Invloed van cosmetisch gekleurde contactlenzen op het oogoppervlak

3. Methoden Alle proefpersonen moeten basisinformatie invullen en een vragenlijst invullen voor en na het dragen van contactlenzen. De proefpersonen worden onderzocht en getest voordat ze worden aangebracht op een kleurgetinte contactlens met spleetlampbiomicroscopie en fluoresceïnekleuring (Heig Strait, Duitsland), intraoculaire drukmeting door pneumotonometerie (Topcon® CT-80), refractometer (Topcon® KR-8900) , ongecorrigeerde en best gecorrigeerde Snellen-gezichtsscherpte (UCVA en BCVA), Schirmir-test 1, traanfilmbreektijd (TBUT), corneale topografie (Bausch & Lomb® Orb IIz) en meting van de endotheelceldichtheid door middel van spiegelmicroscopie (Konan Noncon Robo-Sp-9000, VS). Examens worden ook uitgevoerd bij 1 week, 1, 3 en 6 maanden lensgebruik. Tijdens elk bezoek wordt een speciale kaart voor alle proefpersonen ingevuld. Tijdens elk onderzoek worden proefpersonen geobserveerd op tekenen van conjunctivale injectie, conjunctivale papillaire hypertrofie, pannusvorming en corneale epitheliopathie. Deze tekens zijn gerangschikt zoals weergegeven in de onderstaande tabel.

Symptomen 0=normaal 1=mild 2=matig 3=ernstig Conjunctivale injectie Geen Minimaal Duidelijk Diffuus Papillengrootte Geen <0,25 mm 0,25-0,5 mm >0,5 mm Oppervlakkige pannus Geen pannus 1 kwadrant 2 kwadranten >=3 kwadranten Punctaat Epitheliopathie Geen <1/3 van het hoornvlies 1/3-1/2 van het hoornvlies Confluent of met epitheeldefect

Schirmir-test 1 (basale secretietest) wordt gedurende 5 minuten uitgevoerd en wordt als abnormaal beschouwd als de filterstrip minder dan 5 mm nat is. TBUT van minder dan 10 seconden wordt als abnormaal beschouwd.

Afdrukcytologie zal worden uitgevoerd vóór het dragen van de lens en 3 en 6 maanden na het dragen van de lens aan de National Taiwan University. Nitrocellulose filterpapier met een poriegrootte van 0,22 μm (Millipore GSWP 04700, Billerica, MA, U.S.A.) wordt in reepjes gesneden (ongeveer 4x8 mm). Na het aanbrengen van een druppel plaatselijke verdoving (proparacaïne 0,5%) worden overtollige tranen voorzichtig geabsorbeerd door steriele wattenstaafjes. Nitrocellulosestrips worden op het oppervlak van limbale conjunctiva geplaatst. Na lichte druk worden de papieren stroken afgepeld en onmiddellijk gefixeerd in alcohol 95%. De stroken worden vervolgens gekleurd met behulp van periodiek zuur-Schiff (PAS; Sigma 395132, Hattiesburg, MS, VS) en onderzocht onder lichtmicroscopie bij een vergroting van 40x en beoordeeld door maskerwaarnemers volgens de criteria van Saini et al als volgt. Graad 1: kleine ronde epitheelcellen met een kern-tot-cytoplasmaverhouding van 1:2. Groot aantal diep positieve cellen aanwezig. Gewoonlijk wordt een goed samenvloeiend vel cellen verkregen. Graad 2: Een goed celvel bestaande uit grotere polygonale epitheelcellen met een verminderde nucleocytoplasmatische verhouding van 1:3. Slijmbekercellen verminderd in aantal, maar nog steeds diep PAS-positief. Graad 3: Grotere polygonale cellen met een verdere afname van de verhouding kern tot cytoplasma. Verminderd aantal slijmbekercellen, met verminderde kleuring. Graad 4: Grotere veelhoekige basofiele cellen met pyknotische kernen. Intracellulaire keratine vaak aantoonbaar. Afwezige slijmbekercellen. Er waren slechts enkele losse bosjes te verkrijgen. De dichtheid van slijmbekercellen wordt ook beoordeeld door het gemiddelde aantal cellen per 100 epitheelcellen in ten minste vier krachtige velden (HPF) te tellen. Graad 1: >30 slijmbekercellen/ 4 HPF. Graad 2: 15-30 bekercellen/ 4 HPF. Graad 3: 5-15 bekercellen/ 4 HPF. Graad 4: <5 slijmbekercellen/ 4 HPF.

In vivo confocale microscopiebeeldvorming van het hoornvlies zal worden uitgevoerd vóór het dragen van de lens en 3 en 6 maanden na het dragen van de lens door een gemaskerde onderzoeker op alle onderwerpen aan de National Taiwan University. Direct voor elk onderzoek werd één druppel 0,5% proparacaïne-oplossing en kunsttranen ingedruppeld. Nadat de patiënten waren gevraagd om recht vooruit te kijken, werd een in vivo confocale microscoop (Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies, Padova, Italië) uitgerust met een standaard 40x frontlens met wateronderdompeling die automatisch beelden van de volledige dikte van het centrale hoornvlies vastlegde. Elk onderzoek duurde ongeveer 1 tot 3 minuten en registreerde 350 beelden op een afstand van 1,5 en 4 μm op de z-as tussen opeenvolgende beelden. Tijdens elk bezoek werden metingen herhaald met 4 um z-interval gedurende 3 keer gevolgd door 1,5 um z-interval gedurende 3 keer. Analyse van de morfologie van epitheelcellen, epitheeldikte en stromale reactie volgt die is gepubliceerd door Chen et al22-24. De morfologie en densiteit van de hoornvlieszenuw zullen ook worden geregistreerd en geanalyseerd.

Gebruikte contactlenzen worden in de meegeleverde opbergdoosjes geplaatst en teruggebracht om te controleren of de lens compleet is zonder scheuren of afgebroken stukjes. De lenzen worden vervolgens gebruikt voor verdere materiaalanalyse door scanning-elektromicroscopie (SEM) en bepaling van bacteriële adhesie met persoonlijke financiering. Voor SEM werden gebruikte lenzen gefixeerd in Karnovsky's fixeermiddel van halve sterkte (2% paraformaldehyde en 2,5% glutaaraldehyde) na voorzichtig wassen. Het fixeermiddel werd verwijderd en gedestilleerd water werd toegevoegd om te spoelen. Snel invriezen met onderdompeling in vloeibare stikstof werd uitgevoerd voordat het een nacht onder vacuüm werd geplaatst. De concave zijde van de monsters werd op aluminiumstompen gemonteerd en door sputteren bedekt met goud voor onderzoek onder SEM (JEOL Ltd, JSM 5300, Japan) bij 15 kV onder verschillende vergrotingen. Voor bepaling van de bacteriële adhesie worden gebruikte lenzen verzameld in steriele platen en voorzichtig driemaal in PBS gedompeld voordat ze in Eppendorf-buisjes met 1 ml PBS worden geplaatst. De lenzen worden vervolgens gemacereerd en seriële verdunningen tot 105 worden uitgevoerd voordat ze op Muller-Hinton-agar worden uitgeplaat. De agarplaten worden een nacht geïncubeerd en de kolonievormende eenheden worden de volgende dag geteld. Het aantal kolonies vermenigvuldigd met de verdunningsfactor gedeeld door het geplateerde volume levert de CFU/ml/per contactlens op.

Alle gegevens worden ingevoerd in een Excel-spreadsheet (Microsoft, Inc) en geanalyseerd met behulp van SPSS-software voor Windows (11.0, SPSS, Inc.). Gepaarde t-testen zullen worden gebruikt om alle parameters voor en na het dragen van de kleurgetinte contactlenzen te vergelijken.