A kozmetikai színezett kontaktlencsék hatása a szem felszínére

3. Módszerek Minden alanynak ki kell töltenie az alapvető információkat, és ki kell töltenie egy kérdőívet a kontaktlencse viselése előtt és után. Az alanyokat megvizsgálják és tesztelik, mielőtt színes, színezett kontaktlencsére helyeznék őket réslámpás biomikroszkóppal és fluoreszceinfestéssel (Heig Strait, Németország), intraokuláris nyomásméréssel pneumotonométerrel (Topcon® CT-80), refraktométerrel (Topcon® KR-8900) , korrigálatlan és legjobban korrigált Snellen látásélesség (UCVA és BCVA), Schirmir teszt 1, könnyfilm felszakadási idő (TBUT), szaruhártya topográfia (Bausch & Lomb® Orb IIz) és endothel sejtsűrűség mérés tükörmikroszkóppal (Konan Noncon) Robo-Sp-9000, USA). A vizsgákat 1 hetes, 1, 3 és 6 hónapos lencseviseléskor is elvégezzük. Minden vizit alkalmával egy speciális táblázatot töltenek ki az összes alanyról. Minden vizsgálat során az alanyokon megfigyelik a kötőhártya injekció, a kötőhártya papilláris hipertrófiájának, a pannus képződésnek és a szaruhártya epitheliopathiájának jeleit. Ezeket a jeleket az alábbi táblázat szerint osztályozzuk.

Jelek 0 = Normál 1 = Enyhe 2 = Közepes 3 = Súlyos kötőhártya-injekció Nincs Minimális Nyilvánvaló Diffúz papillák Mérete Nincs <0,25 mm 0,25-0,5 mm >0,5 mm Felületes Pannus Nincs pannus 1 kvadráns 2 kvadráns >=3 kvadráns Pontos epitheliopathia Nincs A szaruhártya 1/3-a A szaruhártya 1/3-1/2 része Összefolyó vagy hámhibás

Az 1. Schirmir-tesztet (alapkiválasztási teszt) 5 percig végezzük, és abnormálisnak tekintjük, ha a szűrőcsík 5 mm-nél hosszabb ideig nedvesedik. A 10 másodpercnél rövidebb TBUT kórosnak minősül.

A lenyomat-citológiát a lencseviselés előtt, valamint a lencseviselés után 3 és 6 hónappal végezzük a Tajvani Nemzeti Egyetemen. A 0,22 μm pórusméretű nitrocellulóz szűrőpapírt (Millipore GSWP 04700, Billerica, MA, U.S.A.) csíkokra vágják (kb. 4x8 mm). Egy csepp helyi érzéstelenítő (proparacaine 0,5%) alkalmazása után a felesleges könnycseppeket steril pamut törlőkendők gyengéden felszívják. Nitrocellulóz csíkot helyeznek a limbális kötőhártya felületére. Enyhe nyomás kifejtése után a papírcsíkokat lehúzzuk és azonnal 95%-os alkoholban rögzítjük. A csíkokat ezután periodikus sav-Schiff (PAS; Sigma 395132, Hattiesburg, MS, USA) alkalmazásával megfestjük, és fénymikroszkóppal 40-szeres nagyítással megvizsgáljuk, és a maszkos megfigyelők osztályozzák a Saini és munkatársai kritériumai szerint21 az alábbiak szerint. 1. fokozat: Kicsi, kerek hámsejtek, a sejtmag és a citoplazma aránya 1:2. Nagyszámú mélyen pozitív sejt van jelen. Általában jó összefolyó sejtlapot kapunk. 2. fokozat: Jó sejtlap, amely nagyobb poligonális hámsejtekből áll, 1:3-ra csökkent nukleocitoplazmatikus aránnyal. A serlegsejtek száma csökkent, de még mindig mélyen PAS-pozitívak. 3. fokozat: Nagyobb sokszögű sejtek a sejtmag/citoplazma arány további csökkenésével. Csökkentett kehelysejtek száma, csökkent festődéssel. 4. fokozat: Nagyobb sokszögű bazofil sejtek piknotikus magokkal. Az intracelluláris keratin gyakran kimutatható. Hiányzó serlegsejtek. Csak néhány laza csomót lehetett megszerezni. A serlegsejtek sűrűségét úgy is osztályozzuk, hogy megszámoljuk a sejtek átlagos számát 100 hámsejtre legalább négy nagy teljesítményű mezőben (HPF). 1. fokozat: >30 serlegsejt/4 HPF. 2. fokozat: 15-30 serlegsejt/ 4 HPF. 3. fokozat: 5-15 serlegsejt/ 4 HPF. 4. fokozat: <5 serlegsejt/4 HPF.

A szaruhártya in vivo konfokális mikroszkópos leképezését a lencse viselése előtt, valamint a lencseviselés után 3 és 6 hónappal egy maszkos vizsgáló végzi a Tajvani Nemzeti Egyetemen minden alanyon. Közvetlenül minden vizsgálat előtt egy csepp 0,5%-os proparakain oldatot és műkönnyet csepegtettünk. Miután megkértük a betegeket, hogy nézzenek egyenesen előre, egy in vivo konfokális mikroszkóppal (Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies, Padova, Olaszország) szabványos, 40-szeres vízbe merülő elülső lencsével felszereltek, automatikusan a központi szaruhártya teljes vastagságáról készített felvételeket. Mindegyik vizsgálat körülbelül 1-3 percig tartott, és 350 képet rögzítettek a z-tengelyen 1,5 és 4 μm távolságban az egymást követő képek között. Minden egyes látogatás során a méréseket 3-szor 4 um z-intervallumtal, majd 3-szor 1,5 um z-intervallumtal megismételtük. A hámsejtek morfológiájának, a hámvastagságnak és a stromális reakciónak az elemzése következik, amelyet Chen és munkatársai publikáltak 22-24. A szaruhártya idegeinek morfológiáját és sűrűségét is rögzítik és elemzik.

A használt kontaktlencséket a mellékelt tárolódobozokba helyezzük és visszahozzuk, hogy ellenőrizzük a lencse teljességét szakadás vagy töredezettség nélkül. A lencséket ezután további anyagelemzésre használják pásztázó elektromikroszkópiával (SEM) és bakteriális adhéziós meghatározással személyes finanszírozással. A SEM esetében a használt lencséket enyhe mosás után félerősségű Karnovskys fixálóban (2% paraformaldehid és 2,5% glutáraldehid) rögzítettük. A fixálószert eltávolítottuk, és desztillált vizet adtunk hozzá az öblítéshez. A gyorsfagyasztást folyékony nitrogénbemerítéssel végeztük, mielőtt egy éjszakán át vákuum alá helyeztük. A minták homorú oldalát alumínium csonkra szereltük, és arannyal bevontuk a SEM (JEOL Ltd., JSM 5300, Japán) alatti vizsgálathoz 15 kV-on, különböző nagyítások mellett. A bakteriális adhézió meghatározásához a használt lencséket steril lemezekre gyűjtjük, és óvatosan háromszor PBS-be mártjuk, mielőtt 1 ml PBS-t tartalmazó eppendorf csövekbe helyeznénk. A lencséket ezután macerálják, és sorozathígításokat végeznek 105-ig, mielőtt Muller-Hinton agarra szélesztik. Az agarlemezeket egy éjszakán át inkubáljuk, és másnap megszámoljuk a telepképző egységeket. A telepek száma szorozva a hígítási tényezővel osztva a lemezelt térfogattal, a CFU/ml/kontaktlencsénkénti értéket kapjuk.

Minden adat bekerül az Excel táblázatba (Microsoft, Inc.), és az SPSS for Windows szoftverrel (11.0, SPSS, Inc.) elemzi. Páros t-tesztekkel hasonlítják össze az összes paramétert a színezett kontaktlencsék viselése előtt és után.