牛乳アレルギー児へのステップダウンアプローチ (SDACMA)

3次食物アレルギーセンターで連続的に観察され、包含基準を満たす60人の免疫グロブリンE媒介CMA小児が研究への参加に招待される。 既往歴、人口統計、人体測定および臨床データ、ならびに社会人口統計学的要因、家族および生活条件、アレルギー疾患の親の病歴、兄弟の数、およびペットの所有権に関する情報は、各乳児の両親から取得され、記録されます。臨床データベース。

次に、すべての被験者で、EHCF + LGGによる経口食物チャレンジが実行されます。 経口食物負荷が陰性の被験者のみが、12 か月のフォローアップ期間中、食事介入の 2 つのグループのいずれかにランダムに割り当てられます。グループ 1 は AAF を受け、グループ 2 は EHCF + LGG を受けました。

式の効果的な使用は、除去食中に発生する可能性のある問題について両親にカウンセリングする栄養士によって研究中に評価されます. 親または介護者は、調合乳の使用を毎日記録するよう求められます。 準備された量 (水のミリ単位とフォーミュラ スプーンの数) と各消費後に残った量は、子供が消費した量を評価するために日記に記録されます。

登録時、6 および 12 か月後の体の成長は、成長チャートを参照して、6 および 12 か月のフォローアップ後に、登録時に測定された体重、体長、および頭囲によって評価されます。 必要に応じて臨時訪問を行います。

さらに、登録時、6 か月後および 12 か月後に、治験責任医師は次のことを行います。

1. すべての経口食物チャレンジ手順は、2 日間連続して二重盲検法で実施されます。 完全な緊急装備と薬（エピネフリン、抗ヒスタミン薬、ステロイド）が手元にあります。 臨床症状が現れたとき、または最高用量に達したときに攻撃を中止する。 子供は2時間観察され、その後退院します。
2. 皮膚プリックテスト（全乳、カゼイン、α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリン）：アレルゲンと新鮮な牛乳が患者の前腕の掌側に適用されます：3.5％の脂肪を含む牛乳（CM）。 ヒスタミン二塩酸塩 (10 mg/ml) および等張生理食塩水 (NaCl 0.9%) をそれぞれ陽性対照および陰性対照として、1 mm のシングル ピーク ランセット (ALK、コペンハーゲン、デンマーク) を使用して、皮膚プリック テストを実施しました。 反応は、15分での膨疹と発赤の最大直径（ミリメートル単位）に基づいて記録されます。 SPT の結果は、膨疹が 3 mm 以上で、陰性対照の反応がなければ「陽性」と見なされます。
3. 牛乳のタンパク質およびエピトープに対する総 IgE および特異的 IgE および免疫グロブリン G 4: 静脈血サンプルを実施します。患者の血清は、チューブ血清分離チューブを使用して収集され、10〜15分間の遠心分離によって得られました。 血清は急速冷凍され、さらなる分析まで-80°Cで保存されます。 血清から、牛乳のタンパク質およびエピトープに対する総 IgE および特異的 IgE および IgG4 を酵素免疫測定法で分析します。
4. 腸内微生物叢の組成: 糞便サンプルを収集し、すぐに-80°C に凍結し、さらなる分析まで保存します。 総ゲノム DNA (gDNA) は、特定の DNA を使用して糞便から分離されます。 分離キットと腸内細菌叢の組成は、細菌のアプローチと内部転写スペーサー領域シーケンス アプローチ (ハイスループット シーケンス) を使用して分析されます。
5. 短鎖脂肪酸 (SCFA) の糞便および血清の産生: 便のサンプルと血清を採取します。 糞便サンプル 1 グラムの重量を量り、滅菌リン酸緩衝生理食塩水で 1:2 に希釈し、ホモジナイズします。 次いで、遠心分離（１００００ｇ、３０分間、４℃）によって上清を取得し、０．２μｍフィルターを通して濾過し、分析まで－８０℃で保存する。 患者の血清は、チューブ血清分離チューブを使用して収集され、10〜15分間の遠心分離によって得られました。 血清は急速冷凍され、さらなる分析まで-80°Cで保存されます。 SCFAs の分析は、糞便サンプル中の酢酸、プロピオン酸、酪酸の濃度を測定するガスクロマトグラフィー質量分析 (MS) を使用して実行されます。
6. インターロイキン（IL）-4、IL-5、IL-13、IL-10、インターフェロン（IFN）-γの血清レベル：静脈血サンプルを実施します。患者の血清は、チューブ血清分離チューブを使用して収集され、10〜15分間の遠心分離によって得られました。 血清は瞬間凍結し、-80 °C で保存します。 血清から、IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、IFN-γをELISA（各サイトカインに特化したキット）で測定します。
7. IgE 媒介性アレルギー、IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、IFN-γ、および FoxP3+ に関与する遺伝子のプロモーター領域のメチル化状態: 患者から静脈血を採取し、DNA を採取します。 DNA Extraction Kitを用いて白血球から抽出。 製造元の指示に従って、メチル化ゴールド キット (ZYMO Research Co.) を使用して、抽出した DNA を亜硫酸水素ナトリウムで修飾します。 変換された DNA は、使用するまで -70°C で保存されます。 メチル化分析は、高解像度融解リアルタイム (LightCycler® 480、Roche Applied Science) を使用して実行されます。 結果は、直接配列決定によって確認されます (変更されたサンガー法: 4 つの異なる蛍光体で標識された ddNTPs)。