Kosmeettisten värisävytettyjen piilolinssien vaikutus silmän pintaan

3. Menetelmät Kaikkien koehenkilöiden tulee täyttää perustiedot ja vastata kyselyyn ennen piilolinssien käyttöä ja sen jälkeen. Koehenkilöt tutkitaan ja testataan ennen värillisten piilolinssien asentamista rakolampun biomikroskopialla ja fluoreseiinivärjäyksellä (Heig Strait, Saksa), silmänsisäisen paineen mittauksella pneumotonometrialla (Topcon® CT-80), refraktometrillä (Topcon® KR-8900) , korjaamaton ja parhaiten korjattu Snellenin näöntarkkuus (UCVA ja BCVA), Schirmir-testi 1, kyynelkalvon hajoamisaika (TBUT), sarveiskalvon topografia (Bausch & Lomb® Orb IIz) ja endoteelisolutiheyden mittaus peilimikroskoopilla (Konan Noncon) Robo-Sp-9000, USA). Tutkimukset tehdään myös 1 viikon, 1, 3 ja 6 kuukauden linssien käytön jälkeen. Jokaisen käynnin aikana täytetään erityinen taulukko kaikista koehenkilöistä Jokaisen tutkimuksen aikana koehenkilöitä tarkkaillaan sidekalvoinjektion, sidekalvon papillaarisen liikakasvun, pannuksen muodostumisen ja sarveiskalvon epiteliopatian varalta. Nämä merkit on luokiteltu alla olevan taulukon mukaisesti.

Merkkejä 0 = Normaali 1 = Lievä 2 = Keskivaikea 3 = Vaikea sidekalvon injektio Ei mitään Minimaalinen ilmeinen diffuusi papillajen koko Ei yhtään <0,25 mm 0,25-0,5 mm >0,5 mm Pinnallinen Pannus Ei pannus 1 kvadrantti 2 kvadranttia >=3 kvadranttia Punktaattinen epiteliopatia Ei yhtään <1/3 sarveiskalvosta 1/3-1/2 sarveiskalvosta Konfluentti tai epiteelivika

Schirmir-testi 1 (peruserityksen testi) suoritetaan 5 minuutin ajan ja sitä pidetään epänormaalina, jos suodatinnauha kastuu <5 mm:n pituiseksi. Alle 10 sekunnin TBUT katsotaan epänormaaliksi.

Impression sytologia suoritetaan ennen linssien käyttöä ja 3 ja 6 kuukautta linssin käytön jälkeen Taiwanin kansallisessa yliopistossa. Nitroselluloosasuodatinpaperi, jonka huokoskoko on 0,22 μm (Millipore GSWP 04700, Billerica, MA, U.S.A.), leikataan suikaleiksi (noin 4x8 mm). Tipallisen paikallispuudutteen (proparakiini 0,5 %) levityksen jälkeen ylimääräiset kyyneleet imeytyvät hellävaraisesti steriileillä vanupuikoilla. Nitroselluloosaliuskat asetetaan limbaalisen sidekalvon pinnalle. Kevyen paineen jälkeen paperinauhat kuoritaan pois ja kiinnitetään välittömästi 95 % alkoholiin. Sen jälkeen nauhat värjätään käyttämällä periodihappo-Schiffiä (PAS; Sigma 395132, Hattiesburg, MS, USA) ja tutkitaan valomikroskopialla 40-kertaisella suurennuksella ja luokitellaan maskitarkkailijoiden toimesta Sainin et al:n kriteerien21 mukaisesti seuraavasti. Aste 1: Pienet pyöreät epiteelisolut, joiden ytimen ja sytoplasman välinen suhde on 1:2. Suuri määrä syvästi positiivisia soluja. Yleensä saadaan hyvä konfluentti soluarkki. Luokka 2: Hyvä solulevy, joka koostuu suuremmista monikulmaisista epiteelisoluista, joiden nukleosytoplasminen suhde on 1:3. Pikarisolujen määrä vähentynyt, mutta silti syvästi PAS-positiivisia. Aste 3: Suuremmat monikulmiot solut, joissa ytimen ja sytoplasman välinen suhde on edelleen pienentynyt. Pienempi pikarisolujen määrä, vähentynyt värjäytyminen. Aste 4: Suuremmat polygonaaliset basofiiliset solut, joissa on pyknoottisia ytimiä. Solunsisäinen keratiini on usein osoitettavissa. Pikarisolut puuttuvat. Saatavilla oli vain muutama löysä kokkare. Pikarisolutiheys luokitellaan myös laskemalla solujen keskimääräinen lukumäärä 100 epiteelisolua kohti vähintään neljässä suurtehokentässä (HPF). Luokka 1: >30 pikarisolua / 4 HPF. Luokka 2: 15-30 pikarisolua / 4 HPF. Luokka 3: 5-15 pikarisolua / 4 HPF. Luokka 4: <5 pikarisolua / 4 HPF.

Sarveiskalvon in vivo -konfokaalimikroskopiakuvaus tehdään ennen linssin käyttöä ja 3 ja 6 kuukautta linssin käytön jälkeen. Yksi naamioitunut tutkija tekee Taiwanin kansallisen yliopiston kaikille koehenkilöille. Yksi tippa 0,5 % proparakaiiniliuosta ja tekokyyneleitä tiputettiin välittömästi ennen jokaista tutkimusta. Kun potilaita on pyydetty katsomaan suoraan eteenpäin, in vivo konfokaalinen mikroskooppi (Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies, Padova, Italia), joka on varustettu tavallisella 40-kertaisella veteen upotettavalla etulinssillä, otti kuvia sarveiskalvon keskipaksuudesta automaattisesti. Kukin tutkimus kesti noin 1–3 minuuttia ja tallensi 350 kuvaa 1,5–4 μm:n etäisyydellä z-akselilla peräkkäisten kuvien välillä. Jokaisen käynnin aikana mittaukset toistettiin 4 um z-välillä 3 kertaa ja sen jälkeen 1,5 um z-välillä 3 kertaa. Seuraa epiteelisolujen morfologian, epiteelin paksuuden ja stroomareaktion analyysiä, jonka ovat julkaisseet Chen et ai22-24. Sarveiskalvon hermon morfologia ja tiheys myös kirjataan ja analysoidaan.

Käytetyt piilolinssit laitetaan mukana toimitettuihin säilytyslaukkuihin ja tuodaan takaisin tarkistamaan linssien täydellisyys ilman repeytymiä tai halkeamia. Linssejä käytetään sitten lisämateriaalianalyyseihin skannauselektromikroskopialla (SEM) ja bakteerien tarttuvuuden määrittämiseen henkilökohtaisella rahoituksella. SEM:ssä käytetyt linssit kiinnitettiin puolivahvalla Karnovskys-fiksatiivilla (2 % paraformaldehydiä ja 2,5 % glutaraldehydiä) hellävaraisen pesun jälkeen. Kiinnitysaine poistettiin ja tislattua vettä lisättiin huuhtelua varten. Nopea pakastus nestetyppeen upottamalla tehtiin ennen kuin se asetettiin tyhjiöön yön yli. Näytteiden kovera puoli kiinnitettiin alumiinituoleille ja sputteroitiin kullalla SEM-tutkimusta varten (JEOL Ltd, JSM 5300, Japani) 15 kV:lla eri suurennoksilla. Bakteeriadheesion määritystä varten käytetyt linssit kerätään steriileille levyille ja kastetaan varovasti kolme kertaa PBS:ään ennen sijoittamista eppendorf-putkiin, jotka sisältävät 1 ml PBS:ää. Linssit maseroidaan sitten ja sarjalaimennokset 105:een asti tehdään ennen maljaamista Muller-Hinton-agarille. Agarmaljoja inkuboidaan yön yli ja pesäkkeitä muodostavat yksiköt lasketaan seuraavana päivänä. Pesäkkeiden lukumäärä kerrottuna laimennuskertoimella jaettuna maljatulla tilavuudella antaa CFU/ml/piilolinssiä kohti.

Kaikki tiedot syötetään Excel-laskentataulukkoon (Microsoft, Inc.) ja analysoidaan SPSS for Windows -ohjelmistolla (11.0, SPSS, Inc.). Parillisia t-testejä käytetään vertaamaan kaikkia parametreja ennen ja jälkeen värisävytettyjen piilolinssien käytön.