Påvirkning av kosmetiske fargetonede kontaktlinser på øyeoverflaten

3. Metoder Alle forsøkspersoner må fylle ut grunnleggende informasjon og besvare et spørreskjema før og etter kontaktlinsebruk. Personer vil bli undersøkt og testet før de monteres på fargetonet kontaktlinse med spaltelampebiomikroskopi og fluoresceinfarging (Heig Strait, Tyskland), intraokulær trykkmåling ved pneumotonometer (Topcon® CT-80), refraktometer (Topcon® KR-8900) , ukorrigert og best korrigert Snellen synsskarphet (UCVA og BCVA), Schirmir test 1, bruddtid for tårefilm (TBUT), hornhinnetopografi (Bausch & Lomb® Orb IIz), og endotelcelletetthetsmåling ved speilmikroskopi (Konan Noncon Robo-Sp-9000, USA). Undersøkelser utføres også ved 1 uke, 1, 3 og 6 måneders linsebruk. Et spesialskjema for alle emner fylles ut under hvert besøk Under hver undersøkelse vil emnene bli observert for tegn på konjunktival injeksjon, konjunktival papillær hypertrofi, pannusdannelse og hornhinneepiteliopati. Disse skiltene er gradert som vist i tabellen nedenfor.

Tegn 0=Normal 1=Mild 2=Moderat 3=Alvorlig konjunktival injeksjon Ingen Minimal åpenbar diffuse papiller Størrelse Ingen <0,25 mm 0,25-0,5 mm >0,5 mm Overfladisk Pannus Ingen pannus 1 kvadrant 2 kvadranter >=3 kvadranter Punktert epiteliopati Ingen <1/3 av hornhinnen 1/3-1/2 av hornhinnen Sammenflytende eller med epiteldefekt

Schirmir test 1 (basal sekresjonstest) utføres i 5 minutter og anses som unormal hvis filterstrimmelen våter <5 mm i lengde. TBUT på mindre enn 10 sekunder anses som unormal.

Impressionscytologi vil bli utført før linsebruk og 3 og 6 måneder etter linsebruk ved National Taiwan University. Nitrocellulosefilterpapir med porestørrelse 0,22 μm (Millipore GSWP 04700, Billerica, MA, U.S.A.) kuttes i strimler (ca. 4x8 mm). Etter en dråpe lokal bedøvelse (proparakain 0,5 %), absorberes overflødige tårer forsiktig av sterile bomullspinner. Nitrocellulosestrimmel plasseres på overflaten av limbal konjunktiva. Etter påføring av lett trykk, skrelles papirstrimlene av og festes umiddelbart i 95 % alkohol. Strimlene blir deretter farget ved bruk av periodic acid-Schiff (PAS; Sigma 395132, Hattiesburg, MS, USA) og undersøkt under lysmikroskopi ved 40X forstørrelse og gradert av maskeobservatører etter Saini et al's kriterier21 som følger. Grad 1: Små runde epitelceller med en kjerne-til-cytoplasma-rasjon på 1:2. Stort antall dypt positive celler tilstede. Et godt sammenflytende ark med celler oppnås vanligvis. Grad 2: Et godt celleark bestående av større polygonale epitelceller med redusert nukleocytoplasmatisk rasjon på 1:3. Begerceller redusert i antall, men fortsatt dypt PAS-positive. Grad 3: Større polygonale celler med ytterligere reduksjon i forhold mellom kjerne og cytoplasma. Redusert antall begerceller, med redusert farging. Grad 4: Større polygonale basofile celler med pyknotiske kjerner. Intracellulært keratin ofte påviselig. Fraværende begerceller. Bare noen få løse klumper var å få tak i. Begercelletetthet er også gradert ved å telle gjennomsnittlig antall celler per 100 epitelceller i minst fire høyeffektfelt (HPF). Grad 1: >30 begerceller/ 4 HPF. Grad 2: 15-30 begerceller/ 4 HPF. Grad 3: 5-15 begerceller/ 4 HPF. Grad 4: <5 begerceller/ 4 HPF.

In vivo konfokal mikroskopi av hornhinnen vil bli utført før linsebruk og 3 og 6 måneder etter linsebruk av en maskert eksaminator på alle fag ved National Taiwan University. En dråpe 0,5 % proparakainløsning og kunstige tårer ble dryppet rett før hver undersøkelse. Etter å ha bedt pasientene om å se rett frem, et in vivo konfokalt mikroskop (Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies, Padova, Italia) utstyrt med en standard 40x vannnedsenket frontlinse tok bilder av hele tykkelsen av den sentrale hornhinnen automatisk. Hver undersøkelse tok omtrent 1 til 3 minutter og registrerte 350 bilder i en avstand på 1,5 og 4 μm på z-aksen mellom påfølgende bilder. Under hvert besøk ble målingene gjentatt med 4 um z-intervall i 3 ganger etterfulgt av 1,5 um z-intervall i 3 ganger. Analyse av epitelcellers morfologi, epiteltykkelse og stromal reaksjon følger som er publisert av Chen et al22-24. Korneal nervemorfologi og -densitet vil også bli registrert og analysert.

Brukte kontaktlinser vil bli plassert i de medfølgende oppbevaringsveskene og bringes tilbake for å sjekke om linsen er fullstendig uten rifter eller fliser. Linsene brukes deretter til videre materialanalyse ved skanning av elektromikroskopi (SEM) og bakteriell adhesjonsbestemmelse med personlig finansiering. For SEM ble brukte linser festet i halvstyrke Karnovskys fikseringsmiddel (2 % paraformaldehyd og 2,5 % glutaraldehyd) etter skånsom vask. Fikseringsmidlet ble fjernet og destillert vann ble tilsatt for skylling. Rask frysing med nedsenking av flytende nitrogen ble utført før den ble plassert under vakuum over natten. Den konkave siden av prøvene ble montert på aluminiumstubber og sputterbelagt med gull for undersøkelse under SEM (JEOL Ltd, JSM 5300, Japan) ved 15kV under forskjellig forstørrelse. For bakteriell adhesjonsbestemmelse samles brukte linser i sterile plater og dyppes forsiktig tre ganger i PBS før de plasseres i eppendorf-rør som inneholder 1 ml PBS. Linsene masereres deretter og serielle fortynninger opp til 105 gjøres før plettering på Muller-Hinton agar. Agarplatene inkuberes over natten og kolonidannende enheter telles neste dag. Antall kolonier multiplisert med fortynningsfaktor delt på volumet som er belagt vil gi CFU/ml/per kontaktlinse.

Alle data vil bli lagt inn i Excel-regneark (Microsoft, Inc.) og analysert ved hjelp av SPSS-programvare for Windows (11.0, SPSS, Inc.). Sammenkoblede t-tester vil bli brukt for å sammenligne alle parametere før og etter bruk av de fargetonede kontaktlinsene.