Inverkan av kosmetiska färgtonade kontaktlinser på ögonytan

3. Metoder Alla försökspersoner måste fylla i grundläggande information och svara på enkäten före och efter kontaktlinsbruk. Försökspersoner kommer att undersökas och testas innan de monteras på färgtonade kontaktlinser med spaltlampsbiomikroskopi och fluoresceinfärgning (Heig Strait, Tyskland), intraokulär tryckmätning med pneumotonometer (Topcon® CT-80), refraktometer (Topcon® KR-8900) , okorrigerad och bäst korrigerad Snellen synskärpa (UCVA och BCVA), Schirmir test 1, tårfilmsbrottstid (TBUT), hornhinnetopografi (Bausch & Lomb® Orb IIz) och endotelcelldensitetsmätning med spegelmikroskopi (Konan Noncon Robo-Sp-9000, USA). Undersökningar utförs också vid 1 veckas, 1, 3 och 6 månaders linsbruk. Ett speciellt schema för alla ämnen fylls i under varje besök Under varje undersökning kommer ämnen att observeras för tecken på konjunktival injektion, konjunktival papillär hypertrofi, pannusbildning och hornhinneepiteliopati. Dessa tecken är graderade enligt tabellen nedan.

Tecken 0=Normal 1=Lätt 2=Måttlig 3=Svår konjunktival injektion Ingen Minimal Uppenbar Diffus Papiller Storlek Ingen <0,25 mm 0,25-0,5 mm >0,5 mm Ytlig Pannus Ingen pannus 1 kvadrant 2 kvadranter >=3 kvadranter Punkterad epiteliopati Ingen <1/3 av hornhinnan 1/3-1/2 av hornhinnan Sammanflytande eller med epiteldefekt

Schirmir test 1 (basalt sekretionstest) utförs i 5 minuter och anses onormalt om filterremsan väter <5 mm lång. TBUT på mindre än 10 sekunder anses onormalt.

Impressionscytologi kommer att utföras före linsbruk och 3 och 6 månader efter linsbruk vid National Taiwan University. Nitrocellulosafilterpapper med porstorleken 0,22 μm (Millipore GSWP 04700, Billerica, MA, U.S.A.) skärs i remsor (ca 4x8 mm). Efter applicering av en droppe lokalbedövningsmedel (proparakain 0,5 %), absorberas överflödiga tårar försiktigt av sterila bomullspinnar. Nitrocellulosaremsor placeras på ytan av limbal konjunktiva. Efter lätt tryck skalas pappersremsorna av och fixeras omedelbart i 95 % alkohol. Remsorna färgas sedan med användning av periodic acid-Schiff (PAS; Sigma 395132, Hattiesburg, MS, USA) och undersöks under ljusmikroskopi vid 40X förstoring och graderas av maskobservatörer enligt Saini et al:s kriterier21 enligt följande. Grad 1: Små runda epitelceller med ett förhållande mellan kärna och cytoplasma på 1:2. Stort antal djupt positiva celler närvarande. Ett bra sammanflytande ark av celler erhålls vanligtvis. Grad 2: Ett bra cellark bestående av större polygonala epitelceller med ett minskat nukleocytoplasmatiskt förhållande på 1:3. Bägareceller minskade i antal, men fortfarande djupt PAS-positiva. Grad 3: Större polygonala celler med en ytterligare minskning av förhållandet mellan kärna och cytoplasma. Minskat antal bägareceller, med minskad färgning. Grad 4: Större polygonala basofila celler med pyknotiska kärnor. Intracellulärt keratin ofta påvisbart. Frånvarande bägareceller. Endast ett fåtal lösa klumpar gick att få tag på. Bägarens celltäthet graderas också genom att räkna det genomsnittliga antalet celler per 100 epitelceller i minst fyra högeffektfält (HPF). Grad 1: >30 bägareceller/ 4 HPF. Grad 2: 15-30 bägareceller/ 4 HPF. Grad 3: 5-15 bägareceller/ 4 HPF. Grad 4: <5 bägareceller/4 HPF.

In vivo konfokal mikroskopi av hornhinnan kommer att utföras före linsbruk och 3 och 6 månader efter linsbruk av en maskerad examinator på alla ämnen vid National Taiwan University. En droppe 0,5 % proparakainlösning och konstgjorda tårar instillerades omedelbart före varje undersökning. Efter att ha bett patienterna att titta rakt fram, ett in vivo konfokalmikroskop (Confoscan 3.4.1; Nidek Technologies, Padova, Italien) utrustad med en standard 40x vattendoppande frontlins som automatiskt tog bilder av hela tjockleken av den centrala hornhinnan. Varje undersökning tog cirka 1 till 3 minuter och registrerade 350 bilder på ett avstånd av 1,5 och 4 μm på z-axeln mellan på varandra följande bilder. Under varje besök upprepades mätningarna med 4 um z-intervall för 3 gånger följt av 1,5 um z-intervall för 3 gånger. Analys av epitelcellers morfologi, epiteltjocklek och stromal reaktion följer som har publicerats av Chen et al22-24. Korneal nervmorfologi och täthet kommer också att registreras och analyseras.

Använda kontaktlinser kommer att placeras i de medföljande förvaringsfodral och tas tillbaka för att kontrollera om linsen är fullständig utan revor eller flisade bitar. Linserna används sedan för vidare materialanalys genom skanning av elektromikroskopi (SEM) och bakteriell vidhäftningsbestämning med personlig finansiering. För SEM fixerades använda linser i halvstyrka Karnovskys fixativ (2 % paraformaldehyd och 2,5 % glutaraldehyd) efter skonsam tvätt. Fixeringsmedlet avlägsnades och destillerat vatten tillsattes för sköljning. Snabb frysning med nedsänkning av flytande kväve gjordes innan den placerades under vakuum över natten. Den konkava sidan av proven monterades på aluminiumstubbar och sputterbelagd med guld för undersökning under SEM (JEOL Ltd, JSM 5300, Japan) vid 15 kV under olika förstoringar. För bestämning av bakteriell vidhäftning samlas använda linser i sterila plattor och doppas försiktigt tre gånger i PBS innan de placeras i eppendorf-rör innehållande 1 ml PBS. Linserna macereras sedan och serieutspädningar upp till 105 görs innan utplätering på Muller-Hinton agar. Agarplattorna inkuberas över natten och kolonibildande enheter räknas nästa dag. Antal kolonier multiplicerat med utspädningsfaktor dividerat med volymen som pläterats ger CFU/ml/per kontaktlins.

All data kommer att matas in i Excel-kalkylblad (Microsoft, Inc.) och analyseras med SPSS-programvara för Windows (11.0, SPSS, Inc.). Parade t-tester kommer att användas för att jämföra alla parametrar före och efter användning av de färgtonade kontaktlinserna.