Wpływ kosmetycznych kolorowych soczewek kontaktowych na powierzchnię oka

3. Metody Wszyscy badani są zobowiązani do wypełnienia podstawowych informacji i wypełnienia ankiety przed i po założeniu soczewek kontaktowych. Uczestnicy zostaną zbadani i przetestowani przed dopasowaniem barwionych soczewek kontaktowych za pomocą biomikroskopii w lampie szczelinowej i barwienia fluoresceiną (Cieśnina Heiga, Niemcy), pomiaru ciśnienia wewnątrzgałkowego za pomocą pneumotonometrii (Topcon® CT-80), refraktometru (Topcon® KR-8900) , nieskorygowana i najlepiej skorygowana ostrość wzroku Snellena (UCVA i BCVA), test Schirmira 1, czas przerwania filmu łzowego (TBUT), topografia rogówki (Bausch & Lomb® Orb IIz) oraz pomiar gęstości komórek śródbłonka za pomocą mikroskopii zwierciadlanej (Konan Noncon Robo-Sp-9000, USA). Badania przeprowadza się również po 1 tygodniu, 1, 3 i 6 miesiącach noszenia soczewek. Podczas każdej wizyty wypełniany jest specjalny arkusz dla wszystkich pacjentów. Podczas każdego badania pacjenci będą obserwowani pod kątem objawów wstrzyknięcia do spojówki, przerostu brodawek spojówkowych, powstawania łuszczki i epiteliopatii rogówki. Znaki te są oceniane zgodnie z poniższą tabelą.

Oznaki 0=Normalne 1=Łagodne 2=Umiarkowane 3=Ciężkie Wstrzyknięcie do spojówki Brak Minimalne widoczne rozlane Rozmiar brodawek Brak <0,25 mm 0,25-0,5 mm >0,5 mm Łuska powierzchowna Brak łuszczki 1 ćwiartka 2 ćwiartki >=3 ćwiartki Punktowa epiteliopatia Brak <1/3 rogówki 1/3-1/2 rogówki Zlewny lub z ubytkiem nabłonka

Test Schirmira 1 (test wydzielania podstawowego) jest wykonywany przez 5 minut i uważany za nieprawidłowy, jeśli pasek filtrujący zwilży się na długości <5 mm. TBUT poniżej 10 sekund uważa się za nieprawidłowe.

Cytologia wyciskowa zostanie przeprowadzona przed założeniem soczewek oraz 3 i 6 miesięcy po ich założeniu na National Taiwan University. Bibułę filtracyjną nitrocelulozową o wielkości porów 0,22 μm (Millipore GSWP 04700, Billerica, MA, USA) pocięto na paski (około 4 x 8 mm). Po zastosowaniu kropli miejscowego środka znieczulającego (proparakaina 0,5%) nadmiar łez jest delikatnie wchłaniany za pomocą sterylnych wacików. Paski nitrocelulozowe umieszcza się na powierzchni spojówki rąbkowej. Po lekkim naciśnięciu paski papieru są odrywane i natychmiast utrwalane w 95% alkoholu. Paski są następnie barwione przy użyciu kwasu nadjodowego-Schiffa (PAS; Sigma 395132, Hattiesburg, MS, USA) i badane pod mikroskopem świetlnym przy 40-krotnym powiększeniu i oceniane przez obserwatorów w masce zgodnie z kryteriami Sainiego i wsp.21 w następujący sposób. Stopień 1: Małe, okrągłe komórki nabłonkowe o stosunku jądra do cytoplazmy wynoszącym 1:2. Obecna duża liczba głęboko dodatnich komórek. Zwykle uzyskuje się dobry konfluentny arkusz komórek. Stopień 2: dobry arkusz komórek składający się z większych wielokątnych komórek nabłonkowych o zmniejszonym stosunku nukleocytoplazmatycznym 1:3. Liczba komórek kubkowych zmniejszyła się, ale nadal są głęboko PAS-dodatnie. Stopień 3: Większe komórki wielokątne z dalszym spadkiem stosunku jądra do cytoplazmy. Zmniejszona liczba komórek kubkowych, ze zmniejszonym wybarwieniem. Stopień 4: Większe wielokątne komórki zasadochłonne z jądrami piknotycznymi. Wewnątrzkomórkowa keratyna jest często widoczna. Brak komórek kubkowych. Można było uzyskać tylko kilka luźnych kęp. Gęstość komórek kubkowych ocenia się również przez zliczenie średniej liczby komórek na 100 komórek nabłonka w co najmniej czterech polach o dużej mocy (HPF). Stopień 1: >30 komórek kubkowych / 4 HPF. Stopień 2: 15-30 komórek kubkowych/ 4 HPF. Stopień 3: 5-15 komórek kubkowych/ 4 HPF. Stopień 4: <5 komórek kubkowych/4 HPF.

Obrazowanie rogówki za pomocą mikroskopii konfokalnej in vivo zostanie wykonane przed założeniem soczewek oraz 3 i 6 miesięcy po ich założeniu przez jednego zamaskowanego egzaminatora we wszystkich przedmiotach na National Taiwan University. Bezpośrednio przed każdym badaniem wkroplono jedną kroplę 0,5% roztworu proparakainy i sztucznych łez. Po poproszeniu pacjentów o patrzenie prosto przed siebie mikroskop konfokalny in vivo (Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies, Padova, Włochy) wyposażony w standardową przednią soczewkę immersyjną 40x automatycznie rejestrował obrazy całej grubości centralnej rogówki. Każde badanie trwało około 1 do 3 minut i rejestrowało 350 obrazów w odległości 1,5 i 4 μm na osi z pomiędzy kolejnymi obrazami. Podczas każdej wizyty pomiary powtarzano 3 razy z odstępem z 4 µm, a następnie 3 razy z odstępem 1,5 µm. Analiza morfologii komórek nabłonka, grubości nabłonka i reakcji zrębu jest następująca po tym, co zostało opublikowane przez Chen i wsp.22-24. Rejestrowana i analizowana będzie również morfologia i gęstość nerwu rogówki.

Zużyte soczewki kontaktowe zostaną umieszczone w dostarczonych pojemnikach do przechowywania i przyniesione z powrotem w celu sprawdzenia kompletności soczewek bez rozdarć lub odprysków. Soczewki są następnie wykorzystywane do dalszej analizy materiału za pomocą elektromikroskopii skaningowej (SEM) i oznaczania adhezji bakterii przy pomocy środków własnych. Do SEM soczewki utrwalono w utrwalaczu Karnowskiego o połowie mocy (2% paraformaldehydu i 2,5% aldehydu glutarowego) po delikatnym umyciu. Utrwalacz usunięto i dodano wodę destylowaną w celu przepłukania. Szybkie zamrażanie przez zanurzenie w ciekłym azocie przeprowadzono przed umieszczeniem pod próżnią na noc. Wklęsła strona próbek została zamontowana na aluminiowych trzpieniach i pokryta przez napylanie katodowe złotem do badania SEM (JEOL Ltd, JSM 5300, Japonia) przy 15 kV przy różnych powiększeniach. W celu określenia adhezji bakterii, zużyte soczewki zbiera się na sterylnych płytkach i delikatnie zanurza trzykrotnie w PBS przed umieszczeniem w probówkach Eppendorfa zawierających 1 ml PBS. Soczewki są następnie macerowane i wykonywane są seryjne rozcieńczenia do 105 przed umieszczeniem ich na agarze Muller-Hinton. Płytki agarowe inkubuje się przez noc, a jednostki tworzące kolonie liczy się następnego dnia. Liczba kolonii pomnożona przez współczynnik rozcieńczenia podzielona przez objętość na płytce daje CFU/ml/na soczewkę kontaktową.

Wszystkie dane zostaną wprowadzone do arkusza kalkulacyjnego Excel (Microsoft, Inc) i przeanalizowane za pomocą oprogramowania SPSS dla Windows (11.0, SPSS, Inc.). Sparowane testy t zostaną wykorzystane do porównania wszystkich parametrów przed i po noszeniu barwionych soczewek kontaktowych.