Indflydelse af kosmetiske farvetonede kontaktlinser på øjets overflade

3. Metoder Alle forsøgspersoner skal udfylde grundlæggende oplysninger og besvare et spørgeskema før og efter kontaktlinsebrug. Forsøgspersoner vil blive undersøgt og testet, før de monteres på farvetonede kontaktlinser med spaltelampebiomikroskopi og fluoresceinfarvning (Heig Strait, Tyskland), intraokulær trykmåling ved pneumotonometer (Topcon® CT-80), refraktometer (Topcon® KR-8900) , ukorrigeret og bedst korrigeret Snellen synsskarphed (UCVA og BCVA), Schirmir test 1, tårefilms opbrudstid (TBUT), cornea topografi (Bausch & Lomb® Orb IIz) og endotelcelletæthed måling ved spekulær mikroskopi (Konan Noncon Robo-Sp-9000, USA). Eksamen udføres også efter 1 uge, 1, 3 og 6 måneders linsebrug. Et særligt skema for alle emner udfyldes under hvert besøg. Under hver undersøgelse vil emnerne blive observeret for tegn på konjunktival injektion, konjunktival papillær hypertrofi, pannusdannelse og cornea epiteliopati. Disse tegn er klassificeret som vist i tabellen nedenfor.

Tegn 0=Normal 1=Mild 2=Moderat 3=Svær konjunktivalinjektion Ingen Minimal Indlysende diffuse papiller Størrelse Ingen <0,25 mm 0,25-0,5 mm >0,5 mm Overfladisk Pannus Ingen pannus 1 kvadrant 2 kvadranter >=3 kvadranter Punkteret epiteliopati Ingen <1/3 af hornhinden 1/3-1/2 af hornhinden Sammenflydende eller med epiteldefekt

Schirmir test 1 (basal sekretionstest) udføres i 5 minutter og betragtes som unormal, hvis filterstrimlen våder <5 mm i længden. TBUT på mindre end 10 sekunder betragtes som unormal.

Impressionscytologi vil blive udført før linsebrug og 3 og 6 måneder efter linsebrug på National Taiwan University. Nitrocellulosefilterpapir med en porestørrelse på 0,22 μm (Millipore GSWP 04700, Billerica, MA, U.S.A.) skæres i strimler (ca. 4x8 mm). Efter en dråbe topisk bedøvelse (proparacain 0,5 %) absorberes overskydende tårer forsigtigt af sterile vatpinde. Nitrocellulosestrimler placeres på overfladen af ​​limbal conjunctiva. Efter et let tryk pilles papirstrimlerne af og fikseres straks i 95 % alkohol. Strimlerne farves derefter under anvendelse af periodic acid-Schiff (PAS; Sigma 395132, Hattiesburg, MS, USA) og undersøges under lysmikroskopi ved 40X forstørrelse og klassificeres af maskeobservatører efter Saini et al's kriterier21 som følger. Grad 1: Små runde epitelceller med en kerne til cytoplasma-forholdet 1:2. Stort antal dybt positive celler til stede. Et godt sammenflydende ark af celler opnås normalt. Grad 2: Et godt celleark bestående af større polygonale epitelceller med en nedsat nukleocytoplasmatisk ration på 1:3. Pokalceller reduceret i antal, men stadig dybt PAS-positive. Grad 3: Større polygonale celler med et yderligere fald i forholdet mellem kerne og cytoplasma. Reduceret antal bægerceller, med reduceret farvning. Grad 4: Større polygonale basofile celler med pyknotiske kerner. Intracellulær keratin ofte påviselig. Fraværende bægerceller. Kun få løse klumper var tilgængelige. Bægercelletæthed er også graderet ved at tælle det gennemsnitlige antal celler pr. 100 epitelceller i mindst fire højeffektfelter (HPF). Grad 1: >30 bægerceller/4 HPF. Grad 2: 15-30 bægerceller/ 4 HPF. Grad 3: 5-15 bægerceller/ 4 HPF. Grad 4: <5 bægerceller/4 HPF.

In vivo konfokal mikroskopi af hornhinden vil blive udført før linsebrug og 3 og 6 måneder efter linsebrug af en maskeret eksaminator på alle emner ved National Taiwan University. En dråbe 0,5 % proparacainopløsning og kunstige tårer blev dryppet umiddelbart før hver undersøgelse. Efter at have bedt patienterne om at se lige frem, et in vivo konfokalt mikroskop (Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies, Padova, Italien) udstyret med en standard 40x vand-immersion frontlinse, der automatisk optog billeder af den fulde tykkelse af den centrale hornhinde. Hver undersøgelse tog cirka 1 til 3 minutter og optog 350 billeder i en afstand på 1,5 og 4 μm på z-aksen mellem på hinanden følgende billeder. Under hvert besøg blev målingerne gentaget med 4 um z-interval i 3 gange efterfulgt af 1,5 um z-interval i 3 gange. Analyse af epitelcellers morfologi, epiteltykkelse og stromal reaktion følger, som er blevet offentliggjort af Chen et al.22-24. Hornhindens nervemorfologi og tæthed vil også blive registreret og analyseret.

Brugte kontaktlinser vil blive anbragt i de medfølgende opbevaringshylstre og bragt tilbage for at kontrollere, om linsen er fuldstændig uden revner eller skårne stykker. Linserne bruges derefter til yderligere materialeanalyse ved scanning elektromikroskopi (SEM) og bakteriel adhæsionsbestemmelse med personlig finansiering. Til SEM blev brugte linser fikseret i Karnovskys fikseringsmiddel med halv styrke (2 % paraformaldehyd og 2,5 % glutaraldehyd) efter skånsom vask. Fikseringsmidlet blev fjernet, og destilleret vand blev tilsat til skylning. Hurtig frysning med nedsænkning af flydende nitrogen blev udført, før den blev anbragt under vakuum natten over. Den konkave side af prøverne blev monteret på aluminiumstumper og forstøvningsbelagt med guld til undersøgelse under SEM (JEOL Ltd, JSM 5300, Japan) ved 15 kV under forskellig forstørrelse. Til bestemmelse af bakteriel adhæsion opsamles brugte linser i sterile plader og dyppes forsigtigt tre gange i PBS før anbringelse i eppendorf-rør indeholdende 1 ml PBS. Linserne macereres derefter, og serielle fortyndinger op til 105 udføres før udpladning på Muller-Hinton agar. Agarpladerne inkuberes natten over, og kolonidannende enheder tælles næste dag. Antal kolonier ganget med fortyndingsfaktor divideret med det udpladede volumen vil give CFU/ml/pr. kontaktlinse.

Alle data vil blive indtastet i Excel-regneark (Microsoft, Inc.) og analyseret ved hjælp af SPSS-software til Windows (11.0, SPSS, Inc.). Parrede t-tests vil blive brugt til at sammenligne alle parametre før og efter brug af de farvetonede kontaktlinser.