Trapp ned tilnærming hos barn med kumelksallergi (SDACMA)

60 Immunoglobulin E-mediert CMA-barn, observert fortløpende ved tertiære sentre for matallergi, som vil oppfylle inklusjonskriteriene, vil bli invitert til å delta i studien. Anamnestiske, demografiske, antropometriske og kliniske data, samt informasjon om sosiodemografiske faktorer, familie- og levekår, foreldrehistorie med allergiske sykdommer, antall søsken og kjæledyreierskap vil bli innhentet fra foreldrene til hvert spedbarn og registreres i en klinisk database.

Deretter vil det i alle fagene bli utført en oral matutfordring med EHCF + LGG. Kun forsøkspersoner med negativ oral matutfordring vil bli tilfeldig allokert til en av de to gruppene med kostholdsintervensjoner i en 12 måneders oppfølgingsperiode: gruppe 1 fikk AAF og gruppe 2 fikk EHCF + LGG.

Effektiv bruk av formelen vil bli evaluert i løpet av studien av kostholdseksperter som veileder foreldre om problemer som kan oppstå under eliminasjonsdietten. Foreldre eller omsorgspersoner vil bli bedt om å føre en daglig oversikt over formelbruk. Mengden tilberedt (millimeter vann og antall skjeer med formel) og mengden som er igjen etter hvert inntak vil bli registrert i en dagbok for å vurdere mengden som barnet har konsumert.

Ved påmelding vil kroppsvekst etter 6 og 12 måneder bli vurdert etter kroppsvekt, kroppslengde og hodeomkrets målt ved påmelding, etter 6 og 12 måneders oppfølging med henvisning til vekstdiagrammer. Uplanlagte besøk vil bli gjennomført om nødvendig.

I tillegg ved registrering, etter 6 og 12 måneder, vil etterforskerne utføre:

1. Alle orale matutfordringsprosedyrer vil bli utført på dobbeltblind måte i 2 påfølgende dager. Fullt nødutstyr og medisiner (epinefrin, antihistaminer, steroider) vil være tilgjengelig. Utfordringen vil bli stoppet ved tilsynekomst av kliniske symptomer eller når den høyeste dosen er nådd. Barnet vil bli observert i 2 timer, og deretter utskrevet.
2. Hudstikktest (helmelk, kasein, α-laktalbumin, β-laktoglobulin): allergener og fersk melk vil bli brukt på pasientens volar underarm: kumelk (CM) som inneholder 3,5 % fett. Hudstikkprøver ble utført ved bruk av en 1-mm enkelt peak lansett (ALK, København, Danmark), med histamin-dihydroklorid (10 mg/ml) og isotonisk saltvannsløsning (NaCl 0,9%) som henholdsvis positiv og negativ kontroll. Reaksjoner vil bli registrert på grunnlag av den største diameteren (i millimeter) av hvelen og blusse etter 15 min. SPT-resultatet vil bli betraktet som "positivt" hvis hvelen var 3 mm eller større, uten reaksjon fra den negative kontrollen.
3. Totalt IgE og spesifikt IgE og Immunoglobulin G 4 mot proteiner og epitoper av kumelk: vi skal utføre en venøs blodprøve; Serum fra pasientene vil bli samlet ved bruk av serumseparatorrør og ble oppnådd ved sentrifugering i 10-15 minutter. Serum vil bli hurtigfryst og lagret ved -80 °C inntil videre analyse. Fra serum vil total IgE og spesifikt IgE og IgG4 mot proteiner og epitoper av kumelk analyseres med enzymatisk immunanalyse.
4. Tarmmikrobiotasammensetning: en avføringsprøve vil bli samlet og umiddelbart frosset til -80°C og lagret inntil videre analyse. Totalt genomisk DNA (gDNA) vil bli isolert fra fekalt materiale ved bruk av et spesifikt DNA. Isolasjonssett og sammensetning av tarmmikrobiota vil bli analysert ved hjelp av en tilnærming for bakterier og en intern transkribert spacer region sekvensering (High-throughput sekvensering).
5. Kortkjedede fettsyrer (SCFA) fekal- og serumproduksjon: en avføringsprøve og serum vil bli samlet inn. Ett gram avføringsprøver veies, fortynnes 1:2 i steril fosfatbufret saltløsning og homogeniseres. Supernatanter vil deretter bli oppnådd ved sentrifugering (10 000 g, 30 minutter, 4 °C), filtrert gjennom 0,2 μm filtre og lagret ved -80 °C frem til analyse. Serum fra pasientene vil bli samlet ved hjelp av serumseparatorrør og ble oppnådd ved sentrifugering i 10-15 minutter. Serum vil bli hurtigfryst og lagret ved -80 °C inntil videre analyse. Analyse av SCFAer vil bli utført ved bruk av gasskromatografi-massespektrometri (MS) for å måle konsentrasjonene av eddiksyre, propionsyre og smørsyre i fekale prøver.
6. Serumnivå av interleukin (IL)-4, IL-5, IL-13, IL-10, interferon (IFN)-y: vi vil utføre en venøs blodprøve; Serum fra pasientene vil bli samlet ved bruk av serumseparatorrør og ble oppnådd ved sentrifugering i 10-15 minutter. Serum vil bli hurtigfryst og lagret ved -80 °C. Fra serum vil IL-4, IL-5, IL-13, IL-10, IFN-y bli bestemt ved ELISA (spesifikt sett for hvert cytokin).
7. Metyleringsstatus for promotorregionen til gener involvert i IgE-mediert allergi, IL-4, IL-5, IL-13, IL-10 og IFN-γ og av FoxP3+: Venøst ​​blod vil bli hentet fra pasientene og DNA vil bli ekstrahert fra leukocytter ved hjelp av DNA Extraction Kit. Ekstrahert DNA vil bli modifisert med natriumbisulfitt ved å bruke Methylation Gold Kit (ZYMO Research Co.) i henhold til produsentens instruksjoner. Det konverterte DNA vil bli lagret ved -70°C inntil det brukes. Metyleringsanalyser vil bli utført ved bruk av høyoppløselig smelting i sanntid (LightCycler® 480, Roche Applied Science). Resultatene vil bli bekreftet ved direkte sekvensering (Sanger-metoden modifisert: ddNTP-er merket med fire forskjellige fluoroforer).