Autológ dendritesejtes terápia az 1-es típusú cukorbetegség elnyomására: Biztonsági tanulmány

Ebben a vizsgálatban az inzulinpótlást igénylő, megállapított 1-es típusú cukorbetegségben szenvedő önkénteseket, akik nem mutatnak semmilyen cukorbetegséggel összefüggő szövődményt vagy bármilyen más klinikai patológiát, először teljes fizikai, biokémiai és immunológiai kivizsgáláson mennek keresztül. Monocita eredetű autológ dendritikus sejteket leukaferézist követően nyerünk. A dendritikus sejteket ex vivo kezeljük az antiszensz oligonukleotidokkal, és alikvot részekben mélyhűtve tartósítjuk, majd intradermálisan beadjuk a testen belüli hasnyálmirigy fizikai helyéhez legközelebb eső helyekre. A dendritesejtes vakcinára adott fiziológiai, biológiai és immunológiai válaszokat a vizsgálat időtartama alatt értékelik. Az önkéntesek első csoportja autológ dendritikus sejteket kap ex vivo kezelés nélkül (7/15), a második csoport pedig iDC-t (8/15). Ha nincs bizonyíték a dendritesejtes vakcinával kapcsolatos toxicitásra vagy nemkívánatos eseményekre, és csak az FDA és az IRB jóváhagyásával, új vizsgálatot indítunk, amely összehasonlítja a kontroll DC és iDC hatékonyságát a glikémia javításában és az autoimmunitás visszafordításában az újonnan kialakult betegeknél.

Jelenleg a jelentős mellékhatásokkal rendelkező humanizált anti-CD3 antitesten kívül nincs más eszköz az újonnan kialakult 1-es típusú cukorbetegség visszafordítására. Ezek a tanulmányok lesznek az elsők, amelyekben autológ dendritesejt-transzfert alkalmaznak egy autoimmun betegség elnyomására és a klinikai folyamat korai szakaszában történő esetleges visszafordítására.

Javasoljuk a CD40, CD80 és CD86 kostimuláló molekulák elsődleges transzkriptumát célzó antiszensz oligonukleotidokkal ex vivo kezelt autológ dendrites sejtek biztonságosságának megállapítását (ezeket a sejteket "immunregulátor dendritikus sejteknek" nevezzük; iDC) először olyan önkéntesekben, akiknek 1-es típusa van. cukorbetegség.

A személyiségjegyeket és az érzelmi stabilitást összefüggésbe hozták a kezeléshez való ragaszkodással más egészségügyi populációkban (pl. Christensen és mtsai, 2002; Dew et al., 2001). A protokollhoz való ragaszkodásban (pl. a vizsgálatban maradva) ez a kis minta szignifikánsan befolyásolja az eredményeket, és hogy maga a kezelés is befolyásolhatja a hangulatot, akkor a kiinduláskor felmérjük a személyiségjegyeket, és figyelemmel kísérjük a hangulatot a vizsgálati időszak során.

2.2 A vizsgálatok jelentősége: Ezzel a megközelítéssel nem számolunk biztonsági problémákkal, de minden szinten óvatosnak kell lennünk, mivel immunmodulációs terápiáról van szó. Legalább adatokat fogunk szerezni arról, hogy a NOD egereknél az iDC-vel megfigyelt siker végül adaptálható-e más protokollokhoz, amelyek célja a normoglikémia helyreállítása vagy a glikémiás kontroll javítása, valamint a feltételezett immunszabályozó T-sejtek megnövekedett prevalenciája a közelmúltban diagnosztizált betegekben. emberek.

3.0 A KUTATÁS TERVEZÉSE ÉS MÓDSZEREI

3.1 Gyógyszer-/eszközinformáció 3.1.1 Autológ dendritikus sejtek (kontroll dendritikus sejtek): ezek az egyes betegek leukaferezis termékéből származó sejtek. A leukaferézis terméket egy Elutra/AastromTM sejttisztító rendszerben dolgozzák fel (lásd a mellékelt SOP # CPL-0158 és CPL-0166) éretlen dendrites sejteket. A végső autológ terméket ezen eljárások után Control Dendritic Cells-nek nevezik.

3.1.2 Autológ immunregulátor, cukorbetegség-szuppresszív dendritikus sejtek (iDC): IND kérelmet nyújtottunk be (mellékelve) az FDA-hoz a kontroll dendritikus sejtek cukorbetegség-szuppresszív kiviteli alakjára vonatkozóan, amelyeket "immunszabályozó dendritikus sejtek; iDC"-nek nevezünk. Az IND a kontroll dendritikus sejtek kezelését fedi le foszforotioáttal módosított oligonukleotidokkal, amelyek a CD40, CD80 és CD86 kostimulációs molekulák elsődleges transzkriptumait célozzák meg. A kontroll DC és az oligonukleotiddal kezelt dendritikus sejtek (iDC) a vizsgálati sejttermékek ebben a javaslatban.

3.1.3 Leukaferézis készülék: Ezt a Fenwal CS3000 Plus sejtkollektorral vagy azzal egyenértékű sejtgyűjtővel kell elvégezni, nagy furatú, dupla lumen katéter használatával perifériás vénás hozzáférésként, munkamenetenként körülbelül 10-12 liter teljes feldolgozással. Az eszközt és annak megfelelőit az FDA jóváhagyta az itt ismertetett eljárásokhoz a tisztított leukociták előállítására. A Pittsburgh-i Központi Vérbanktól szerződtetett, leukaferézisben jártas személyzet végzi el ezeket az eljárásokat.

3.1.4 Pszichológiai mérőszámok: A NEO-FFI egy 60 tételből álló papír és ceruza kérdőív, amely a személyiség ötfaktoros elméletén (neuroticizmus, extraverzió, nyitottság, egyetértés és lelkiismeretesség) épül. Ehhez a tanulmányhoz a Neuroticizmus és Lelkiismeretesség skálákat vizsgáljuk meg. A Beck Depression Inventory, 2. kiadás (BDI-2) és a Beck Anxiety Inventory (BAI) egyenként 21 tételből álló papírból és ceruzából álló kérdőívek, amelyeket széles körben használnak pszichiátriai és orvosi populációkban.

3.2 A kutatás tervezése és módszerei 3.2.1 A vizsgálat helyszíne/helyszíne A betegek szisztémás, fiziológiai és immunológiai monitorozása a kezelési ciklus előtt, alatt és a kezelés után az UPMC Health System (MUH-) Montefiore Egyetemi Kórházának CTRC klinikáján történik. CTRC) a vizsgálat társvizsgáló orvosainak és a CTRC nővéreinek felügyelete alatt. Az alanyokat ambuláns leukaferézisnek vetik alá a MUH-CTRC vagy a University of Pittsburgh Cancer Center (UPCI) vagy a Pittsburgh-i Központi Vérbank (az egyes betegek számára legmegfelelőbb helytől függően); a vizsgált dendritikus sejteket járóbeteg-körülmények között kapja meg a MUH-CTRC-ben; és a MUH-CTRC-ben a fennmaradó teszteken és eljárásokon kell átesni. Az alanyok körülbelül 16 látogatáson vesznek részt a fent leírt helyszíneken, mindegyik látogatás körülbelül 2-4 óráig tart attól függően, hogy az adott látogatás során milyen eljárásokat hajtanak végre. Az egyes témákra vonatkozó összes eredményt folyamatosan bemutatják és megvitatják az UPCI járóbeteg-klinikáján hetente tartott üléseken. Az alanyokat a dendritesejtes beadási ciklus alatt figyeljük; hetente egyszer minden dendritesejtes beadást követően kilenc héten keresztül, majd havonta egyszer az év hátralévő részében (lásd a Függelék 6.8. szakaszában található sematikus karikatúrákat).

3.2.3 Autológ kontroll dendritesejtes vakcina készítése Az autológ DC a leukaferézis termékből származó monocitákból jön létre. A leukaferézist az alábbi helyszínek valamelyikén végzik el: 1) MUH-CTRC; 2) az UPCI Leukaferézis Egység; vagy 3) a Pittsburgh-i Központi Vérbank belvárosa. A terméket a Shadyside-i Hillman Cancer Centerben található IMCPL-be egy, a kutatásban részt vevő nővér kézzel viszi. A beszerzés időpontjában, közvetlenül a leukaferézist követően, a nővér kódolja a mintát ugyanazzal a kóddal, amelyet a beteghez a beiratkozáskor rendelt. Az IMCPL-nél a monocitákat zárt ELUTRA rendszerben végzett elutriálással választják el. A monocitákat a zárt Aastrom Replicell Systemben tenyésztjük IL-4 és GM-CSF jelenlétében a DC generálására. A tenyésztés 6. napján a DC-t begyűjtjük, és megvizsgáljuk életképességét és tisztaságát. A frissen előállított DC egy alikvot részét a kontroll DC vakcina elkészítéséhez használják fel, míg a fennmaradó DC-t steril krioviális edényekbe osztják, és mélyhűtéssel tárolják a következő vakcinák elkészítéséhez. Kiszámítottuk, hogy 1 x 107 életképes kontroll dendritesejtet vagy iDC-t tartalmazó vakcina elkészítéséhez minden egyes bejuttatáshoz (egy kezelés definíció szerint 1 x 107 dendritesejt négy intradermális helyre injektálva, amelyek anatómiailag közel vannak a hasnyálmirigyhez) összesen ~5 x 107 éretlen dendritesejtre lesz szüksége. Ez a minimális sejtszám becslése, mivel a DC további alikvotjaira lesz szükség a teszteléshez, mielőtt a vakcinát beadásra bocsátanák. A sejtek életképességét, sterilitását (bakteriális aerob és anaerob tenyészetek és Gram-festés), endotoxin-szintet és mikoplazmát vizsgálják, amint azt az IMCPL rutinszerűen elvégzi a humán terápiában használt sejttermékeknél az UPCI-ben. Mindegyik vakcina esetében a DC-t összegyűjtjük, megszámoljuk, 2,5 x 106 sejt/ml-es aliquot részekre állítjuk be PBS-ben minden egyes alikvotnál, és egy 1 ml-es tuberkulinfecskendőbe adagoljuk a jövőbeni intradermális beadáshoz.

3.2.4 Oligonukleotiddal kezelt (diabétesz-szuppresszív) iDC vakcina előállítása Ugyanazokat az eljárásokat alkalmazzuk, mint a kontroll DC előállításánál, az iDC készítmény előállításához az antiszensz oligonukleotidok beépítésével egyidejűleg, amikor a GM-CSF és az IL-4 lesz. hozzá kell adni a DC progenitorokhoz. A progenitorokat ex vivo kezeljük mindegyik antiszensz oligonukleotiddal 3,3 µM végső koncentrációig az SOP # CPL-0170 (mellékelve) szerint. A tenyésztés 6. napján a DC-t begyűjtjük, és megvizsgáljuk életképességét és tisztaságát. A maradék oligonukleotidok tenyésztőközegből való eltávolítása céljából történő alapos mosás után az iDC-t a fentiekkel azonos módon dolgozzuk fel, adagolási alikvot részekre osztjuk, majd minden egyes alikvot részt mélyhűtéssel megőrzünk a későbbi beadásokhoz.

3.2.5 Kontroll és iDC oltásbiztonság A vakcinát a 4.0-4.1 szakaszban vázolt kritériumoknak megfelelő 1-es típusú diabéteszes betegeknek kell elkészíteni és beadni. A dendritesejtes oltóanyagokat az IMCPL-ben, egy cGMP létesítményben állítják elő, amely megfelel az FDA a betegek terápiájára előállított sejtes termékekre vonatkozó ajánlásainak. A mintákat és a sejttermékeket mindenkor ugyanaz a véletlenszerűen generált kód azonosítja, amelyet a leukaferézis idején rendelt el.

3.2.6. Biztonsági értékelés: Kezdetben 15, megállapított cukorbetegségben szenvedő beteget (18-35 éves) randomizálnak, hogy megkapják a kontroll dendritesejtes vakcinát (7/15 személy), vagy az iDC-t (8/15 egyén) a CHP GCRC-ben. A véletlenszerűsítés a SAS statisztikai csomaghoz kifejlesztett makró (SUGI26) segítségével történik. A SUGI26 az alapvonal adaptív randomizációs eljárásának módosítása, és lehetővé teszi a kategorikus kovariánsok több kezelési csoportja közötti egyenlőtlen elosztási arányokat.

Az egyes kezelési csoportokba randomizált betegek besorolását követően a páciens megkaphatja a két dendritesejtes kiviteli alak egyikét (kontroll DC vagy iDC). Ezek a betegek 1 x 107 dendritesejtet kapnak intradermálisan (négy 2,5 x 106 injekciót a hasnyálmirigyhez anatómiailag közel négy különböző helyre) a 3.2.1.1. SZAKASZ és a vázlatos rajzfilmben bemutatott időpontokban (lásd a Függelék 6.8. szakaszát). ) összesen négy vakcina beadásra, kéthetente, nyolc hétig. Beadásonként 4 egyedi intradermális injekciós helyet jelölünk ki az elülső hasfalon belül, merőlegesen – a gyomor fizikai helye felett. Ez a négy hely egy 3-4 négyzethüvelykes negyedben lesz. A sejteket egy tuberkulin fecskendővel juttatják be, amelyet egy 27 g-1/2-es tűhöz erősítenek a bőr megemelkedett "foltja" alatt mind a 4 beadási helyen. Ha nem figyeltek meg 3-as vagy 4-es fokozatú toxicitást az első vakcinaciklust követően a DC-ben részesülő betegeknél, az egymást követő oltásokat a tervek szerint beadják. A dóziskorlátozó toxicitás a következő kivételekkel egyenlő vagy nagyobb, mint a 2. fokozat: hidegrázás, rossz közérzet és láz nem minősül dóziskorlátozónak. Minden 4. fokozatú toxicitás dóziskorlátozó lesz, a limfocitopénia kivételével. A betegek védelme érdekében a terápia súlyos káros hatásaitól a 3.3.2. szakaszban leírtak szerint be kell tartani a leállítási szabályt. lent. A leukaferézis eljárást követően a beteget ellenőrizni fogják a normoglikémia szempontjából, és szükség esetén inzulint adnak be a normoglikémiás szint fenntartása érdekében. A glikémiát az egyes DC beadási eljárások végén is ellenőrizni fogják, és szükség esetén inzulin adható a normoglikémia helyreállítására.

3.2.7 Dóziskorlátozó toxicitások:

A következőket tekintik dóziskorlátozó toxicitásnak (DLT). Ha úgy érzi, hogy ezek a toxicitások az autológ dendritesejtes vakcina beadásával kapcsolatosak, az egyes alanyokat azonnal le kell vonni a vizsgálatból, és nem adnak további injekciókat:

• ≥ 2. fokozatú vagy annál magasabb hörgőgörcs,
• ≥ 2. vagy annál magasabb fokozatú allergiás reakció vagy generalizált urticaria,
• ≥ 2-es vagy annál magasabb fokozatú autoimmun betegség, kivéve a cukorbetegséget,
• ≥ 2. fokozatú reakció az injekció beadásának helyén vakcina vagy DTH-teszt miatt,
• ≥ 3. vagy 4. fokozatú hematológiai és nem hematológiai toxicitás
• 2. fokozatú toxicitás, amely a dendritesejtes vakcina beadását követő 5 napon belül nem szűnik meg
• Az adagolás késése > 4 hét

A terápia megszakítható a következő okok miatt:

• Interkurrens betegség, amely megakadályozza az autológ dendritesejtes vakcina további beadását, beleértve a fertőző (bakteriális/vírusos) betegség bizonyítékait
• Elfogadhatatlan nemkívánatos esemény(ek),
• A páciens úgy dönt, hogy kilép a vizsgálatból, ill
• A beteg állapotában bekövetkezett általános vagy specifikus változások a vizsgáló, a nővér vagy a kezelőorvos(ok) megítélése szerint elfogadhatatlanná teszik a beteget további kezelésre.

3.3 ADATGYŰJTÉS ÉS STATISZTIKAI SZEMPONTOK 3.3.1. Általános megfontolások Ez egy biztonsági vizsgálat lesz, amely a CD40, CD80 és CD86 társtranszkriptumok elsődleges transzkriptumait célzó, foszforotioáttal módosított antiszensz oligonukleotidokkal ex vivo kezelt autológ dendritesejten alapuló, cukorbetegség-szuppresszív dendritesejtes vakcina beadásának biztonságosságát és megvalósíthatóságát értékeli. stimuláló molekulák. A vakcinát intradermálisan adják be, és minden vakcina 1 x 107 autológ dendritikus sejtet tartalmaz. Minden jogosult alanynak összesen 4 oltóanyag kerül átadásra. Leukaferézist végeznek (14 nappal az első vakcina előtt), hogy biztosítsák a megfelelő számú DC-t.

A kísérlet célja annak biztosítása, hogy a toxicitási arány elfogadhatóan alacsony legyen, ami indokolja a sejtvakcina további vizsgálatát a hatékonysági vizsgálatok során.

4.5.1 KLINIKAI KÍSÉRLETI MONITORING

4.5.1.1 Súlyos nemkívánatos események jelentése (SAE)

KELLEMZŐ ESEMÉNYEK: Általában minden nemkívánatos eseményt rögzítenek, és közölnek a biztonsági tiszttel, a PI-vel és a DSMB-vel az eseményt követő 24 órán belül. A biztonsági tiszt dönti el, hogy a DSMB-nek össze kell-e ülnie vészhelyzetben. A nem súlyos nemkívánatos eseményekről szóló jelentéseket a DSMB ülését követő 24 órán belül benyújtják az IRB-nek. A DSMB éves és zárójelentéseit az ülést követő 48 órán belül benyújtják az IRB-nek és az FDA-nak is.

Súlyos nemkívánatos események jelentése (SAE)

Mindent (SAE) rögzíteni kell a szabványos toxicitási lapokon, és jelenteni kell az FDA-nak, az IRB-nek, a DSMB biztonsági tisztjének és a vizsgálatvezetőnek (Dr. Trucco) és/vagy társnyomozók (Dr. Finegold, Whiteside vagy Giannoukakis) az előfordulást követő 24 órán belül. Minden, a kezelés során felmerülő súlyos nemkívánatos eseményt és már meglévő egészségügyi állapotot, amely váratlanul súlyosbodik a terápia során, rögzíteni kell és jelenteni kell a közvetlenül fent leírtak szerint (DSMB, DSMB biztonsági tiszt, PI, FDA, IRB). Minden olyan súlyos nemkívánatos eseményt vagy halálesetet, amely harminc (30) napon túl következik be, és ésszerűen valószínű, hogy az ellenőrzéssel vagy az iDC-kezeléssel kapcsolatos, az eseményt követő 24 órán belül jelenteni kell a biztonsági tisztnek, az FDA-nak és a teljes DSMB-nek. Minden olyan súlyos vagy nemkívánatos eseményt vagy halálesetet, amely az utolsó kontroll DC vagy iDC beadását követő harminc (30) napon belül következik be, azonos módon kell jelenteni. A biztonsági tiszt a DSMB teljes értekezletét hívja össze a vészhelyzet előfordulását követő 24 órán belül. A DSMB jelentést ezt követően legkésőbb 48 órával a SAE előfordulását követően benyújtják az IRB-nek és az FDA-nak.

A súlyos a 21 CFR 312.32 (a) pontban leírtak szerint definiálható.