化粧品の色で着色されたコンタクトレンズの眼表面への影響

3. 方法 すべての被験者は、コンタクトレンズ装用の前後に基本情報を記入し、アンケートに回答する必要があります。 被験者は、色付きコンタクトレンズを装着する前に、細隙灯生体顕微鏡検査およびフルオレセイン染色（ドイツ、ハイグ海峡）、気圧計（Topcon® CT-80）による眼圧測定、屈折計（Topcon® KR-8900）による検査および検査を受けます。 、未補正および最良補正のスネレン視力 (UCVA および BCVA)、シルミア テスト 1、涙液膜破壊時間 (TBUT)、角膜トポグラフィー (ボシュロム® Orb IIz)、および鏡面顕微鏡による内皮細胞密度測定 (コーナン ノンコン) Robo-Sp-9000、米国）。 検査は、レンズ装用後 1 週間、1、3、6 か月後にも行われます。 すべての被験者用の特別なカルテが毎回の診察中に記入されます。各検査中、被験者は結膜注射、結膜乳頭肥大、パンヌス形成、および角膜上皮症の兆候が観察されます。 これらの標識は、以下の表に示すように等級付けされます。

兆候 0=正常 1=軽度 2=中等度 3=重度の結膜注射 なし 最小の明らかなびまん性乳頭サイズ なし <0.25mm 0.25-0.5mm >0.5mm 表層パンヌス パンヌスなし 1 象限 2 象限 3 象限以上 点状上皮症 なし 角膜の 1/3 未満 角膜の 1/3 ～ 1/2 融合または上皮欠損あり

シルミア テスト 1 (基礎分泌テスト) は 5 分間実行され、フィルター ストリップが長さ 5 mm 未満で濡れた場合は異常とみなされます。 10 秒未満の TBUT は異常とみなされます。

国立台湾大学では、レンズ装用前とレンズ装用後 3 か月と 6 か月後に印象細胞診が行われます。 孔径０．２２μｍのニトロセルロース濾紙（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＧＳＷＰ ０４７００、米国マサチューセッツ州ビレリカ）を細片（約４×８ｍｍ）に切断する。 局所麻酔薬 (プロパラカイン 0.5 %) を一滴塗布した後、過剰な涙を滅菌綿棒で優しく吸収します。 ニトロセルロースのストリップを角結膜の表面に置きます。 軽い圧力を加えた後、紙ストリップを剥がし、すぐに 95% アルコールで固定します。 次に、ストリップを過ヨウ素酸シッフ (PAS ; Sigma 395132、Hattiesburg、MS、USA) を使用して染色し、倍率 40 倍の光学顕微鏡で検査し、以下の Saini らの基準 21 に従ってマスク観察者によって等級付けされます。 グレード 1: 核と細胞質の比率が 1:2 の小さな円形の上皮細胞。 多数の深陽性細胞が存在する。 通常、良好なコンフルエントな細胞シートが得られます。 グレード 2: 核細胞質比が 1:3 に減少した、より大きな多角形の上皮細胞からなる良好な細胞シート。 杯細胞の数は減少しましたが、依然として高度に PAS 陽性です。 グレード 3: 核と細胞質の比率がさらに低下した、より大きな多角形の細胞。 杯細胞の数が減少し、染色が減少しました。 グレード 4: 濃縮核を持つ、より大きな多角形の好塩基性細胞。 細胞内ケラチンはしばしば実証されます。 杯細胞が存在しない。 わずかな緩い塊しか得られなかった。 杯細胞密度は、少なくとも 4 つの高倍率視野 (HPF) で上皮細胞 100 個あたりの平均細胞数をカウントすることによっても等級付けされます。 グレード 1: >30 杯細胞/4 HPF。 グレード 2: 杯細胞 15 ～ 30 個/HPF 4。 グレード 3: 5 ～ 15 個の杯細胞 / 4 HPF。 グレード 4: <5 杯細胞/4 HPF。

角膜の生体内共焦点顕微鏡イメージングは​​、レンズ装用前とレンズ装用後 3 か月および 6 か月後に、国立台湾大学の全被験者に対して 1 名の覆面検査官によって実施されます。 各検査の直前に、0.5% プロパラカイン溶液 1 滴と人工涙液を点滴しました。 患者にまっすぐ前を見るように指示した後、生体内共焦点顕微鏡 (Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies (イタリア、パドバ) は、標準の 40 倍水浸フロント レンズを装備し、角膜中央の全層の画像を自動的に取得しました。 各検査には約 1 ～ 3 分かかり、連続する画像間の Z 軸上の距離 1.5 および 4 μm で 350 枚の画像が記録されました。 各訪問中、測定は 4 um z 間隔で 3 回、続いて 1.5 um z 間隔で 3 回繰り返されました。 上皮細胞の形態、上皮の厚さ、および間質反応の分析は、Chen et al22-24 によって発表されたものに続きます。 角膜神経の形態と密度も記録され、分析されます。

使用済みコンタクトレンズは付属の保管ケースに入れて持ち帰っていただき、レンズに破れや欠けがないか確認させていただきます。 その後、レンズは走査型電子顕微鏡 (SEM) によるさらなる材料分析と、個人の資金による細菌付着の測定に使用されます。 SEM では、使用済みレンズを穏やかに洗浄した後、半分の強度の Karnovskys 固定液 (2% パラホルムアルデヒドおよび 2.5% グルタルアルデヒド) で固定しました。 固定液を除去し、すすぐために蒸留水を加えた。 真空下に一晩置く前に、液体窒素に浸漬して急速凍結を行った。 サンプルの凹面をアルミニウムのスタブに取り付け、SEM (日本電子株式会社、JSM 5300、日本) でさまざまな倍率で 15 kV で検査するために金でスパッタ コーティングしました。 細菌付着を測定するために、使用済みレンズを滅菌プレートに収集し、PBS に 3 回穏やかに浸した後、1 ml の PBS を含むエッペンドルフ チューブに置きます。 次に、レンズを浸軟化し、ミュラーヒントン寒天培地上にプレーティングする前に、最大 105 までの段階希釈を行います。 寒天プレートを一晩インキュベートし、翌日コロニー形成単位をカウントします。 コロニーの数に希釈係数を掛け、プレーティングされた体積で割ると、コンタクトレンズあたりのCFU/mlが得られます。

すべてのデータは Excel スプレッドシート (Microsoft, Inc) に入力され、Windows 用 SPSS ソフトウェア (11.0、SPSS, Inc.) を使用して分析されます。 対応のある t 検定を使用して、色付きコンタクト レンズの着用前後のすべてのパラメーターを比較します。