Influence des lentilles de contact teintées de couleur cosmétique sur la surface oculaire

3. Méthodes Tous les sujets doivent remplir des informations de base et répondre à un questionnaire d'enquête avant et après le port de lentilles de contact. Les sujets seront examinés et testés avant d'être équipés de lentilles de contact teintées de couleur avec biomicroscopie à lampe à fente et coloration à la fluorescéine (détroit de Heig, Allemagne), mesure de la pression intraoculaire par pneumotonomètre (Topcon® CT-80), réfractomètre (Topcon® KR-8900) , acuité visuelle de Snellen non corrigée et mieux corrigée (UCVA et BCVA), test de Schirmir 1, temps de rupture du film lacrymal (TBUT), topographie cornéenne (Bausch & Lomb® Orb IIz) et mesure de la densité des cellules endothéliales par microscopie spéculaire (Konan Noncon Robo-Sp-9000, États-Unis). Des examens sont également effectués à 1 semaine, 1, 3 et 6 mois de port de lentilles. Un tableau spécial pour tous les sujets est rempli lors de chaque visite Lors de chaque examen, les sujets seront observés pour des signes d'injection conjonctivale, d'hypertrophie papillaire conjonctivale, de formation de pannus et d'épithéliopathie cornéenne. Ces signes sont classés comme indiqué dans le tableau ci-dessous.

Signes 0=Normal 1=Léger 2=Modéré 3=Sévère Injection conjonctivale Aucune Minimale Évidente Diffuse Taille des papilles Aucune <0,25 mm 0,25-0,5 mm > 0,5 mm Pannus superficiel Pas de pannus 1 quadrant 2 quadrants >= 3 quadrants Épithéliopathie ponctuée Aucune < 1/3 de la cornée 1/3-1/2 de la cornée Confluent ou avec défaut épithélial

Le test de Schirmir 1 (test de sécrétion basale) est effectué pendant 5 minutes et considéré comme anormal si la bande filtrante mouille <5 mm de long. Un TBUT inférieur à 10 secondes est considéré comme anormal.

La cytologie d'impression sera effectuée avant le port des lentilles et à 3 et 6 mois après le port des lentilles à l'Université nationale de Taiwan. Du papier filtre en nitrocellulose avec une taille de pores de 0,22 μm (Millipore GSWP 04700, Billerica, MA, U.S.A.) est découpé en bandes (environ 4 x 8 mm). Après l'application d'une goutte d'anesthésique topique (proparacaïne 0,5 %), l'excès de larmes est doucement absorbé par des cotons-tiges stériles. Des bandes de nitrocellulose sont placées à la surface de la conjonctive limbique. Après avoir appliqué une légère pression, les bandes de papier sont décollées et immédiatement fixées dans de l'alcool à 95 %. Les bandes sont ensuite colorées à l'aide d'acide périodique Schiff (PAS ; Sigma 395132, Hattiesburg, MS, USA) et examinées au microscope optique à un grossissement de 40X et classées par des observateurs de masque selon les critères de Saini et al21 comme suit. Grade 1 : Petites cellules épithéliales rondes avec un rapport noyau/cytoplasme de 1:2. Grand nombre de cellules profondément positives présentes. Une bonne feuille confluente de cellules est généralement obtenue. Grade2 : une bonne feuille de cellules constituée de cellules épithéliales polygonales plus grandes avec un rapport nucléocytoplasmique réduit de 1:3. Cellules caliciformes réduites en nombre, mais toujours profondément PAS-positives. Grade 3 : Cellules polygonales plus grandes avec une diminution supplémentaire du rapport noyau sur cytoplasme. Nombre réduit de cellules caliciformes, avec coloration réduite. Grade 4 : Cellules basophiles polygonales plus grandes avec des noyaux pycnotiques. Kératine intracellulaire souvent démontrable. Cellules caliciformes absentes. Seules quelques touffes lâches ont pu être obtenues. La densité des cellules caliciformes est également classée en comptant le nombre moyen de cellules pour 100 cellules épithéliales dans au moins quatre champs à haute puissance (HPF). Grade 1 : > 30 cellules caliciformes/ 4 HPF. Grade 2 : 15-30 cellules caliciformes/ 4 HPF. Grade 3 : 5-15 cellules caliciformes/ 4 HPF. Grade 4 : <5 cellules caliciformes/ 4 HPF.

L'imagerie par microscopie confocale in vivo de la cornée sera réalisée avant le port des lentilles et à 3 et 6 mois après le port des lentilles par un examinateur masqué sur tous les sujets à l'Université nationale de Taiwan. Une goutte de solution de proparacaïne à 0,5 % et de larmes artificielles a été instillée immédiatement avant chaque examen. Après avoir demandé aux patients de regarder droit devant eux, un microscope confocal in vivo (Confoscan 3.4.1 ; Nidek Technologies, Padoue, Italie) équipé d'une lentille frontale standard à immersion dans l'eau 40x a capturé automatiquement des images de toute l'épaisseur de la cornée centrale. Chaque examen durait environ 1 à 3 minutes et enregistrait 350 images à une distance de 1,5 et 4 μm sur l'axe z entre les images successives. Au cours de chaque visite, les mesures ont été répétées avec un intervalle z de 4 um 3 fois suivi d'un intervalle z de 1,5 um 3 fois. L'analyse de la morphologie des cellules épithéliales, de l'épaisseur épithéliale et de la réaction stromale s'ensuit et a été publiée par Chen et al22-24. La morphologie et la densité des nerfs cornéens seront également enregistrées et analysées.

Les lentilles de contact usagées seront placées dans les étuis de rangement fournis et rapportées pour vérifier l'intégralité de la lentille sans déchirure ni morceaux ébréchés. Les lentilles sont ensuite utilisées pour une analyse plus approfondie des matériaux par électromicroscopie à balayage (SEM) et détermination de l'adhérence bactérienne avec un financement personnel. Pour le SEM, les lentilles utilisées ont été fixées dans un fixateur de Karnovskys à moitié concentré (2 % de paraformaldéhyde et 2,5 % de glutaraldéhyde) après un lavage doux. Le fixateur a été retiré et de l'eau distillée a été ajoutée pour le rinçage. Une congélation rapide avec immersion dans l'azote liquide a été effectuée avant d'être placée sous vide pendant une nuit. Le côté concave des échantillons a été monté sur des talons en aluminium et recouvert d'or par pulvérisation cathodique pour examen au SEM (JEOL Ltd, JSM 5300, Japon) à 15 kV sous divers grossissements. Pour la détermination de l'adhérence bactérienne, les lentilles utilisées sont collectées dans des plaques stériles et trempées doucement trois fois dans du PBS avant d'être placées dans des tubes Eppendorf contenant 1 ml de PBS. Les lentilles sont ensuite macérées et des dilutions en série jusqu'à 105 sont effectuées avant d'être étalées sur de l'agar Muller-Hinton. Les plaques de gélose sont incubées pendant une nuit et les unités formant colonies sont comptées le lendemain. Le nombre de colonies multiplié par le facteur de dilution divisé par le volume étalé donnera le CFU/ml/par lentille de contact.

Toutes les données seront saisies dans une feuille de calcul Excel (Microsoft, Inc.) et analysées à l'aide du logiciel SPSS pour Windows (11.0, SPSS, Inc.). Des tests t appariés seront utilisés pour comparer tous les paramètres avant et après le port des lentilles de contact teintées.