Kultur og karakterisering av sirkulerende tumorceller (CTC) i melanom og andre kreftformer (CTC)

Det er etablert en sterk sammenheng mellom CTC og progresjon av bryst-, tykktarms- og prostatakreft. Antall CTC ser ut til å fungere som en prognostisk markør for tilbakefall og overlevelse i en rekke epitelkreft. Dessverre er nåværende CTC-analyser ikke effektive for pålitelig å oppdage sirkulerende melanomceller, og analyseprosedyrene skader celler som forbyr videre studier.

Denne studien er designet for å evaluere sensitiviteten og spesifisiteten til TrueCells-analysen, en ny tilnærming for å isolere og bevare celler for videre forskning.

Primære mål:

• Evaluer gjennomførbarhet og reproduserbarhet av isolasjon av CTC ved bruk av TrueCells-teknologi.
• Optimaliser kvantitativ CTC-gjenoppretting
• Gi foreløpige data angående korrelasjon av disse målingene med andre metoder for CTC-gjenoppretting som immunfluorescens, lipidbasert farging.

Sekundære mål:

• Utforsk korrelasjon av immunofluorescerende CTC-analyse og TrueCells CTC-kulturer med respons på behandling etter objektive og immunresponskriterier, progresjonsfri overlevelse, 1 og 2-års overlevelse landemerker og total overlevelse hos kreftpasienter.
• Forsøk på å isolere langsiktige tumorcellelinjer for evaluering av somatiske genmutasjoner og gen- og proteinekspresjonsmønstre relatert til individuelle tumorer (ikke ment å identifisere familiære eller arvelige mutasjoner), og for å teste medikament- og biologisk sensitivitet.
• Isoler plasma-RNA og DNA for å vurdere ekspresjonssvulstspesifikke markører (f.eks. tyrosinase, B-FRAF, V600E, etc.) og metastaseassosierte gener (f.eks. MSH-1, tymidylatsyntase, etc.).
• Utfør pågående utviklingstesting for å fortsette å utvikle og optimalisere nye tekniske tilnærminger for å lette isolering av intakt CTC.

Metoder:

Blodprøver vil bli tatt fra pasienter med melanom (200), prostatakreft (200), andre solide tumorkreftformer (opptil 400), godartede hematologiske tilstander (100) og friske frivillige (opptil 100). Sekvensielle prøver vil bli innhentet fra utvalgte pasienter under sykdomsprogresjon eller behandlingsrespons for å tillate utforskning av potensiell korrelasjon av CTC med respons på behandling, progresjonsfri overlevelse og total overlevelse. Prøver vil umiddelbart bli avidentifisert og tildelt en numerisk kode, datert og sendt til TrueCells, LLC. Når den er donert, overføres prøveeierskapet til TrueCells, LLC.

Forskningsstudier inkluderer:

• CTC telles uavhengig ved bruk av immunfluorescerende farging av tykt utstryk laget av hele buffy coat av to rør med blod (rør 1 og 2), farget med passende primære pan-tumor monoklonale antistoffer eller lipidmarkører med bekreftende sekundære antistoffer for å utelukke utilsiktet inkludering av leukocytter og endotel. undergrupper og verifisere anerkjennelse av pasientens kreft.
• Leukocytter (som inneholder CTC) isolert ved tetthetsgradientsentrifugering. Buffy coaten er belagt i TrueCells proprietære cellekulturmedium og tumorceller dyrket og forplantet (rør 3 og 4). Cellekolonier oppregnet og sammenlignet med antall kolonier identifisert ved immunfluorescerende farging.
• I noen tilfeller kan CTC være i stand til å dyrkes som langsiktige cellelinjer. Disse cellene kan bli gjenstand for ytterligere analyse som evaluering av somatiske genmutasjoner samt gen- og proteinekspresjonsmønstre for å identifisere karakteristikker til individuelle svulster så vel som følsomhet for medikamenter og biologiske midler. Det kan være ytterligere fremtidige in vitro eksperimentelle applikasjoner for disse avidentifiserte cellelinjene med tidlig passasje som ennå ikke er identifisert eller forventet i denne applikasjonen.
• Plasma (biprodukt av leukocyttisoleringsprosessen fra rør 3 og 4) vil bli samlet og midlertidig frosset for DNA- og RNA-isolering for molekylære analyser av melanommolekylære markører og metastatisk genuttrykk. Disse prøvene konsumeres i analyseprosedyren.

Klinisk informasjon vil bli abstrahert fra medisinske journaler og avidentifisert og lagret i et passordbeskyttet regneark. Informasjon som skal samles inn inkluderer alder, kjønn, T-, N-, M-status, andre helsetilstander, serum-LDH, eventuelle spesifikke tumormarkører (f.eks. PSA), sirkulerende tumorceller (hvis analysert ved kommersiell analyse), somatiske genetiske mutasjoner tilstede i kreft (f.eks. B-RAF V600E hos melanompasienter) mitotisk tumorfrekvens, dato for tumordiagnose, behandlingshistorie, dato for regional og metastatisk progresjon og dødsdato (hvis aktuelt).