Step Down-tilgang hos børn med komælksallergi (SDACMA)

60 Immunoglobulin E-medierede CMA-børn, observeret fortløbende på tertiære centre for fødevareallergi, som opfylder inklusionskriterierne, vil blive inviteret til at deltage i undersøgelsen. Anamnestiske, demografiske, antropometriske og kliniske data samt oplysninger om sociodemografiske faktorer, familie- og levevilkår, forældrehistorie med allergiske sygdomme, antal søskende og kæledyrsejerskab vil blive indhentet fra forældrene til hvert spædbarn og registreres i en klinisk database.

Derefter vil der i alle emner blive udført en oral fødevareudfordring med EHCF + LGG. Kun forsøgspersoner med negativ oral fødevareudfordring vil blive tilfældigt allokeret til en af ​​de to grupper af diætinterventioner i en 12 måneders opfølgningsperiode: gruppe 1 modtog AAF, og gruppe 2 modtog EHCF + LGG.

Effektiv brug af formlen vil blive evalueret under undersøgelsen af ​​diætister, der rådgiver forældre om problemer, der kan opstå under eliminationsdiæten. Forældre eller omsorgspersoner vil blive bedt om at føre en daglig registrering af modermælksbrug. Den tilberedte mængde (millimeter vand og antallet af modermælksskeer) og mængden, der er tilbage efter hvert forbrug, vil blive noteret i en dagbog for at vurdere den mængde, barnet har indtaget.

Ved tilmelding vil kropsvækst efter 6 og 12 måneder blive vurderet efter kropsvægt, kropslængde og hovedomkreds målt ved tilmelding, efter 6 og 12 måneders opfølgning med henvisning til vækstdiagrammer. Uplanlagte besøg vil blive aflagt, hvis det er nødvendigt.

Derudover vil efterforskerne ved tilmelding efter 6 og 12 måneder udføre:

1. Alle orale fødevareudfordringsprocedurer vil blive udført på dobbeltblind måde i 2 på hinanden følgende dage. Fuldt nødudstyr og medicin (epinephrin, antihistaminer, steroider) vil være ved hånden. Udfordringen vil blive stoppet ved forekomsten af ​​kliniske symptomer, eller når den højeste dosis nås. Barnet vil blive observeret i 2 timer og derefter udskrevet.
2. Hudpriktest (sædmælk, kasein, α-lactalbumin, β-lactoglobulin): allergener og frisk mælk vil blive anvendt på patientens volar underarm: komælk (CM) indeholdende 3,5 % fedt. Hudpriktests blev udført med en 1-mm enkelt peak-lancet (ALK, København, Danmark), med histamin-dihydrochlorid (10 mg/ml) og isotonisk saltvandsopløsning (NaCl 0,9%) som henholdsvis positiv og negativ kontrol. Reaktioner vil blive registreret på grundlag af den største diameter (i millimeter) af hvelen og blusse efter 15 min. SPT-resultatet vil blive betragtet som "positivt", hvis hvalen var 3 mm eller større, uden reaktion fra den negative kontrol.
3. Total IgE og specifikt IgE og Immunoglobulin G 4 mod proteiner og epitoper af komælk: vi vil udføre en venøs blodprøve; serum fra patienter vil blive opsamlet ved hjælp af rørserumseparatorrør og blev opnået ved centrifugering i 10-15 minutter. Serum vil blive lynfrosset og opbevaret ved -80 °C indtil videre analyse. Fra serum vil total IgE og specifikt IgE og IgG4 mod proteiner og epitoper af komælk blive analyseret med enzymatisk immunanalyse.
4. Tarmmikrobiotasammensætning: en afføringsprøve vil blive indsamlet og straks frosset til -80°C og opbevaret indtil videre analyse. Totalt genomisk DNA (gDNA) vil blive isoleret fra fækalt materiale ved hjælp af et specifikt DNA. Isolationskit og tarmmikrobiotasammensætning vil blive analyseret ved hjælp af en tilgang til bakterier og en intern transskriberet spacer region sekventeringstilgang (High-throughput sekventering).
5. Kortkædede fedtsyrer (SCFA'er) fækal- og serumproduktion: en afføringsprøve og serum vil blive indsamlet. Et gram fæcesprøver vejes, fortyndes 1:2 i steril fosfatbufret saltvandsopløsning og homogeniseres. Supernatanter vil derefter blive opnået ved centrifugering (10 000 g, 30 minutter, 4 °C), filtreret gennem 0,2 μm filtre og opbevaret ved -80 °C indtil analyse. Serum fra patienterne vil blive opsamlet ved hjælp af rørserumseparatorrør og blev opnået ved centrifugering i 10-15 minutter. Serum vil blive lynfrosset og opbevaret ved -80 °C indtil videre analyse. Analyse af SCFA'er vil blive udført ved hjælp af gaskromatografi-massespektrometri (MS) for at måle koncentrationerne af eddikesyre, propionsyre og smørsyre i fækale prøver.
6. Serumniveau af interleukin (IL)-4, IL-5, IL-13, IL-10, interferon (IFN)-y: vi vil udføre en venøs blodprøve; serum fra patienter vil blive opsamlet ved hjælp af rørserumseparatorrør og blev opnået ved centrifugering i 10-15 minutter. Serum bliver flashfrosset og opbevaret ved -80 °C. Fra serum vil IL-4, IL-5, IL-13, IL-10, IFN-y blive bestemt ved ELISA (specifikt kit for hver cytokin).
7. Methyleringsstatus for promotorregionen af ​​gener involveret i IgE-medieret allergi, IL-4, IL-5, IL-13, IL-10 og IFN-γ og af FoxP3+: Venøst ​​blod vil blive opnået fra patienterne, og DNA vil blive ekstraheret fra leukocytter ved hjælp af DNA Extraction Kit. Ekstraheret DNA vil blive modificeret med natriumbisulfit ved hjælp af Methylation Gold Kit (ZYMO Research Co.) i henhold til producentens instruktioner. Det omdannede DNA vil blive opbevaret ved -70°C indtil brug. Methyleringsanalyser vil blive udført ved brug af højopløsningssmeltning i realtid (LightCycler® 480, Roche Applied Science). Resultaterne vil blive bekræftet ved direkte sekventering (Sanger-metoden modificeret: ddNTP'er mærket med fire forskellige fluoroforer).