Odling och karaktärisering av cirkulerande tumörceller (CTC) vid melanom och andra cancerformer (CTC)

En stark korrelation har fastställts mellan CTC och utvecklingen av bröst-, kolon- och prostatacancer. Antalet CTC verkar fungera som en prognostisk markör för återfall och överlevnad i ett antal epitelial cancer. Tyvärr är nuvarande CTC-analyser inte effektiva för att tillförlitligt detektera cirkulerande melanomceller och analysprocedurerna skadar celler som förbjuder ytterligare studier.

Denna studie är utformad för att utvärdera känsligheten och specificiteten hos TrueCells-analysen, en ny metod för att isolera och bevara celler för vidare forskning.

Primära mål:

• Utvärdera genomförbarheten och reproducerbarheten av isolering av CTC med TrueCells teknologi.
• Optimera kvantitativ CTC-återvinning
• Tillhandahåll preliminära data om korrelation av dessa mätningar med andra metoder för CTC-återvinning såsom immunfluorescens, lipidbaserad färgning.

Sekundära mål:

• Utforska korrelationen mellan immunofluorescerande CTC-analys och TrueCells CTC-kulturer med svar på behandling av objektiva och immunsvarskriterier, progressionsfri överlevnad, 1 och 2-års överlevnad landmärken och total överlevnad hos cancerpatienter.
• Försök att isolera långvariga tumörcellinjer för utvärdering av somatiska genmutationer och gen- och proteinuttrycksmönster relaterade till individuella tumörer (ej avsedda att identifiera familjär eller ärftliga mutationer) och att testa läkemedels- och biologisk känslighet.
• Isolera plasma-RNA och DNA för att bedöma expressionstumörspecifika markörer (t.ex. tyrosinas, B-FRAF, V600E, etc.) och metastasassocierade gener (t.ex. MSH-1, tymidylatsyntas, etc.).
• Utför pågående utvecklingstester för att fortsätta utveckla och optimera nya tekniska metoder för att underlätta isolering av intakt CTC.

Metoder:

Blodprover kommer att samlas in från patienter med melanom (200), prostatacancer (200), andra solida tumörcancer (upp till 400), godartade hematologiska tillstånd (100) och friska frivilliga (upp till 100). Sekventiella prover kommer att erhållas från utvalda patienter under sjukdomsprogression eller behandlingssvar för att möjliggöra utforskning av potentiell korrelation mellan CTC med respons på behandling, progressionsfri överlevnad och total överlevnad. Prover kommer omedelbart att avidentifieras och tilldelas en numerisk kod, daterad och skickad till TrueCells, LLC. När det väl donerats övergår provets äganderätt till TrueCells, LLC.

Forskningsstudier inkluderar:

• CTC räknas oberoende med immunofluorescerande färgning av tjockt utstryk framställt från hela buffy coat av två rör med blod (rör 1 och 2), färgade med lämplig primär pan-tumör monoklonal antikropp eller lipidmarkörer med bekräftande sekundära antikroppar för att utesluta oavsiktlig inkludering av leukocyter och endotelceller delmängder och verifiera erkännande av patientens cancer.
• Leukocyter (innehållande CTC) isolerade genom densitetsgradientcentrifugering. Buffy coat är pläterad i TrueCells patenterade cellodlingsmedium och tumörceller odlas och förökas (rör 3 & 4). Cellkolonier räknas upp och jämförs med antalet kolonier som identifierats genom immunfluorescerande färgning.
• I vissa fall kan CTC kunna odlas som långtidscellinjer. Dessa celler kan bli föremål för ytterligare analys såsom utvärdering av somatiska genmutationer såväl som gen- och proteinuttrycksmönster för att identifiera egenskaper hos individuella tumörer såväl som läkemedels- och biologiska agenskänslighet. Det kan finnas ytterligare framtida experimentella in vitro-applikationer för dessa avidentifierade cellinjer med tidig passage som ännu inte har identifierats eller förutsetts i denna ansökan.
• Plasma (biprodukt av leukocytisoleringsprocess från rör 3 och 4) kommer att samlas in och frysas temporärt för DNA- och RNA-isolering för molekylära analyser av melanommolekylära markörer och metastaserande genuttryck. Dessa prover konsumeras i analysproceduren.

Klinisk information kommer att abstraheras från medicinska journaler och avidentifieras och lagras i ett lösenordsskyddat kalkylblad. Information som ska samlas in inkluderar ålder, kön, T-, N-, M-status, andra hälsotillstånd, serum-LDH, eventuella specifika tumörmarkörer (t.ex. PSA), cirkulerande tumörceller (om de analyseras med kommersiell analys), somatiska genetiska mutationer närvarande i cancer (t.ex. B-RAF V600E hos melanompatienter) mitotisk tumörfrekvens, datum för tumördiagnos, behandlingshistoria, datum för regional och metastatisk progression och dödsdatum (om tillämpligt).