自体树突状细胞疗法用于抑制 1 型糖尿病：一项安全性研究

在这项研究中，患有需要胰岛素替代治疗的 1 型糖尿病且未表现出任何糖尿病相关并发症或任何其他临床病理的志愿者将首先接受完整的物理、生化和免疫学评估。 单核细胞来源的自体树突细胞将在白细胞去除术后获得。 树突细胞将用反义寡核苷酸离体处理并冷冻保存在等分试样中，用于随后皮内施用到最接近体内胰腺物理位置的位点。 将在试验期间评估对树突状细胞疫苗的生理学、生物学和免疫学反应。 第一组志愿者将接受自体树突细胞，无需任何离体治疗 (7/15)，第二组将接受 iDC (8/15)。 如果没有与树突状细胞疫苗相关的毒性或不良事件的证据，并且只有在 FDA 和 IRB 批准后，我们​​才会启动一项新研究，比较对照 DC 和 iDC 在改善新发患者血糖和逆转自身免疫方面的功效。

目前，除了副作用较大的人源化抗CD3抗体外，没有其他方法可以逆转新发1型糖尿病。 这些研究将首次采用自体树突状细胞转移来抑制自身免疫性疾病，并可能在临床过程的早期逆转它。

我们建议首先在已确定 1 型的志愿者中确定用靶向 CD40、CD80 和 CD86 共刺激分子（我们将这些细胞称为“免疫调节树突细胞；iDC”）的主要转录本的反义寡核苷酸离体处理的自体树突细胞的安全性糖尿病。

人格特质和情绪稳定性与其他医学人群的治疗依从性有关（例如 克里斯滕森等人，2002 年； Dew 等人，2001 年）。 在遵守本协议的情况下（例如 留在研究中）这个小样本会对结果产生重大影响，并且治疗本身可能会影响情绪，我们将评估基线时的人格特质并在整个研究期间监测情绪。

2.2 研究的意义：我们预计这种方法不会有任何安全问题，但鉴于这是免疫调节疗法，我们必须在各个层面保持谨慎。 至少，将获得有关我们在 NOD 小鼠中使用 iDC 观察到的成功是否最终适用于旨在恢复正常血糖或改善血糖控制以及最近诊断的推定免疫调节 T 细胞流行率增加的其他方案的数据人类。

3.0 研究设计和方法

3.1 药品/器械信息 3.1.1 自体树突细胞（对照树突细胞）：这些细胞来源于每位患者的白细胞去除术产品。 白细胞去除术产品在 Elutra/AastromTM 细胞淘洗系统（参见附加的 SOP # CPL-0158 和 CPL-0166）内处理以获得未成熟的树突细胞。 这些程序后的最终自体产品称为对照树突细胞。

3.1.2 自体免疫调节、糖尿病抑制性树突状细胞 (iDC)：我们已向 FDA 提交了一份 IND 申请（附后），以涵盖对照树突状细胞的糖尿病抑制实施方案，我们将其称为“免疫调节性树突状细胞；iDC。 IND 涵盖了用硫代磷酸酯修饰的寡核苷酸对对照树突细胞的治疗，这些寡核苷酸靶向 CD40、CD80 和 CD86 共刺激分子的主要转录本。 对照 DC 和寡核苷酸处理的树突状细胞 (iDC) 是本提案中的研究细胞产品。

3.1.3 白细胞去除仪：这将使用 Fenwal CS3000 Plus 细胞收集器或同等设备进行，使用大口径双腔导管作为外周静脉通路，每次处理的总处理量约为 10-12 升。 该设备及其等效设备已获得 FDA 批准，可用于此处概述的获取纯化白细胞的程序。 从匹兹堡中央血库聘请的具有白细胞分离术经验的工作人员将执行这些程序。

3.1.4 心理测量：NEO-FFI 是一份基于人格五因素理论（神经质、外向性、开放性、宜人性和尽责性）的 60 项纸笔问卷。 对于这项研究，我们将检查神经质和尽责性量表。 贝克抑郁量表，第 2 版 (BDI-2) 和贝克焦虑量表 (BAI) 均为 21 项纸笔问卷，已广泛​​用于精神病学和医学人群。

3.2 研究设计和方法 3.2.1 研究的设置/地点 在治疗周期之前、期间和治疗后对患者进行系统、生理和免疫学监测将在 UPMC 卫生系统 (MUH- CTRC) 在本研究的共同研究医师和 CTRC 的护士的监督下。 受试者将在 MUH-CTRC 或匹兹堡大学癌症中心 (UPCI) 或匹兹堡中央血库（取决于每位患者最方便的位置）的门诊进行白细胞分离术；在 MUH-CTRC 的门诊接受研究树突状细胞；并在 MUH-CTRC 进行剩余的测试和程序。 受试者将在上述地点进行大约 16 次访问，每次访问持续约 2-4 小时，具体取决于在该特定访问时执行的程序。 每个主题的所有结果都将在 UPCI 门诊每周举行的会议上以持续的方式展示和讨论。 将在树突细胞给药周期内监测受试者；在每个树突细胞给药后每周一次，持续九周，然后在一年的剩余时间内每月一次（参见附录中的示意图，第 6.8 节）。

3.2.3 自体对照树突细胞疫苗制备 自体 DC 将从单核细胞中产生，单核细胞来源于白细胞去除术产品。 将在以下任一位置进行白细胞去除术：1) MUH-CTRC； 2) UPCI 白细胞分离单元；或 3) 匹兹堡中央血库的市中心位置。 该产品将由一名参与研究的护士手工携带到位于 Shadyside 的 Hillman 癌症中心内的 IMCPL。 在采购时，在白细胞去除术之后，护士将立即使用登记时分配给患者的相同代码对样本进行编码。 在 IMCPL，单核细胞将在封闭的 ELUTRA 系统中通过淘洗分离。 在存在 IL-4 和 GM-CSF 的情况下，单核细胞将在封闭的 Aastrom Replicell 系统中培养以产生 DC。 在培养的第 6 天，收获 DC 并检查活力和纯度。 新鲜产生的 DC 的等分试样将用于对照 DC 疫苗制备，而剩余的 DC 将等分到无菌冷冻管中并冷冻保存以用于制备后续疫苗。 我们已经计算出，为每次分娩制备含有 1 x 107 个活的对照树突状细胞或 iDC（将在下文描述）的疫苗（一次治疗定义为在解剖学上靠近胰腺的四个皮内部位注射 1 x 107 个树突状细胞）我们总共需要约 5 x 107 个未成熟的树突状细胞。 这是最小的细胞数估计值，因为在释放用于给药的疫苗之前，需要额外的 DC 等分试样进行测试。 这些细胞将进行活力、无菌性（细菌需氧和厌氧培养和革兰氏染色）、内毒素水平和支原体测试，这些测试由 IMCPL 对 UPCI 用于人类治疗的细胞产品进行常规测试。 对于每种疫苗，DC 将被收获、计数、在 PBS 中调整为 2.5 x 106 个细胞/mL 的等分试样，每个等分试样分配到 1mL 结核菌素注射器中以供将来皮内给药。

3.2.4 寡核苷酸处理的（抑制糖尿病的）iDC 疫苗制备 将使用与生成对照 DC 相同的程序来生成包含反义寡核苷酸的 iDC 制剂，同时 GM-CSF 和 IL-4被添加到 DC 祖细胞中。 根据 SOP # CPL-0170（附录），用每种反义寡核苷酸离体处理祖细胞至终浓度为 3.3 μM。 在培养的第 6 天，收获 DC 并检查活力和纯度。 在彻底清洗以从培养基中去除剩余的寡核苷酸后，iDC 将按照上述相同方式进行处理，分配到给药等分试样中，然后将每个等分试样冷冻保存以备将来给药。

3.2.5 对照和 iDC 疫苗安全性 将制备疫苗并将其施用于符合第 4.0-4.1 节中概述的标准的确诊 1 型糖尿病患者。 树突状细胞疫苗将在 IMCPL 生产，这是一个 cGMP 设施，符合 FDA 对为患者治疗生产的细胞产品的建议。 在任何时候，样本和细胞产物都将由白细胞去除术时分配的相同随机生成代码进行识别。

3.2.6. 安全性评估：最初，15 名患有糖尿病的患者（18-35 岁）将被随机分配到 CHP GCRC 接受对照树突状细胞疫苗（7/15 人）或 iDC（8/15 人）。 将使用为 SAS 统计包开发的宏 (SUGI26) 进行随机化。 SUGI26 是对基线自适应随机化程序的修改，并允许在多个治疗组之间为分类协变量分配不相等的分配比率。

在将随机化的患者建立到每个治疗组之后，患者可以接受两种树突细胞实施方案中的任一种（对照DC或iDC）。 这些患者将在第 3.2.1.1 节和示意图中说明的时间（参见附录，第 6.8 节）皮内接受 1 x 107 个树突状细胞（在解剖学上靠近胰腺的四个不同部位四次注射 2.5 x 106 个） ) 总共四次疫苗接种，每两周间隔一次，为期八周。 每次给药时，我们指定 4 个独特的皮内注射部位，位于前腹壁内，垂直于胃的物理位置上方。 这四个站点将位于 3-4 平方英寸的象限内。 细胞将通过连接到 27g-1/2 针头的结核菌素注射器输送，针头位于 4 个单独注射部位中每个部位凸起的皮肤“泡”下方。 如果在 DC 接受者的第一个疫苗周期后没有观察到 3 级或 4 级毒性，将按计划进行后续疫苗接种。 剂量限制性毒性将被定义为等于或大于 2 级，但以下情况除外：寒战、不适和发烧不被视为剂量限制性。 除淋巴细胞减少外，所有 4 级毒性都是剂量限制性的。 为保护患者免受治疗的严重不良反应，将遵守停药规则，如第 3.3.2 节所述 以下。 在白细胞去除术程序之后，将监测患者的血糖是否正常，如有必要，将根据需要给予胰岛素以维持正常血糖水平。 还将在每次 DC 给药程序结束时监测血糖，必要时可给药胰岛素以恢复正常血糖。

3.2.7 剂量限制性毒性：

以下被认为是剂量限制性毒性 (DLT's)。 如果认为这些毒性与自体树突状细胞疫苗接种有关，个体受试者将立即停止研究，并且不再进行注射：

• ≥ 2 级或以上的支气管痉挛，
• ≥ 2 级或以上过敏反应或全身性荨麻疹，
• ≥ 2 级或以上除糖尿病以外的自身免疫性疾病，
• ≥ 由于疫苗或 DTH 测试导致的 2 级注射部位反应，
• ≥ 3 级或 4 级血液学和非血液学毒性
• 树突状细胞疫苗接种后 5 天内未消退的 2 级毒性
• 给药延迟 > 4 周

治疗可能因以下原因而中断：

• 阻止进一步使用自体树突状细胞疫苗的并发疾病，包括感染（细菌/病毒）疾病的证据
• 不可接受的不良事件，
• 患者决定退出研究，或
• 根据研究者、护士或主治医师的判断，患者状况的一般或特定变化使患者无法接受进一步治疗。

3.3 数据收集和统计考虑 3.3.1 一般注意事项 这将是一项安全性试验，旨在评估使用以 CD40、CD80 和 CD86 协同作用的主要转录物为目标的硫代磷酸酯修饰的反义寡核苷酸离体处理的自体树突细胞为基础的糖尿病抑制树突细胞疫苗的安全性和可行性。刺激分子。 疫苗将皮内注射，每份疫苗含有 1 x 107 个自体树突状细胞。 总共将向每个符合条件的受试者提供 4 种疫苗。 将进行白细胞分离术（第一次疫苗接种前 14 天）以确保有足够数量的 DC。

该试验旨在确保毒性率处于可接受的低水平，以保证在功效试验中进一步研究细胞疫苗。

4.5.1 临床试验监测

4.5.1.1 严重不良事件 (SAE) 的报告

不良事件：一般而言，所有不良事件都将在发生后 24 小时内记录并传达给安全官员、PI 和 DSMB。 安全官将决定 DSMB 是否应该在紧急会议下召开会议。 任何非严重不良事件报告将在 DSMB 会议后 24 小时内提交给 IRB。 DSMB 的年度和最终报告也将在会议后 48 小时内提交给 IRB 和 FDA。

严重不良事件 (SAE) 的报告

所有 (SAE) 都将记录在标准毒性表中，并报告给 FDA、IRB、DSMB 安全官员、首席研究员（Dr. Trucco) 和/或合作研究者 (Drs. Finegold、Whiteside 或 Giannoukakis）在发生后 24 小时内。 所有治疗中出现的严重不良事件和在治疗过程中意外恶化的既往医疗状况都将按照上文所述进行记录和报告（DSMB、DSMB 安全官、PI、FDA、IRB）。 所有发生超过三十 (30) 天且合理可能与控制或 iDC 给药相关的严重不良事件或死亡将在事件发生后 24 小时内报告给安全官员、FDA 和整个 DSMB。 在最后一次控制 DC 或 iDC 给药后三十 (30) 天内发生的任何严重或不良事件或死亡将以相同方式报告。 安全官将在任何 SAE 发生后的 24 小时内召集 DSMB 全体会议。 然后，DSMB 报告将在 SAE 发生后的 48 小时内提交给 IRB 和 FDA。

严重的定义如 21 CFR 312.32 (a) 中所述