1型糖尿病抑制のための自家樹状細胞療法：安全性研究

この研究では、糖尿病関連の合併症やその他の臨床病理を示さない、インスリン補充を必要とする確立された1型糖尿病のボランティアが、最初に完全な身体的、生化学的、免疫学的評価を受けます。 単球由来自己樹状細胞は、白血球アフェレーシス後に得られます。 樹状細胞はアンチセンスオリゴヌクレオチドでエクスビボで処理され、体内の膵臓の物理的位置に最も近い部位へのその後の皮内投与のためにアリコートで凍結保存される。 樹状細胞ワクチンに対する生理学的、生物学的および免疫学的応答は、試験期間にわたって評価されます。 ボランティアの最初のグループは、ex vivo治療なしで自己樹状細胞を受け取り（7/15）、2番目のグループはiDCを投与されます（8/15）。 樹状細胞ワクチンに関連する毒性や有害事象の証拠がなく、FDA と IRB の承認が得られた場合にのみ、新規発症患者の血糖の改善と自己免疫の逆転におけるコントロール DC と iDC の有効性を比較する新しい研究を開始します。

現在、かなりの副作用を伴うヒト化抗 CD3 抗体以外に、新たに発症した 1 型糖尿病を改善する方法はありません。 これらの研究は、自己免疫疾患を抑制し、臨床プロセスの早い段階でそれを元に戻す可能性があるために、自己樹状細胞移植を採用した初めての研究となります。

CD40、CD80、および CD86 共刺激分子の一次転写産物を標的とするアンチセンス オリゴヌクレオチドで ex vivo で処理された自己樹状細胞の安全性を確認することを提案します (これらの細胞を「免疫調節樹状細胞; iDC」と呼びます)。糖尿病。

性格特性と感情の安定性は、他の医療集団における治療順守に関連しています (例: Christensen ら、2002 年。 Dew et al., 2001)。 このプロトコルを遵守することで（例： この少量のサンプルが結果に大きな影響を与え、治療自体が気分に影響を与える可能性があることを考慮して、ベースラインで性格特性を評価し、研究期間を通して気分を監視します.

2.2 研究の重要性: このアプローチに安全性の問題はないと予想していますが、これが免疫調節療法であることを考えると、すべてのレベルで注意を払う必要があります。 少なくとも、NOD マウスの iDC で観察された成功が、最近診断された推定免疫調節 T 細胞の有病率の増加とともに、正常血糖の回復または血糖コントロールの改善を目的とした他のプロトコルに最終的に適応できるかどうかについてのデータが得られます。人間。

3.0 研究計画と方法

3.1 医薬品・機器情報 3.1.1 自己樹状細胞 (対照樹状細胞): これらは、各患者の白血球除去産物に由来する細胞です。 白血球除去産物は、Elutra/AastromTM 細胞水簸システム (別添の SOP # CPL-0158 および CPL-0166 を参照) 内で処理され、未熟な樹状細胞が得られます。 これらの手順の後の最終的な自己生成物は、コントロール樹状細胞と呼ばれます。

3.1.2 自己免疫調節性糖尿病抑制樹状細胞 (iDC): 当社は、「免疫調節性樹状細胞; iDC」と呼ぶコントロール樹状細胞の糖尿病抑制の実施形態を対象とする IND 申請書 (追加) を FDA に提出しました。 IND は、CD40、CD80、および CD86 共刺激分子の一次転写産物を標的とするホスホロチオエート修飾オリゴヌクレオチドによるコントロール樹状細胞の処理を対象としています。 コントロール DC とオリゴヌクレオチド処理樹状細胞 (iDC) は、この提案の研究細胞製品です。

3.1.3 白血球アフェレーシス装置: これは、Fenwal CS3000 Plus セル コレクター、または同等の装置を使用して実行されます。大口径のダブル ルーメン カテーテルを末梢静脈アクセスとして使用し、セッションあたりの総処理量は約 10 ～ 12 リットルです。 デバイスおよびその同等品は、精製された白血球を得るために、本明細書に概説されている手順について FDA の承認を受けています。 ピッツバーグの中央血液銀行から契約された白血球アフェレーシスの経験豊富なスタッフがこれらの手順を実行します。

3.1.4 心理的測定: NEO-FFI は、パーソナリティの 5 因子理論 (神経症、外向性、開放性、協調性、誠実性) に基づく 60 項目の紙と鉛筆のアンケートです。 この研究では、神経症的傾向と誠実さの尺度を調べます。 Beck Depression Inventory、第 2 版 (BDI-2) および Beck Anxiety Inventory (BAI) は、それぞれ 21 項目の紙と鉛筆のアンケートであり、精神医学および医療集団で広く使用されています。

3.2 研究デザインと方法 3.2.1 研究の設定/場所 治療前、治療サイクル中、および治療後の患者の全身的、生理学的および免疫学的モニタリングは、モンテフィオーレ大学病院の UPMC ヘルス システム (MUH- CTRC) この研究の共同研究者の医師と CTRC の看護師の監督の下で。 被験者は、MUH-CTRCまたはピッツバーグ大学がんセンター（UPPCI）またはピッツバーグの中央血液銀行（各患者にとって最も便利な場所に応じて）の外来環境で白血球アフェレーシスを受けます。 MUH-CTRC の外来で研究用樹状細胞を受け取ります。 MUH-CTRCで残りのテストと手順を受けます。 被験者は上記の場所に約16回訪問し、各訪問はその特定の訪問で行われている手順に応じて約2～4時間続きます。 各被験者のすべての結果は、UPI 外来診療所で毎週開催される会議で継続的に提示され、議論されます。 被験者は、樹状細胞投与サイクル中に監視されます。各樹状細胞の投与後、9 週間は毎週 1 回、その後は 1 か月に 1 回 (付録のセクション 6.8 の模式図を参照)。

3.2.3 自己対照樹状細胞ワクチンの調製 自己ＤＣは、白血球除去産物由来の単球から生成される。 白血球除去は、次の場所のいずれかで実行されます。1) MUH-CTRC。 2) UPCI 白血球除去ユニット;または 3) ピッツバーグの中央血液銀行のダウンタウンの場所。 製品は、調査研究に参加している看護師によって、Shadyside の Hillman Cancer Center 内にある IMCPL に手で運ばれます。 入手時、白血球アフェレーシスの直後に、登録時に患者に割り当てられたのと同じコードを使用して、サンプルが看護師によってコード化されます。 IMCPL では、密閉型 ELUTRA システムでの水簸によって単球が分離されます。 単球は、DC を生成するために、IL-4 および GM-CSF の存在下で閉鎖 Aastrom Replicell システムで培養されます。 培養6日目にDCを採取し、生存率と純度をチェックします。 新たに生成された DC のアリコートは、コントロール DC ワクチンの準備に使用されますが、残りの DC は滅菌凍結バイアルに分注され、その後のワクチンの準備のために凍結保存されます。 我々は、各送達（膵臓に解剖学的に近位の4つの皮内部位に注射された1×107の樹状細胞として定義される1×107の樹状細胞として定義される1回の治療）について、1×107の生存可能な対照樹状細胞またはiDC（以下に記載される）を含むワクチンを調製することを計算した。合計約 5 x 107 個の未成熟樹状細胞が必要です。 これは最小の細胞数の推定値です。投与用のワクチンをリリースする前に、テストのために DC の追加のアリコートが必要になるためです。 細胞は、生存率、無菌性（細菌の好気性および嫌気性培養およびグラム染色）、エンドトキシンレベル、およびマイコプラズマについて検査されます。 各ワクチンについて、ＤＣを回収し、計数し、各アリコートでＰＢＳ中２．５×１０ ６ 細胞／ｍＬのアリコートに調整し、将来の皮内投与のために１ｍＬのツベルクリン注射器に分注する。

3.2.4 オリゴヌクレオチド処理 (糖尿病抑制) iDC ワクチンの調製 コントロール DC の生成と同じ手順を使用して、GM-CSF および IL-4 が生成されると同時に、アンチセンス オリゴヌクレオチドを含む iDC 調製物を生成します。 DC前駆細胞に追加されます。 前駆細胞は、SOP # CPL-0170 (別添)に従って、各アンチセンスオリゴヌクレオチドで最終濃度3.3 μMになるようにエクスビボで処理される。 培養6日目にDCを採取し、生存率と純度をチェックします。 培養液から残りのオリゴヌクレオチドを除去するために徹底的に洗浄した後、iDCを上記と同様に処理し、投与アリコートに分配し、各アリコートを将来の投与のために凍結保存します。

3.2.5 コントロールおよび iDC ワクチンの安全性 ワクチンは調製され、セクション 4.0 ～ 4.1 に概説されている基準を満たす確立された 1 型糖尿病患者に投与されます。 樹状細胞ワクチンは、患者の治療のために生成された細胞製品に関するFDAの勧告に準拠したcGMP施設であるIMCPLで製造されます。 常に、白血球アフェレーシス時に割り当てられた同じランダムに生成されたコードによって、サンプルと細胞産物が識別されます。

3.2.6. 安全性評価: 最初に、糖尿病が確立された 15 人の患者 (18 ～ 35 歳) が無作為に割り付けられ、CHP GCRC で対照樹状細胞ワクチン (7/15 人) または iDC (8/15 人) のいずれかが投与されます。 ランダム化は、SAS 統計パッケージ用に開発されたマクロ (SUGI26) を使用して実行されます。 SUGI26 は、ベースライン適応ランダム化手順の修正であり、カテゴリ共変量の複数の治療グループ間で不均等な割り当て比率を許可します。

無作為化された患者を各治療群に確立した後、患者は、２つの樹状細胞の実施形態（対照ＤＣまたはｉＤＣ）のいずれかを受けることができる。 これらの患者は、セクション 3.2.1.1 および模式図 (付録のセクション 6.8 参照) 8 週間、2 週間ごとに合計 4 回のワクチン投与。 投与ごとに、胃の物理的な位置の上に垂直に、前腹壁の内側に 4 つの固有の皮内注射部位を指定します。 これらの 4 つのサイトは、3 ～ 4 平方インチの象限内にあります。 細胞は、27g-1/2 の針に取り付けられたツベルクリン注射器によって、4 つの個々の注射部位のそれぞれで皮膚の隆起した「小疱」の下に送達されます。 DC レシピエントで最初のワクチン サイクル後にグレード 3 または 4 の毒性が観察されない場合は、計画どおりに連続ワクチン接種が実施されます。 用量制限毒性は、次の例外を除いてグレード 2 以上と定義されます。悪寒、倦怠感、発熱は用量制限とは見なされません。 リンパ球減少症を除いて、すべてのグレード 4 の毒性は用量制限となります。 セクション3.3.2で説明されているように、治療の深刻な副作用から患者を保護するために、中止規則が守られます。 下。 白血球搬出手順に続いて、患者は正常血糖について監視され、必要に応じて、正常血糖レベルを維持するために必要に応じてインスリンが投与されます。 各ＤＣ投与手順の最後に血糖も監視し、必要に応じてインスリンを投与して正常血糖を回復することができる。

3.2.7 用量制限毒性:

以下は、用量制限毒性 (DLT) と見なされます。 これらの毒性が自己樹状細胞ワクチンの投与に関連していると思われる場合、個々の被験者は直ちに研究から外され、それ以上の注射は行われません:

• ≥ グレード 2 以上の気管支痙攣、
• ≥ グレード 2 以上のアレルギー反応または全身性蕁麻疹、
• ≥ 糖尿病以外のグレード 2 以上の自己免疫疾患、
• ≥ ワクチンまたは DTH 検査によるグレード 2 の注射部位反応、
• ≥ グレード 3 または 4 の血液毒性および非血液毒性
• 樹状細胞ワクチン投与後5日以内に回復しないグレード2の毒性
• 投与遅延 > 4 週間

以下の理由により、治療を中止することがあります。

• -感染性（細菌/ウイルス）疾患の証拠を含む、自己樹状細胞ワクチンのさらなる投与を妨げる併発疾患
• 許容できない有害事象、
• 患者が研究からの撤退を決定する、または
• 患者の状態の一般的または特定の変化により、治験責任医師、看護師、または主治医の判断により、患者はさらなる治療を受け入れられなくなります。

3.3 データ収集と統計的考察 3.3.1 一般的な考慮事項 これは、CD40、CD80、および CD86 の主要な転写産物を標的とするホスホロチオエート修飾アンチセンス オリゴヌクレオチドで ex vivo で処理された自己樹状細胞に基づく糖尿病抑制樹状細胞ワクチンの投与の安全性と実現可能性を評価するための安全性試験です。刺激分子。 ワクチンは皮内投与され、各ワクチンには 1 x 107 個の自己樹状細胞が含まれます。 合計 4 つのワクチンが、適格な被験者ごとに配布されます。 十分な数の DC を確保するために、白血球除去を行います (最初のワクチンの 14 日前)。

この試験は、有効性試験における細胞ワクチンのさらなる研究を正当化するために、毒性率が許容できるほど低いことを保証するように設計されています。

4.5.1 臨床試験のモニタリング

4.5.1.1 重大な有害事象（SAE）の報告

有害事象: 一般に、すべての有害事象は記録され、発生から 24 時間以内に安全担当者、PI、および DSMB に通知されます。 安全担当者は、DSMB が緊急セッションで会合する必要があるかどうかを決定します。 重篤でない有害事象の報告は、DSMB 会議から 24 時間以内に IRB に提出されます。 DSMB の年次報告書および最終報告書は、会合から 48 時間以内に IRB および FDA にも提出されます。

重大な有害事象（SAE）の報告

すべて (SAE) は標準毒性シートに記録され、FDA、IRB、DSMB 安全担当官、主任研究者 (Dr. Trucco) および/または共同研究者 (Drs. Finegold、Whiteside または Giannoukakis) の発生から 24 時間以内。 治療中に発生したすべての重篤な有害事象および治療中に予想外に悪化した既存の病​​状は、すぐ上で説明したように記録および報告されます (DSMB、DSMB 安全担当者、PI、FDA、IRB)。 30 日を超えて発生し、コントロールまたは iDC の投与に関連する合理的な可能性があるすべての重篤な有害事象または死亡は、事象の 24 時間以内に安全担当者、FDA、および完全な DSMB に報告されます。 最後のコントロール DC または iDC 投与から 30 日以内に発生した重篤または有害事象または死亡は、同様に報告されます。 安全担当者は、SAE の発生から 24 時間以内に DSMB の完全な会議を招集します。 DSMB レポートは、SAE の発生から 48 時間以内に IRB と FDA に提出されます。

重篤とは、21 CFR 312.32 (a) に記載されているように定義されています。