzato un sistema elettronico di acquisizione dei dati. Tutti i dati elettronici saranno protetti da password e saranno accessibili solo ai membri del gruppo di studio. I campioni, i risultati dei test oi dati sui patogeni verranno archiviati presso il laboratorio Duke-NUS EID in un PC autonomo in cui l'accesso è protetto da password.

Determinazione della dimensione del campione: per rilevare una dimensione dell'effetto di 0,8 DS nel livello medio di viremia su scala log (10) tra il primo e il secondo con lo stesso vaccino - la prima dose di sarà analizzata rispetto a coloro che hanno ricevuto YF17D dopo JE-YF17D e viceversa - una dimensione del campione di 25 per gruppo fornirà l'80% di potenza con un tasso di errore di tipo 1 bilaterale del 5%. Per consentire il 10% di abbandoni precoci, viene presa di mira una dimensione totale del campione di 28 per gruppo per il braccio B1 e B2. Per il braccio B3, che è il gruppo di controllo, verrà utilizzata una dimensione del campione di 14.

Piano statistico e analitico: i grafici diagnostici distributivi verranno utilizzati per esaminare la forma delle distribuzioni dei conteggi delle cellule T immediatamente prima della vaccinazione di sfida e della successiva viremia vaccinale. Verranno utilizzate procedure parametriche (t-test) o non parametriche (Mann-Whitney U) per valutare le differenze nella conta delle cellule T e le varie variabili misurate come viremia, titoli anticorpali e livelli di citochine. I coefficienti di correlazione di Pearson o Spearman saranno utilizzati, a seconda dei casi, per esaminare l'associazione tra i livelli di cellule T e queste variabili.

La frequenza dei sintomi riportati e il tipo di sintomi saranno prima analizzati determinando la mediana e gli intervalli interquartili. Analizzeremo quindi in che modo la prima vaccinazione influisce sull'esito sintomatico della vaccinazione di sfida utilizzando le tabelle 2x2 e l'analisi del chi quadrato o il test esatto di Fisher, a seconda di quale sia appropriato. Saranno utilizzate procedure parametriche (t-test) o non parametriche (Mann-Whitney U) per valutare le differenze nei conteggi di cellule T specifici del virus prima della sfida tra quelli con sintomi e quelli senza.

Test che verranno eseguiti sui campioni di sangue: DENV IgG ELISA, FBC, Liver Panel, Viremia (NS5 PCR), citochine, Anti-NS1 Ab, studi sulle cellule T (AIM, ELLISPOT, ELLA), sequenziamento BCR, PRNT e gene espressione.