Influência de lentes de contato coloridas cosméticas na superfície ocular

3. Métodos Todos os indivíduos devem preencher informações básicas e responder a um questionário antes e depois do uso das lentes de contato. Os indivíduos serão examinados e testados antes de serem adaptados para lentes de contato coloridas com biomicroscopia de lâmpada de fenda e coloração com fluoresceína (Heig Strait, Alemanha), medição da pressão intraocular por pneumotonometria (Topcon® CT-80), refratômetro (Topcon® KR-8900) , acuidade visual de Snellen não corrigida e melhor corrigida (UCVA e BCVA), teste de Schirmir 1, tempo de ruptura do filme lacrimal (TBUT), topografia corneana (Bausch & Lomb® Orb IIz) e medição da densidade celular endotelial por microscopia especular (Konan Noncon Robo-Sp-9000, EUA). Os exames também são realizados em 1 semana, 1, 3 e 6 meses de uso das lentes. Um gráfico especial para todos os indivíduos é preenchido durante cada visita. Durante cada exame, os indivíduos serão observados quanto a sinais de injeção conjuntival, hipertrofia papilar conjuntival, formação de pannus e epiteliopatia corneana. Esses sinais são graduados conforme mostrado na tabela abaixo.

Sinais 0=Normal 1=Leve 2=Moderado 3=Grave Injeção Conjuntival Nenhum Mínimo Óbvio Difuso Tamanho das Papilas Nenhum <0,25 mm 0,25-0,5 mm >0,5mm Superficial Pannus Sem pannus 1 quadrante 2 quadrantes >=3 quadrantes Epiteliopatia Pontilhada Nenhuma <1/3 da córnea 1/3-1/2 da córnea Confluente ou com defeito epitelial

O teste de Schirmir 1 (teste de secreção basal) é realizado por 5 minutos e considerado anormal se a tira do filtro molhar <5 mm de comprimento. TBUT de menos de 10 segundos é considerado anormal.

A citologia de impressão será realizada antes do uso das lentes e 3 e 6 meses após o uso das lentes na National Taiwan University. Papel de filtro de nitrocelulose com tamanho de poro de 0,22 μm (Millipore GSWP 04700, Billerica, MA, EUA) é cortado em tiras (cerca de 4x8 mm). Após a aplicação de uma gota de anestésico tópico (proparacaína 0,5%), o excesso de lágrimas é suavemente absorvido por cotonetes estéreis. A tira de nitrocelulose é colocada na superfície da conjuntiva limbal. Após uma leve pressão, as tiras de papel são destacadas e imediatamente fixadas em álcool 95%. As tiras são então coradas com ácido periódico-Schiff (PAS ; Sigma 395132, Hattiesburg, MS, EUA) e examinadas sob microscopia de luz com aumento de 40X e classificadas por observadores de máscara seguindo os critérios de Saini et al21 como segue. Grau 1: Células epiteliais redondas pequenas com uma relação núcleo-citoplasma de 1:2. Grande número de células profundamente positivas presentes. Uma boa folha confluente de células é geralmente obtida. Grau 2: Um bom lençol celular consistindo de células epiteliais poligonais maiores com uma razão nucleocitoplasmática diminuída de 1:3. Células caliciformes reduzidas em número, mas ainda profundamente PAS-positivas. Grau 3: Células poligonais maiores com uma diminuição adicional na relação núcleo/citoplasma. Número reduzido de células caliciformes, com coloração reduzida. Grau 4: Células basófilas poligonais maiores com núcleos picnóticos. Queratina intracelular frequentemente demonstrável. Células caliciformes ausentes. Apenas alguns aglomerados soltos foram obtidos. A densidade das células caliciformes também é graduada contando o número médio de células por 100 células epiteliais em pelo menos quatro campos de alta potência (HPF). Grau 1: >30 células caliciformes/4 HPF. Grau 2: 15-30 células caliciformes/4 HPF. Grau 3: 5-15 células caliciformes/4 HPF. Grau 4: <5 células caliciformes/4 HPF.

A imagem de microscopia confocal in vivo da córnea será realizada antes do uso da lente e 3 e 6 meses após o uso da lente por um examinador mascarado em todos os indivíduos na National Taiwan University. Uma gota de solução de proparacaína a 0,5% e lágrima artificial foi instilada imediatamente antes de cada exame. Depois de pedir aos pacientes que olhem para a frente, um microscópio confocal in vivo (Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies, Padova, Itália) equipado com uma lente frontal padrão de imersão em água 40x capturou imagens da espessura total da córnea central automaticamente. Cada exame levou aproximadamente 1 a 3 minutos e registrou 350 imagens a uma distância de 1,5 e 4 μm no eixo z entre imagens sucessivas. Durante cada visita, as medições foram repetidas com intervalo z de 4 um por 3 vezes, seguido de intervalo z de 1,5 um por 3 vezes. A análise da morfologia das células epiteliais, espessura epitelial e reação estromal segue publicada por Chen et al22-24. A morfologia e densidade do nervo corneano também serão registradas e analisadas.

As lentes de contato usadas serão colocadas nos estojos de armazenamento fornecidos e trazidas de volta para verificar a integridade das lentes sem rasgos ou pedaços lascados. As lentes são então usadas para análise adicional de material por eletromicroscopia de varredura (SEM) e determinação de adesão bacteriana com financiamento pessoal. Para SEM, as lentes usadas foram fixadas em meio fixador de Karnovskys (2% de paraformaldeído e 2,5% de glutaraldeído) após lavagem suave. O fixador foi removido e adicionou-se água destilada para o enxágue. O congelamento rápido com imersão em nitrogênio líquido foi feito antes de ser colocado sob vácuo durante a noite. O lado côncavo das amostras foi montado em tocos de alumínio e revestido com ouro para exame sob SEM (JEOL Ltd, JSM 5300, Japão) a 15 kV sob várias ampliações. Para determinação da adesão bacteriana, as lentes usadas são coletadas em placas estéreis e cuidadosamente mergulhadas três vezes em PBS antes de serem colocadas em tubos eppendorf contendo 1ml de PBS. As lentes são então maceradas e diluições seriadas até 105 são feitas antes do plaqueamento em ágar Muller-Hinton. As placas de ágar são incubadas durante a noite e as unidades formadoras de colônias são contadas no dia seguinte. O número de colônias multiplicado pelo fator de diluição dividido pelo volume plaqueado resultará em CFU/ml/por lente de contato.

Todos os dados serão digitados em planilha Excel (Microsoft, Inc.) e analisados ​​no software SPSS para Windows (11.0, SPSS, Inc.). Testes t pareados serão usados ​​para comparar todos os parâmetros antes e depois do uso das lentes de contato coloridas.