Vähennä lähestymistapaa lapsilla, joilla on lehmänmaitoallergia (SDACMA)

Tutkimukseen kutsutaan osallistumaan 60 immunoglobuliini E -välitteistä CMA-lasta, joita on peräkkäin tarkkailtu korkea-asteen ruoka-allergiakeskuksissa ja jotka täyttävät osallistumiskriteerit. Anamnestiset, demografiset, antropometriset ja kliiniset tiedot sekä tiedot sosio-demografisista tekijöistä, perhe- ja elinoloista, vanhempien allergisista sairauksista, sisarusten lukumäärästä ja lemmikkieläinten omistajuudesta hankitaan jokaisen lapsen vanhemmilta ja kirjataan muistiin. kliininen tietokanta.

Sitten kaikissa aiheissa suoritetaan suullinen ruokahaaste EHCF + LGG:llä. Vain koehenkilöt, joilla on negatiivinen oraalinen ruoka-altistus, jaetaan satunnaisesti toiseen kahdesta ruokavaliointerventioryhmästä 12 kuukauden seurantajaksolle: ryhmä 1 sai AAF:a ja ryhmä 2 sai EHCF + LGG:tä.

Kaavan tehokasta käyttöä arvioivat tutkimuksen aikana ravitsemusterapeutit, jotka neuvovat vanhempia eliminaatiodieetin aikana mahdollisesti ilmenevissä ongelmissa. Vanhempia tai huoltajia pyydetään pitämään päivittäin kirjaa äidinmaidonkorvikkeen käytöstä. Valmistettu määrä (millimetriä vettä ja korvikelusikoiden lukumäärä) ja jokaisen kulutuksen jälkeen jäljelle jäänyt määrä kirjataan päiväkirjaan, jossa arvioidaan lapsen kuluttamaa määrää.

Ilmoittautumisen yhteydessä kehon kasvu arvioidaan 6 ja 12 kuukauden jälkeen ruumiinpainon, kehon pituuden ja pään ympärysmitan perusteella, jotka mitataan ilmoittautumisen yhteydessä, 6 ja 12 kuukauden seurannan jälkeen kasvukaavioiden perusteella. Suunnittelemattomia käyntejä tehdään tarvittaessa.

Lisäksi ilmoittautumisen yhteydessä, 6 ja 12 kuukauden kuluttua, tutkijat suorittavat:

1. Kaikki Oral Food -haastetoimenpiteet suoritetaan kaksoissokkomenetelmällä 2 peräkkäisenä päivänä. Täysi hätävarusteet ja lääkkeet (epinefriini, antihistamiinit, steroidit) ovat käsillä. Haaste lopetetaan, kun kliinisiä oireita ilmaantuu tai kun suurin annos on saavutettu. Lapsia tarkkaillaan 2 tuntia, minkä jälkeen se kotiutetaan.
2. Ihopistokoe (täysmaito, kaseiini, α-laktalbumiini, β-laktoglobuliini): allergeeneja ja tuoretta maitoa levitetään potilaan kyynärvarteen: lehmänmaitoa (CM), joka sisältää 3,5 % rasvaa. Ihonpistokokeet suoritettiin käyttämällä 1 mm:n yksittäishuipun lansettia (ALK, Kööpenhamina, Tanska), histamiinidihydrokloridilla (10 mg/ml) ja isotonisella suolaliuoksella (NaCl 0,9 %) positiivisena ja vastaavasti negatiivisena kontrollina. Reaktiot rekisteröidään 15 minuutin kohdalla renkaan suurimman halkaisijan (millimetreinä) perusteella. SPT-tulosta pidetään "positiivisena", jos rako oli 3 mm tai suurempi ilman negatiivisen kontrollin reaktiota.
3. Kokonais-IgE ja spesifinen IgE ja immunoglobuliini G 4 lehmänmaidon proteiineja ja epitooppeja vastaan: teemme laskimoverinäytteen; potilaiden seerumi kerätään käyttämällä putken seerumierotinputkia ja saatiin sentrifugoimalla 10-15 minuuttia. Seerumi pakastetaan ja säilytetään -80 °C:ssa lisäanalyysiin asti. Seerumista kokonais-IgE ja spesifinen IgE ja IgG4 lehmänmaidon proteiineja ja epitooppeja vastaan ​​analysoidaan entsymaattisella immunomäärityksellä.
4. Suoliston mikrobiotan koostumus: Ulostenäyte kerätään ja pakastetaan välittömästi -80 °C:seen ja säilytetään jatkoanalyysiin asti. Kokonaisgenominen DNA (gDNA) eristetään ulostemateriaalista käyttämällä spesifistä DNA:ta. Eristyspakkaus ja suoliston mikrobiston koostumus analysoidaan käyttämällä lähestymistapaa bakteereille ja sisäisen transkriptoidun spacer-alueen sekvensointimenetelmää (High-throughput-sekvensointi).
5. Lyhytketjuisten rasvahappojen (SCFA) ulosteen ja seerumin tuotanto: ulostenäyte ja seerumi kerätään. Yksi gramma ulostenäytteitä punnitaan, laimennetaan 1:2 steriiliin fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen ja homogenoidaan. Supernatantit saadaan sitten sentrifugoimalla (10 000 g, 30 minuuttia, 4 °C), suodatetaan 0,2 μm:n suodattimien läpi ja säilytetään -80 °C:ssa analyysiin asti. Potilaiden seerumi kerätään käyttämällä putken seerumierotinputkia ja saatiin sentrifugoimalla 10-15 minuuttia. Seerumi pakastetaan ja säilytetään -80 °C:ssa lisäanalyysiin asti. SCFA:iden analyysi suoritetaan käyttämällä kaasukromatografia-massaspektrometriaa (MS) etikka-, propioni- ja voihapon pitoisuuksien mittaamiseksi ulostenäytteistä.
6. Seerumin interleukiini (IL)-4, IL-5, IL-13, IL-10, interferoni (IFN)-γ: otamme laskimoverinäytteen; potilaiden seerumi kerätään käyttämällä putken seerumierotinputkia ja saatiin sentrifugoimalla 10-15 minuuttia. Seerumi pakastetaan ja säilytetään -80 °C:ssa. Seerumista IL-4, IL-5, IL-13, IL-10, IFN-y määritetään ELISA:lla (spesifinen pakkaus jokaiselle sytokiinille).
7. IgE-välitteiseen allergiaan osallistuvien geenien, IL-4:n, IL-5:n, IL-13:n, IL-10:n ja IFN-y:n sekä FoxP3+:n promoottorialueen metylaatiostatus: Potilailta otetaan laskimoveri ja DNA:ta. uutettiin leukosyyteistä käyttämällä DNA Extraction Kit -pakkausta. Uutettu DNA modifioidaan natriumbisulfiitilla käyttämällä Methylation Gold Kit -sarjaa (ZYMO Research Co.) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Muuntunut DNA säilytetään -70 °C:ssa käyttöön asti. Metylaatioanalyysit suoritetaan käyttämällä korkean erotuskyvyn sulavaa reaaliaikaista menetelmää (LightCycler® 480, Roche Applied Science). Tulokset vahvistetaan suoralla sekvensoinnilla (Sangerin menetelmä modifioitu: ddNTP:t, jotka on leimattu neljällä eri fluoroforilla).