Einfluss kosmetisch gefärbter Kontaktlinsen auf die Augenoberfläche

3. Methoden Alle Probanden müssen vor und nach dem Tragen von Kontaktlinsen grundlegende Informationen ausfüllen und einen Fragebogen ausfüllen. Die Probanden werden untersucht und getestet, bevor ihnen gefärbte Kontaktlinsen mit Spaltlampenbiomikroskopie und Fluoreszenzfärbung (Heigstraße, Deutschland), Augeninnendruckmessung mittels Pneumotonometrie (Topcon® CT-80) und Refraktometer (Topcon® KR-8900) angepasst werden. , unkorrigierte und am besten korrigierte Snellen-Sehschärfe (UCVA und BCVA), Schirmir-Test 1, Tränenfilm-Aufreißzeit (TBUT), Hornhauttopographie (Bausch & Lomb® Orb IIz) und Messung der Endothelzelldichte mittels Spiegelmikroskopie (Konan Noncon Robo-Sp-9000, USA). Untersuchungen werden auch nach 1 Woche, 1, 3 und 6 Monaten Tragen der Linse durchgeführt. Bei jedem Besuch wird für alle Probanden eine spezielle Tabelle ausgefüllt. Bei jeder Untersuchung werden die Probanden auf Anzeichen einer Bindehautinjektion, Bindehautpapillenhypertrophie, Pannusbildung und Hornhautepitheliopathie beobachtet. Diese Zeichen werden wie in der folgenden Tabelle dargestellt eingestuft.

Anzeichen 0 = normal 1 = leicht 2 = mäßig 3 = schwer Bindehautinjektion keine minimal offensichtliche diffuse Papillengröße keine <0,25 mm 0,25–0,5 mm >0,5 mm Oberflächlicher Pannus Kein Pannus 1 Quadrant 2 Quadranten >=3 Quadranten Punktierte Epitheliopathie Keine <1/3 der Hornhaut 1/3-1/2 der Hornhaut Konfluent oder mit Epitheldefekt

Der Schirmir-Test 1 (basaler Sekretionstest) wird 5 Minuten lang durchgeführt und gilt als abnormal, wenn der Filterstreifen weniger als 5 mm lang benetzt. Eine TBUT von weniger als 10 Sekunden gilt als abnormal.

Die Abdruckzytologie wird vor dem Tragen der Linse sowie 3 und 6 Monate nach dem Tragen der Linse an der National Taiwan University durchgeführt. Nitrozellulose-Filterpapier mit einer Porengröße von 0,22 μm (Millipore GSWP 04700, Billerica, MA, USA) wird in Streifen (ca. 4 x 8 mm) geschnitten. Nach der Anwendung eines Tropfens eines topischen Anästhetikums (Proparacain 0,5 %) werden überschüssige Tränen sanft mit sterilen Wattestäbchen aufgesaugt. Nitrozellulosestreifen werden auf die Oberfläche der limbalen Bindehaut gelegt. Nach leichtem Druck werden die Papierstreifen abgezogen und sofort in 95 %igem Alkohol fixiert. Die Streifen werden dann mit Periodsäure-Schiff (PAS; Sigma 395132, Hattiesburg, MS, USA) gefärbt und unter dem Lichtmikroskop bei 40-facher Vergrößerung untersucht und von Maskenbeobachtern gemäß den Kriterien von Saini et al.21 wie folgt bewertet. Grad 1: Kleine runde Epithelzellen mit einem Kern-Zytoplasma-Verhältnis von 1:2. Große Anzahl zutiefst positiver Zellen vorhanden. Normalerweise wird eine gute konfluente Zellschicht erhalten. Grad 2: Eine gute Zellschicht, bestehend aus größeren polygonalen Epithelzellen mit einem verringerten nukleozytoplasmatischen Verhältnis von 1:3. Die Zahl der Becherzellen ist zurückgegangen, sie sind aber immer noch stark PAS-positiv. Grad 3: Größere polygonale Zellen mit einer weiteren Abnahme des Kern-Zytoplasma-Verhältnisses. Reduzierte Anzahl an Becherzellen mit reduzierter Färbung. Grad 4: Größere polygonale basophile Zellen mit pyknotischen Kernen. Intrazelluläres Keratin oft nachweisbar. Fehlende Becherzellen. Es waren nur wenige lose Klumpen erhältlich. Die Becherzelldichte wird auch durch Zählen der durchschnittlichen Anzahl von Zellen pro 100 Epithelzellen in mindestens vier Hochleistungsfeldern (HPF) bewertet. Grad 1: >30 Becherzellen/4 HPF. Grad 2: 15–30 Becherzellen/4 HPF. Grad 3: 5–15 Becherzellen/4 HPF. Grad 4: <5 Becherzellen/4 HPF.

In vivo wird eine konfokale Mikroskopie der Hornhaut vor dem Tragen der Linse sowie 3 und 6 Monate nach dem Tragen der Linse durch einen maskierten Prüfer für alle Probanden der National Taiwan University durchgeführt. Unmittelbar vor jeder Untersuchung wurde ein Tropfen 0,5 %ige Proparacainlösung und künstliche Tränen eingeträufelt. Nachdem die Patienten gebeten wurden, geradeaus zu schauen, wurde ein in vivo konfokales Mikroskop (Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies, Padua, Italien), ausgestattet mit einer standardmäßigen 40-fachen Wasserimmersions-Frontlinse, erfasste automatisch Bilder der gesamten Dicke der zentralen Hornhaut. Jede Untersuchung dauerte etwa 1 bis 3 Minuten und es wurden 350 Bilder in einem Abstand von 1,5 und 4 μm auf der z-Achse zwischen aufeinanderfolgenden Bildern aufgezeichnet. Bei jedem Besuch wurden die Messungen dreimal mit einem Z-Intervall von 4 µm und anschließend dreimal mit einem Z-Intervall von 1,5 µm wiederholt. Es folgt eine Analyse der Morphologie der Epithelzellen, der Epitheldicke und der Stromareaktion, die von Chen et al.22–24 veröffentlicht wurde. Die Morphologie und Dichte der Hornhautnerven wird ebenfalls aufgezeichnet und analysiert.

Gebrauchte Kontaktlinsen werden in die bereitgestellten Aufbewahrungsbehälter gelegt und zurückgebracht, um die Vollständigkeit der Linse ohne Risse oder Absplitterungen zu überprüfen. Die Linsen werden dann für die weitere Materialanalyse durch Rasterelektromikroskopie (REM) und die Bestimmung der Bakterienadhäsion mit Eigenfinanzierung verwendet. Für die SEM wurden gebrauchte Linsen nach vorsichtigem Waschen in halbstarkem Karnovskys-Fixiermittel (2 % Paraformaldehyd und 2,5 % Glutaraldehyd) fixiert. Das Fixiermittel wurde entfernt und zum Spülen destilliertes Wasser hinzugefügt. Es erfolgte ein schnelles Einfrieren unter Eintauchen in flüssigen Stickstoff, bevor es über Nacht unter Vakuum gesetzt wurde. Die konkave Seite der Proben wurde auf Aluminiumstummeln montiert und zur Untersuchung mittels SEM (JEOL Ltd, JSM 5300, Japan) bei 15 kV und verschiedener Vergrößerung mit Gold sputterbeschichtet. Zur Bestimmung der bakteriellen Adhäsion werden gebrauchte Linsen in sterilen Platten gesammelt und dreimal vorsichtig in PBS getaucht, bevor sie in Eppendorf-Röhrchen mit 1 ml PBS gegeben werden. Anschließend werden die Linsen mazeriert und Reihenverdünnungen bis zu 105 durchgeführt, bevor sie auf Muller-Hinton-Agar ausplattiert werden. Die Agarplatten werden über Nacht inkubiert und die koloniebildenden Einheiten werden am nächsten Tag gezählt. Die Anzahl der Kolonien multipliziert mit dem Verdünnungsfaktor dividiert durch das ausplattierte Volumen ergibt die KBE/ml/pro Kontaktlinse.

Alle Daten werden in eine Excel-Tabelle (Microsoft, Inc) eingegeben und mit der SPSS-Software für Windows (11.0, SPSS, Inc.) analysiert. Gepaarte T-Tests werden verwendet, um alle Parameter vor und nach dem Tragen der gefärbten Kontaktlinsen zu vergleichen.