화장용 착색 콘택트렌즈가 안구 표면에 미치는 영향

3. 방법 모든 피험자는 콘택트렌즈 착용 전후에 기본정보를 작성하고 설문지를 작성한다. 세극등 생체현미경 및 형광 염색(Heig Strait, Germany), 기압계(Topcon® CT-80), 굴절계(Topcon® KR-8900)를 통한 안압 측정을 통해 색착색 콘택트렌즈를 착용하기 전에 피험자를 검사하고 테스트합니다. , 무보정 및 최고 교정 Snellen 시력(UCVA 및 BCVA), 쉬르미르 테스트 1, 눈물막 파괴 시간(TBUT), 각막 지형도(Bausch & Lomb® Orb IIz) 및 경면 현미경(Konan Noncon)에 의한 내피 세포 밀도 측정 Robo-Sp-9000, 미국). 렌즈착용 1주, 1개월, 3개월, 6개월차에도 검사를 합니다. 모든 피험자에 대한 특별 차트는 각 방문 중에 작성됩니다. 각 검사 동안 피험자는 결막 충혈, 결막 유두 비대, 판누스 형성 및 각막 상피병증의 징후를 관찰합니다. 이러한 기호는 아래 표와 같이 등급이 매겨집니다.

징후 0=정상 1=경증 2=중등도 3=심각한 결막충혈 없음 최소 명백한 미만성 유두 크기 없음 <0.25mm 0.25-0.5mm >0.5mm 표면 판누스 판누스 없음 1 사분면 2 사분면 >=3 사분면 점상 상피병증 없음 < 각막의 1/3 각막의 1/3-1/2 융합 또는 상피 결손

쉬르미르 검사 1(기저 분비 검사)은 5분 동안 수행되며 필터 스트립의 길이가 5mm 미만이면 비정상으로 간주됩니다. 10초 미만의 TBUT는 비정상으로 간주됩니다.

National Taiwan University에서 렌즈 착용 전과 렌즈 착용 후 3개월 및 6개월에 인상 세포학을 수행합니다. 공극 크기가 0.22㎛인 니트로셀룰로오스 여과지(Millipore GSWP 04700, Billerica, MA, USA)를 스트립(약 4x8mm)으로 절단한다. 국소 마취제(프로파라카인 0.5%)를 한 방울 떨어뜨린 후 여분의 눈물은 멸균 면봉으로 부드럽게 흡수됩니다. 니트로셀룰로스 스트립을 윤부 결막 표면에 놓습니다. 가벼운 압력을 가한 후 종이 스트립을 벗겨내고 즉시 95% 알코올에 고정합니다. 그런 다음 스트립을 periodic acid-Schiff(PAS; Sigma 395132, Hattiesburg, MS, USA)를 사용하여 염색하고 광학 현미경으로 40X 배율로 검사하고 다음과 같이 Saini 등의 기준21에 따라 마스크 관찰자에 의해 등급이 매겨집니다. 등급 1: 핵 대 세포질 비율이 1:2인 작고 둥근 상피 세포. 많은 수의 깊은 양성 세포가 존재합니다. 일반적으로 우수한 합류 세포 시트를 얻습니다. Grade2: 감소된 핵세포질 비율이 1:3인 더 큰 다각형 상피 세포로 구성된 양호한 세포 시트. 술잔 세포의 수는 감소했지만 여전히 깊은 PAS 양성입니다. 등급 3: 세포질에 대한 핵의 비율이 더 감소한 더 큰 다각형 세포. 감소된 염색과 함께 술잔 세포의 수가 감소합니다. 등급 4: 농핵 핵을 가진 더 큰 다각형 호염기성 세포. 세포내 케라틴은 종종 입증됩니다. 술잔 세포가 없습니다. 약간의 느슨한 덩어리만 얻을 수 있었습니다. 술잔 세포 밀도는 또한 최소 4개의 고전력 필드(High Power Field, HPF)에서 100개의 상피 세포당 평균 세포 수를 세어 등급을 매깁니다. 등급 1: >30 잔 세포/4 HPF. 등급 2: 15-30개의 술잔 세포/4 HPF. 3등급: 5-15개의 술잔 세포/4 HPF. 4등급: <5 잔 세포/4 HPF.

각막의 생체 내 공초점 현미경 이미징은 National Taiwan University의 모든 피험자에 대해 마스크를 착용한 한 명의 검사관이 렌즈 착용 전과 렌즈 착용 후 3개월 및 6개월에 수행할 것입니다. 각 검사 직전에 0.5% 프로파라카인 용액 한 방울과 인공 눈물을 점적했습니다. 환자에게 앞을 똑바로 보라고 한 후 생체 내 공초점 현미경(Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies, Padova, Italy)는 표준 40x 침수 전면 렌즈가 장착되어 중앙 각막 전체 두께의 이미지를 자동으로 캡처했습니다. 각 검사는 약 1~3분이 소요되었으며 연속 이미지 사이의 z축에서 1.5 및 4μm의 거리에서 350개의 이미지를 기록했습니다. 각 방문 동안 측정은 4um z-interval로 3회 반복한 다음 1.5um z-interval로 3회 반복했습니다. 상피 세포 형태, 상피 두께 및 간질 반응의 분석은 Chen et al22-24에 의해 발표되었습니다. 각막 신경 형태와 밀도도 기록되고 분석됩니다.

사용한 콘택트렌즈는 제공된 보관 케이스에 담아 렌즈가 찢어지거나 깨진 부분 없이 완전한 상태인지 확인하기 위해 다시 가져옵니다. 그런 다음 렌즈는 주사 전자현미경(SEM)을 통한 추가 재료 분석과 개인 자금 지원으로 세균 부착 결정에 사용됩니다. SEM의 경우, 사용된 렌즈를 부드럽게 세척한 후 절반 강도의 Karnovsky 고정제(2% 파라포름알데히드 및 ​​2.5% 글루타르알데히드)로 고정했습니다. 고정액을 제거하고 증류수를 첨가하여 헹구었다. 밤새 진공 상태에 놓기 전에 액체 질소 침지로 급속 동결을 수행했습니다. 샘플의 오목면은 다양한 배율 하에서 15kV에서 SEM(JEOL Ltd, JSM 5300, 일본) 하에서 검사를 위해 알루미늄 스터브에 장착되고 금으로 스퍼터 코팅되었습니다. 박테리아 접착력 측정을 위해 사용된 렌즈를 멸균 플레이트에 수집하고 1ml PBS가 들어 있는 에펜도르프 튜브에 넣기 전에 PBS에 3회 부드럽게 담급니다. 그런 다음 렌즈를 침지하고 Muller-Hinton 한천에 도금하기 전에 최대 105배까지 연속 희석합니다. 한천 플레이트를 밤새 배양하고 콜로니 형성 단위를 다음날 계산합니다. 희석 계수를 곱한 콜로니 수를 도금된 부피로 나눈 값은 콘택트 렌즈당 CFU/ml/를 제공합니다.

모든 데이터는 Excel 스프레드시트(Microsoft, Inc.)에 입력하고 Windows용 SPSS 소프트웨어(11.0, SPSS, Inc.)를 사용하여 분석합니다. 착색 콘택트 렌즈 착용 전과 후의 모든 매개변수를 비교하기 위해 쌍체 t-테스트가 사용됩니다.