Влияние косметических окрашенных контактных линз на поверхность глаза

3. Методы. Все испытуемые должны заполнить основную информацию и заполнить анкету до и после ношения контактных линз. Субъекты будут обследованы и протестированы перед подбором цветных тонированных контактных линз с биомикроскопией с щелевой лампой и окрашиванием флуоресцеином (пролив Хейга, Германия), измерением внутриглазного давления с помощью пневмотонометра (Topcon® CT-80), рефрактометра (Topcon® KR-8900). , нескорректированная и максимально скорректированная острота зрения по Снеллену (UCVA и BCVA), тест Ширмира 1, время разрыва слезной пленки (TBUT), топография роговицы (Bausch & Lomb® Orb IIz) и измерение плотности эндотелиальных клеток с помощью зеркальной микроскопии (Konan Noncon Робо-Сп-9000, США). Обследования также проводятся через 1 неделю, 1, 3 и 6 месяцев ношения линз. Специальная таблица для всех испытуемых заполняется во время каждого визита. Во время каждого осмотра у испытуемых будут наблюдаться признаки инъекций конъюнктивы, папиллярной гипертрофии конъюнктивы, образования паннуса и эпителиопатии роговицы. Эти знаки классифицируются, как показано в таблице ниже.

Признаки 0=Нормальный 1=Легкий 2=Умеренный 3=Выраженный Инъекция конъюнктивы Нет Минимальный Очевидный Диффузный Размер сосочков Нет <0,25 мм 0,25-0,5 мм >0,5 мм Поверхностный паннус Паннус отсутствует 1 квадрант 2 квадранта >=3 квадранта Точечная эпителиопатия Нет <1/3 роговицы 1/3-1/2 роговицы Сливной или с дефектом эпителия

Тест Ширмира 1 (тест на базальную секрецию) проводится в течение 5 минут и считается ненормальным, если полоска фильтра смачивается <5 мм в длину. TBUT менее 10 секунд считается ненормальным.

Импрессионная цитология будет проводиться до ношения линз и через 3 и 6 месяцев после ношения линз в Национальном университете Тайваня. Нитроцеллюлозную фильтровальную бумагу с размером пор 0,22 мкм (Millipore GSWP 04700, Биллерика, Массачусетс, США) разрезают на полоски (примерно 4x8 мм). После применения капли местного анестетика (пропаракаин 0,5 %) излишки слез аккуратно всасываются стерильными ватными тампонами. На поверхность лимбальной конъюнктивы накладывают нитроцеллюлозную полоску. После легкого надавливания бумажные полоски отрываются и немедленно фиксируются в 95% спирте. Затем полоски окрашивают с использованием периодической кислоты-Шиффа (PAS; Sigma 395132, Хаттисберг, штат Массачусетс, США) и исследуют под световой микроскопией при 40-кратном увеличении и оценивают с помощью наблюдателей в маске в соответствии с критериями Saini et al.21 следующим образом. 1 степень: небольшие круглые эпителиальные клетки с соотношением ядра и цитоплазмы 1:2. Присутствует большое количество глубоко положительных клеток. Обычно получают хороший сливающийся слой клеток. Степень 2: Хороший клеточный пласт, состоящий из более крупных полигональных эпителиальных клеток с уменьшенным ядерно-цитоплазматическим соотношением 1:3. Бокаловидные клетки уменьшены в количестве, но все еще глубоко PAS-позитивны. Степень 3: более крупные полигональные клетки с дальнейшим снижением отношения ядра к цитоплазме. Уменьшено количество бокаловидных клеток с уменьшенным окрашиванием. Степень 4: более крупные полигональные базофильные клетки с пикнотическими ядрами. Часто выявляется внутриклеточный кератин. Отсутствуют бокаловидные клетки. Было получено только несколько рыхлых комков. Плотность бокаловидных клеток также оценивают путем подсчета среднего количества клеток на 100 эпителиальных клеток по крайней мере в четырех полях высокой мощности (HPF). Степень 1: >30 бокаловидных клеток/4 HPF. 2 степень: 15-30 бокаловидных клеток/4 HPF. 3 степень: 5-15 бокаловидных клеток/4 HPF. Степень 4: <5 бокаловидных клеток/4 HPF.

Конфокальная микроскопия роговицы in vivo будет проводиться до ношения линз и через 3 и 6 месяцев после ношения линз одним исследователем в маске для всех субъектов в Национальном университете Тайваня. Непосредственно перед каждым исследованием закапывали по одной капле 0,5% раствора пропаракаина и искусственной слезы. После того, как пациентов попросили смотреть прямо перед собой, конфокальный микроскоп in vivo (Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies, Падуя, Италия), оснащенный стандартной 40-кратной иммерсионной передней линзой с водной иммерсией, автоматически захватывает изображения всей толщины центральной части роговицы. Каждое исследование занимало приблизительно от 1 до 3 минут и регистрировало 350 изображений на расстоянии 1,5 и 4 мкм по оси z между последовательными изображениями. Во время каждого визита измерения повторялись с z-интервалом 4 мкм 3 раза, а затем с z-интервалом 1,5 мкм 3 раза. Далее следует анализ морфологии эпителиальных клеток, толщины эпителия и стромальной реакции, опубликованный Chen et al.22-24. Морфология и плотность нерва роговицы также будут записаны и проанализированы.

Использованные контактные линзы будут помещены в предоставленные футляры для хранения и возвращены для проверки целостности линзы без разрывов или сколов. Затем линзы используются для дальнейшего анализа материала с помощью сканирующей электромикроскопии (СЭМ) и определения бактериальной адгезии при личном финансировании. Для СЭМ использованные линзы фиксировали фиксатором Карновского половинной концентрации (2% параформальдегида и 2,5% глутарового альдегида) после бережной промывки. Фиксатор удаляли и добавляли дистиллированную воду для промывки. Быстрое замораживание с погружением в жидкий азот производили перед помещением в вакуум на ночь. Вогнутая сторона образцов устанавливалась на алюминиевые штифты и напылялась золотом для исследования в РЭМ (JEOL Ltd, JSM 5300, Япония) при 15 кВ при различном увеличении. Для определения бактериальной адгезии использованные линзы собирают в стерильные планшеты и осторожно трижды погружают в PBS перед помещением в пробирки Эппендорф, содержащие 1 мл PBS. Затем линзы мацерируют и проводят серийные разведения до 105 перед посевом на агар Мюллера-Хинтона. Чашки с агаром инкубируют в течение ночи и на следующий день подсчитывают колониеобразующие единицы. Количество колоний, умноженное на коэффициент разбавления, разделенное на объем посева, даст КОЕ/мл/на контактную линзу.

Все данные будут введены в электронную таблицу Excel (Microsoft, Inc.) и проанализированы с использованием программного обеспечения SPSS для Windows (11.0, SPSS, Inc.). Для сравнения всех параметров до и после ношения цветных контактных линз будут использоваться парные t-тесты.