メラノーマおよびその他のがんにおける循環腫瘍細胞 (CTC) の培養と特徴付け (CTC)

CTC と乳がん、結腸がん、前立腺がんの進行との間には強い相関関係が確立されています。 CTC の数は、多くの上皮癌の再発および生存の予後マーカーとして機能するようです。 残念ながら、現在の CTC アッセイは、循環メラノーマ細胞を確実に検出するのに効果的ではなく、アッセイ手順は細胞を損傷し、さらなる研究を妨げています。

この研究は、さらなる研究のために細胞を分離および保存するための新しいアプローチである TrueCells アッセイの感度と特異性を評価するように設計されています。

主な目的:

• TrueCells 技術を使用して、CTC の分離の実現可能性と再現性を評価します。
• 定量的 CTC 回収率の最適化
• これらの測定値と、免疫蛍光、脂質ベースの染色などの CTC 回復の他の方法との相関関係に関する予備データを提供します。

副次的な目的:

• 免疫蛍光 CTC アッセイと TrueCells CTC 培養と、客観的および免疫反応基準による治療への反応、無増悪生存期間、1 年および 2 年生存のランドマーク、がん患者の全生存期間との相関関係を調べます。
• 体細胞遺伝子変異の評価、および個々の腫瘍に関連する遺伝子およびタンパク質の発現パターン（家族性または遺伝性の変異を特定することを意図していない）のために長期腫瘍細胞株を分離し、薬物および生物学的感受性を試験する試み。
• 血漿 RNA および DNA を分離して、発現腫瘍特異的マーカー (例えば、チロシナーゼ、B-FRAF、V600E など) および転移関連遺伝子 (例えば、MSH-1、チミジル酸シンターゼなど) を評価します。
• 無傷の CTC の分離を促進するための新しい技術的アプローチの開発と最適化を継続するために、進行中の開発テストを実行します。

方法:

血液サンプルは、メラノーマ (200)、前立腺がん (200)、その他の固形腫瘍がん (最大 400)、良性血液疾患 (100)、および健康なボランティア (最大 100) の患者から収集されます。 疾患の進行中または治療反応中に選択された患者から連続サンプルを取得して、CTCと治療反応、無増悪生存期間、および全生存期間との潜在的な相関関係を調査できるようにします。 サンプルは直ちに匿名化され、数値コードが割り当てられ、日付が付けられ、TrueCells, LLC に送信されます。 寄付されると、サンプルの所有権は TrueCells, LLC に移ります。

調査研究には以下が含まれます：

• CTC は、2 本の血液チューブ (チューブ 1 および 2) のバフィー コート全体から調製された厚い塗抹標本の免疫蛍光染色を使用して個別にカウントされ、白血球および内皮細胞の不注意による混入を排除するために、適切な汎腫瘍モノクローナル一次抗体または確認二次抗体を含む脂質マーカーで染色されますサブセットを作成し、患者のがんの認識を確認します。
• 密度勾配遠心分離によって分離された白血球 (CTC を含む)。 バフィーコートを TrueCells 独自の細胞培養培地に播種し、腫瘍細胞を増殖させます (チューブ 3 & 4)。 細胞コロニーを列挙し、免疫蛍光染色によって同定されたコロニー数と比較した。
• 場合によっては、CTC を長期細胞株として増殖させることができます。 これらの細胞は、体細胞遺伝子変異や遺伝子およびタンパク質発現パターンの評価などのさらなる分析にかけられ、個々の腫瘍の特徴、ならびに薬物および生物学的薬剤の感受性を特定することができます。 このアプリケーションでまだ識別または予測されていない、これらの識別されていない早期継代細胞株の in vitro 実験アプリケーションが追加される可能性があります。
• 血漿 (チューブ 3 & 4 からの白血球分離プロセスの副産物) を収集し、メラノーマ分子マーカーおよび転移性遺伝子発現の分子アッセイのための DNA および RNA 分離のために一時的に凍結します。 これらのサンプルは、アッセイ手順で消費されます。

臨床情報は医療記録から抽出され、匿名化され、パスワードで保護されたスプレッドシートに保存されます。 収集される情報には、年齢、性別、T、N、M ステータス、その他の健康状態、血清 LDH、特定の腫瘍マーカー (例: PSA)、循環腫瘍細胞 (市販のアッセイで分析された場合)、がんに存在する体細胞遺伝子変異 (例: 黒色腫患者における B-RAF V600E) 腫瘍の有糸分裂率、腫瘍の診断日、治療歴、局所および転移性進行の日付、および死亡日 (該当する場合)。